Χρησιμοποιώντας διαγνωστικά PCR

Share Tweet Pin it

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) στη μοριακή βιολογία ονομάζεται πειραματική μέθοδος ανίχνευσης ιού. Επιτρέπει τη σημαντική αύξηση της συγκέντρωσης ορισμένων θραυσμάτων νουκλεϊκού οξέος (DNA) σε δείγματα βιολογικού υλικού, γεγονός που καθιστά δυνατό τον προσδιορισμό (αναγνώριση) και τον υπολογισμό τους.

Η ανάλυση πραγματοποιείται ως εξής. Γενετικό υλικό (δείγμα αίματος), το οποίο μπορεί να περιέχει το επιθυμητό γονίδιο, εισάγεται σε δοκιμαστικό σωλήνα. Εκεί επίσης τοποθετούνται εναρκτήρια-μικρά μήκη χημικά συντιθέμενα από το επιθυμητό γονίδιο.

Η πολυμεράση ϋΝΑ ή RNA προστίθεται επίσης στο δοχείο, είναι ικανή να δημιουργήσει μία αλυσίδα νουκλεϊνικού οξέος η οποία είναι εντελώς ταυτόσημη με την αρχική. Ένα σύνολο τεσσάρων ελεύθερων νουκλεοτιδίων, ένα ειδικό δομικό υλικό για RNA ή DNA, το ένα εκ των οποίων περιέχει ραδιενεργά σωματίδια φωσφόρου, εισάγεται επίσης στην προκύπτουσα σύνθεση.

Το προκύπτον μίγμα θερμαίνεται στους 95-96 ° C, εξαιτίας του οποίου οι δύο έλικες ϋΝΑ, οι οποίες είναι συνυφασμένες με τη συνήθη κατάσταση, ξετυλίγονται. Στη συνέχεια, το παρασκεύασμα ψύχεται, αυτή τη στιγμή οι εκκινητές προσκολλώνται στην επιθυμητή περιοχή του γονιδιώματος του ιού, χωρίς να επιτρέπεται πάλι στο RNA (ή το DNA) να σχηματίσει διπλή έλικα.

Κατά τη διάρκεια της ψύξης, η πολυμεράση αναζητά μια ελεύθερη αλυσίδα νουκλεοτιδίων. Για τη λειτουργία αυτού του ενζύμου, απαιτείται μια μονή αλυσίδα νουκλεοτιδίων. Επειδή η πολυμεράση γλιστράει κατά μήκος του κλώνου DNA (όπως ένας δακτύλιος από ένα σχοινί), δεν μπορεί να λειτουργήσει σε διπλή έλικα.

Μετά από αυτό, πραγματοποιείται ένας επαναλαμβανόμενος κύκλος θέρμανσης, εξαιτίας του οποίου διαχωρίζονται οι νουκλεοτιδικές αλυσίδες. Για κάθε έναν από αυτούς τους κύκλους PCR, η ποσότητα του επιθυμητού γονιδίου ηπατίτιδας στο δείγμα αυξάνεται σε μία γεωμετρική εξέλιξη και το υπόλοιπο γενετικό υλικό παράγεται γραμμικά.

Μετά τον καθαρισμό του διαλύματος των υπολειμμάτων νουκλεοτιδίων και τον διαχωρισμό των κλώνων ϋΝΑ από την παράμετρο μοριακού βάρους από την ηλεκτροφόρηση, είναι εύκολο να προσδιοριστεί αν υπάρχει το επιθυμητό γονίδιο στο δοκιμαστικό δείγμα ή όχι.

Πλεονεκτήματα της PCR

Μια εργαστηριακή μελέτη που χρησιμοποιεί τη μέθοδο PCR επιτρέπει την απόκτηση ακόμη περισσότερων πληροφοριών από απλώς την παρουσία του ιού RNA. Κατά τον προσδιορισμό της παραμέτρου του επιπέδου της ραδιενεργού ακτινοβολίας, είναι δυνατόν να προσδιοριστεί ποια ποσότητα γενετικού υλικού περιελήφθη αρχικά στο υπό εξέταση δείγμα. Στην περίπτωση της ηπατίτιδας, καθορίστε το επίπεδο του ιικού φορτίου.

Ένα άλλο πλεονέκτημα αυτής της μεθόδου είναι η πολύ υψηλή ευαισθησία της αντίδρασης CR. Είναι πολύ υψηλότερο από τις κλασικές μεθόδους ανίχνευσης ιών. Στην ιδανική περίπτωση, προκειμένου να εντοπιστεί το επιθυμητό γονίδιο, μόνο ένας ιός στο δείγμα είναι επαρκής για PCR.

Επιπλέον, η PCR είναι εξ ολοκλήρου συγκεκριμένη. Οι εκκινητές του δημιουργούνται με τέτοιο τρόπο ώστε να αντιστοιχούν πλήρως στα μοναδικά τμήματα των επιθυμητών γονιδίων, τα οποία δεν έχει άλλη αλληλουχία. Και τα δύο δακτυλικά αποτυπώματα είναι μοναδικά και σε κάθε γονίδιο υπάρχουν μοναδικές αλληλουχίες νουκλεοτιδίων.

Ποιοτική ανάλυση PCR

Η ποιοτική ανάλυση αποκαλύπτει μόνο την παρουσία ενός ιού στο αίμα. Αυτή η δοκιμή πρέπει να διεξάγεται για όλους τους ασθενείς στους οποίους έχει βρεθεί ότι έχουν αντισώματα στην ηπατίτιδα C. Το αποτέλεσμα μπορεί να είναι μόνο μία από δύο τιμές: "ανίχνευση" ή "ανίχνευση". Σε ένα υγιές άτομο, ο κανόνας (τιμή αναφοράς) πρέπει να "δεν ανιχνεύεται".

Υπάρχει επίσης μια ειδική ερμηνεία τέτοιων αποτελεσμάτων της διεξαχθείσας ποιοτικής έρευνας:

  • Το αποτέλεσμα είναι "ανακαλυφθεί". Αυτό σημαίνει ότι στο δείγμα βιολογικού υλικού που λαμβάνεται βρέθηκε από ένα θραύσμα RNA που είναι ειδικό για τον ιό της ηπατίτιδας C Συνεπώς, υπάρχει το γεγονός του ασθενούς με λοίμωξη από τον ιό της ηπατίτιδας Β με C. Εάν το αποτέλεσμα της ποιοτικής PCR είναι «ανακαλυφθεί», αυτό υποδεικνύει ότι τα αντίγραφα του ιού και αυτή τη στιγμή μολύνει νέα κύτταρα του ήπατος στο σώμα.
  • Το αποτέλεσμα δεν ανιχνεύεται. Τέτοια ετυμηγορία υποδεικνύει ότι στο δείγμα βιολογικού υλικού θραύσματος λαμβανόμενου RNA δεν ανιχνεύεται στο εργαστήριο, το οποίο είναι ειδικό για HCV RNA είτε ίδια συγκέντρωση της λοίμωξης παθογόνου στο δείγμα ήταν κάτω από το όριο ευαισθησίας της δοκιμής.

Στην οξεία φάση του RNA του ιού της ηπατίτιδας C, ποιοτικές μελέτες που χρησιμοποιούν την τεχνική PCR μπορούν να αποκαλυφθούν μετά από 1-2 εβδομάδες αμέσως μετά τη μόλυνση του σώματος, δηλαδή πολύ πριν την εμφάνιση αντισωμάτων στην ίδια την ηπατίτιδα.

Αναξιόπιστα αποτελέσματα αναλύσεων μιας τέτοιας έρευνας μπορούν να ληφθούν με:

  • μολυσμένο βιολογικό υλικό ·
  • παρουσία ηπαρίνης στο αίμα του ασθενούς.
  • παρουσία στο δείγμα χημικών ή πρωτεϊνικών ουσιών (αναστολέων) που επηρεάζουν διάφορα συστατικά της PCR.

Για την ποιοτική ανάλυση της PCR, δεν απαιτείται ειδική προετοιμασία του ασθενούς για τη μελέτη. Το φλεβικό αίμα χρησιμοποιείται ως υλικό.

Αξιολόγηση των αποτελεσμάτων

Οι ποιοτικές δοκιμές PCR έχουν έναν ορισμένο βαθμό ευαισθησίας και ανάλογα με την ακρίβεια της έρευνας και το επίπεδο του εξοπλισμού στο εργαστήριο μπορεί να κυμαίνεται μεταξύ 10 και 500 IU / ml.

Αυτό σημαίνει ότι εάν ο ιός στο δείγμα αίματος είναι παρόν σε πολύ χαμηλή συγκέντρωση (μικρότερη από το όριο ευαισθησίας του δεδομένου εργαστηρίου), ο ασθενής ασθενής μπορεί να προσδιοριστεί ως "μη ανιχνευόμενος". Εξαιτίας αυτού, όταν διεξάγεται η ποιοτική ανάλυση των PCR με χαμηλά επίπεδα ιαιμίας (ιός χαμηλή συγκέντρωση), για παράδειγμα, για ασθενείς που υποβάλλονται σε θεραπευτική αγωγή αντι-ιική θεραπεία, είναι σημαντικό να γνωρίζουμε, και το όριο ευαισθησίας του διαγνωστικού συστήματος.

Παραλλαγές διαγνωστικών συστημάτων

Για τον έλεγχο της ιολογικής ανταπόκρισης, συνιστάται η αντιική θεραπεία για τη χρήση διαγνωστικών συστημάτων με κατώφλι ευαισθησίας τουλάχιστον 50 IU / ml. Αυτά τα κριτήρια πληρούνται, για παράδειγμα: Αναλυτές Cobas Ampicolor HCV Test (γ ακρίβεια των 50 IU / ml) και RealBest HCV RNA (με ευαισθησία 15 IU / ml).

Σύμφωνα με τις συστάσεις του ΠΟΥ για τη δημιουργία ενός οριστική διάγνωση της ηπατίτιδας C, θα πρέπει να βασίζεται αποκλειστικά βάσει της τριπλής ανίχνευση του ιού RNA σε δείγματα ορού από έναν ασθενή με κανένα άλλο είδος δείκτη ηπατίτιδας.

Εκτός από τις μεθόδους PCR, μια μελέτη TMA (μέθοδος μεταγραφικού πολλαπλασιασμού) χρησιμοποιείται επίσης για την ανίχνευση του HCV RNA σε ασθενείς. Έχει το καλύτερο όριο ευαισθησίας (5-10 IU / ml), αλλά στη χώρα μας αυτή η μέθοδος δοκιμών δεν είναι ακόμη πολύ συνηθισμένη.

Το φάσμα των εντοπισμένων τροποποιήσεων των ιών

Αυτός ο ποιοτικός προσδιορισμός στον ορό της παρουσίας του RNA του ιού της ηπατίτιδας C καθιστά δυνατό τον προσδιορισμό διαφόρων γενότυπων αυτού του ιού. Επί του παρόντος, η επιστήμη γνωρίζει περισσότερους από έξι γονότυπους αυτού του ιού, καθώς και περίπου 10 υποτύπους της νόσου.

Οι ιοί 1, 2, 3 γονότυπων είναι συνηθισμένοι στη χώρα μας. Τα εργαστήρια μπορούν να αναγνωρίσουν τους ακόλουθους γονότυπους: 1α και 1β, 2α, 2β και 2γ και 3, 4, 5α και 6, ανεξάρτητα από τους υποτύπους. Για όλες τις τροποποιήσεις του ιού, η ειδικότητα της ανίχνευσης είναι 100%.

Ποσοτική ανάλυση της PCR

Χρησιμοποιώντας μια ποσοτική δοκιμή PCR, προσδιορίζεται το επίπεδο συγκέντρωσης του ιού της ηπατίτιδας σε δείγματα αίματος (ιικό φορτίο). Αυτή η δοκιμή για την ιαιμία (η συγκέντρωση του ιού) σας επιτρέπει να προσδιορίσετε τον αριθμό των μονάδων ενός συγκεκριμένου γενετικού υλικού (το πλέον ιικό RNA), το οποίο ανιχνεύεται σε μια ορισμένη ποσότητα. Σε αυτή την περίπτωση, προσδιορίστε τη συγκέντρωσή του σε 1 ml, που αντιστοιχεί σε 1 cu. δείτε

Οι ποσοτικές παράμετροι της ανάλυσης εκφράζονται σε αριθμούς, για τη χρήση αυτή ως μονάδες μέτρησης διεθνών μονάδων (IU) ανά χιλιοστόλιτρο (ml), που αναφέρονται ως ME / ml. Τώρα σε ορισμένα εργαστήρια η ποσότητα του ιού μπορεί να προσδιοριστεί σε άλλες μονάδες: ο αριθμός των αντιγράφων ανά ml, σημειώνεται ως αντίγραφα / ml.

  • Για την ηπατίτιδα C, μια τέτοια ποσοτική ανάλυση της PCR γίνεται λίγο πριν την έναρξη της θεραπείας. Στη συνέχεια, την 1η, 4η, 12η και 24η εβδομάδα. Η αξιολόγηση στη 12η εβδομάδα είναι ενδεικτική, επιτρέπει τον προσδιορισμό της αποτελεσματικότητας της θεραπείας.
  • Προετοιμασία για ανάλυση. Για την ποσοτική ανάλυση της PCR, δεν απαιτείται ειδική προετοιμασία του ασθενούς για τη μελέτη. Μισή ώρα πριν από τη δειγματοληψία, δεν πρέπει να καπνίζετε. Το φλεβικό αίμα χρησιμοποιείται ως εργαστηριακό υλικό.

Αξιολόγηση των αποτελεσμάτων

Για διαφορετικά συστήματα εργαστηριακών δοκιμών, υπάρχουν διάφοροι συντελεστές μετατροπής για αυτόν τον δείκτη σε IU / ml. Κατά μέσο όρο χρησιμοποιείται μια παράμετρος μετατροπής, στην οποία 4 αντίγραφα / ml = 1 IU / ml. Δηλαδή, εάν το εργαστήριο δώσει το αποτέλεσμα της ανάλυσης PCR 2,4 * 10 6 αντίγραφα / ml, τότε αυτή η παράμετρος πρέπει να διαιρείται με 4 και λαμβάνουμε 6 * 10 5 IU / ml.

Ένα υψηλό επίπεδο φορτίου 800.000 IU / ml θεωρείται υψηλό, το οποίο είναι περίπου ισοδύναμο με δείκτη 3.000.000 αντιγράφων / ml. Η χαμηλή ιαιμία, σύμφωνα με ορισμένους συγγραφείς, αντιστοιχεί στις παραμέτρους ποσοτικής PCR κάτω από 400.000 IU / ml.

Ως αποτέλεσμα της ποσοτικής δοκιμής, τα τελικά αποτελέσματα μπορούν να παραδοθούν όχι με τη μορφή ψηφιακής τιμής, αλλά: "κάτω από την περιοχή μέτρησης" ή "δεν ανιχνεύεται".

  • Αξιολόγηση: "κάτω από την περιοχή μέτρησης". Αυτό δείχνει ότι η ποσοτική δοκιμή απέτυχε να ανιχνεύσει ιικό RNA της ηπατίτιδας C, αλλά ο ίδιος ο ιός υπάρχει στον οργανισμό σε πολύ μικρές συγκεντρώσεις. Αυτό υποδεικνύεται από μια πρόσθετη ποιοτική δοκιμή, η οποία επιβεβαιώνει το γεγονός της παρουσίας του ιού.
  • Αξιολόγηση: "δεν ανιχνεύθηκε". Αυτό το αποτέλεσμα υποδεικνύει ότι η ποσοτική δοκιμή δεν ανίχνευσε ιό στο δείγμα RNA.

Η παράμετρος του ιικού φορτίου καθορίζει πρώτα απ 'όλα τον βαθμό της μολυσματικότητας της νόσου, το επίπεδο της "μολυσματικότητας" του ασθενούς. Όσο μεγαλύτερη είναι η συγκέντρωση του ιού στον ασθενή, τόσο μεγαλύτερη είναι η πιθανότητα να μεταφερθεί σε άλλους. Για παράδειγμα, όταν κάνετε σεξ με ένα άρρωστο άτομο ή μια κάθετη διαδρομή. Ένας τέτοιος ποσοτικός δείκτης βοηθά επίσης να προσδιοριστεί η αποτελεσματικότητα της θεραπείας του ασθενούς.

Η διεξαγωγή ποσοτικής ανάλυσης του PCC είναι σημαντική για την αντιική θεραπεία, αξιολογώντας την επιτυχία της και προγραμματίζοντας τη διάρκεια της πορείας. Έτσι, με την ταχεία απόκριση του σώματος στη θεραπεία και με χαμηλό βαθμό ιαιμίας, η διάρκεια της θεραπείας μπορεί να μειωθεί.

Με μια αργή μείωση της ποσοτικής παραμέτρου PCR, η αντιιική θεραπεία πρέπει να επεκταθεί ή να τροποποιηθεί. Αν το επίπεδο του ιϊκού φορτίου είναι χαμηλό, τότε αυτός είναι ένας ευνοϊκός παράγοντας της θεραπείας, εάν είναι υψηλός, τότε η εφαρμοζόμενη μέθοδος θεραπείας είναι αναποτελεσματική και τα φάρμακα ή οι μέθοδοι χρήσης τους πρέπει να αλλάξουν.

№ 321ΣΒ, ο ιός της ηπατίτιδας C, ο ορισμός RNA καχ. (HCV-RNA, ποιοτικό) στον ορό

Προσδιορισμός HCV RNA στον ορό με αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) με ανίχνευση σε πραγματικό χρόνο.

Επιλεγμένα θραύσμα - ειδικό RNA τμήμα Ανιχνεύσιμη γονότυπους HCV: 1α, 1β, 2α, 2β, 2γ, 2i, 3, 4, 5α, 6 ανεξάρτητα του υποτύπου. Η ειδικότητα του προσδιορισμού είναι 100%. Η ευαισθησία του προσδιορισμού είναι 60 IU / ml.

  • Κλινικά συμπτώματα ηπατίτιδας.
  • Προφυλακτικές μελέτες διαλογής (RNA του ιού της ηπατίτιδας C - ο πρώτος δείκτης για οξεία λοίμωξη).
  • Έρευνες ατόμων επαφής.
  • Διάγνωση της μικτής αιτιολογίας της ηπατίτιδας - η ταυτοποίηση του ηγετικού ιού.
  • Αναγνώριση του σταδίου ενεργού αναδιπλασιασμού του ιού σε χρόνια κατάσταση.
  • Έλεγχος της αποτελεσματικότητας της θεραπείας.
  • Κίρρωση του ήπατος.

Η ερμηνεία των αποτελεσμάτων της έρευνας περιέχει πληροφορίες για τον θεράποντα ιατρό και δεν αποτελεί διάγνωση. Οι πληροφορίες από αυτό το τμήμα δεν μπορούν να χρησιμοποιηθούν για αυτοδιάγνωση και αυτοθεραπεία. Η ακριβής διάγνωση γίνεται από το γιατρό, χρησιμοποιώντας τόσο τα αποτελέσματα αυτής της έρευνας όσο και τις απαραίτητες πληροφορίες από άλλες πηγές: αναμνησία, τα αποτελέσματα άλλων ερευνών κλπ.

Διάγνωση με PCR για ηπατίτιδα C

Όλοι δεν γνωρίζουν ποια είναι η μέθοδος διαγνωστικής PCR για την ηπατίτιδα C. Μια από τις πιο διαδεδομένες ομάδες ασθενειών είναι οι μολυσματικές ασθένειες της γαστρεντερικής οδού. Συχνά πάσχουν από στομάχι (έλκη), έντερα (κολίτιδα, εντερίτιδα) και ήπαρ (ηπατίτιδα).

Στο ήπαρ μεταξύ όλων των προαναφερθέντων οργάνων αποδίδεται το μεγαλύτερο βάρος. Στο σώμα, ο ρόλος του ήπατος είναι εξαιρετικά σημαντικός:

  1. Σχεδόν όλες οι μεταβολικές αντιδράσεις εμφανίζονται στο ήπαρ (εδώ είναι όλα τα ζωτικά συστατικά που επιτρέπουν στο σώμα να λειτουργεί πλήρως).
  2. Το ήπαρ είναι το κύριο όργανο που εκτελεί τη λειτουργία αποτοξίνωσης. Με τη βοήθειά του (ειδικά μέσω της χολής), αφαιρούνται πολλά υποστρώματα που μπορούν να προκαλέσουν δηλητηρίαση και να οδηγήσουν σε σοβαρές συνέπειες.

Δυστυχώς, πολλοί άνθρωποι δεν ακολουθούν την υγεία τους, εξαιτίας του τι αρχίζει να υποφέρει το ήπαρ. Συνήθως αναπτύσσεται ηπατίτιδα διαφόρων αιτιολογιών (ιογενής, τοξική).

Ορισμός της ηπατίτιδας

Η ιική ηπατίτιδα καταλαμβάνει ένα σημαντικό μέρος μεταξύ των ασθενειών του ήπατος. Η σοβαρότητα της πορείας της νόσου, η πολυπλοκότητα της θεραπείας, τα καθιστούν τα πρώτα μεταξύ των παθολογιών μιας άλλης φύσης αυτού του οργάνου.

Όλη η ηπατίτιδα χωρίζεται σε οξεία και χρόνια. Για την οξεία μεταφορά ηπατίτιδας Α και Β. Μεταξύ των χρόνιων στην πρώτη θέση είναι η ηπατίτιδα Γ.

Αυτή η ασθένεια προκαλείται από τον ιό της ηπατίτιδας C. Ένα χαρακτηριστικό χαρακτηριστικό είναι ότι η νόσος μπορεί να διαρκέσει για μεγάλο χρονικό διάστημα χωρίς κλινικές εκδηλώσεις.

Μεταδίδεται κυρίως μέσω του αίματος. Με τη ροή του αίματος, ο ιός εισέρχεται στο ήπαρ, όπου αρχίζει να πολλαπλασιάζεται στα κύτταρα του. Ως αποτέλεσμα της συσσώρευσης βιριόντων, συμβαίνει καταστροφή του μολυσμένου ηπατοκυττάρου. Σε απόκριση, αρχίζουν να παράγονται αντισώματα που αρχίζουν να προσβάλλουν τα υπολείμματα των ηπατοκυττάρων. Εξαιτίας αυτού, με την πάροδο του χρόνου, μια πισίνα είναι χτισμένη ενάντια στα ηπατικά κύτταρα, γεγονός που επιδεινώνει την πορεία της νόσου.

Λόγω του γεγονότος ότι η ασθένεια είναι malosimptomno ή ασυμπτωματική, και τα κλινικά συμπτώματα εμφανίζονται μόνο όταν σημαντική βλάβη των κυττάρων, αυτή η ασθένεια απαιτεί τη δημιουργία των διαγνωστικών μεθόδων για την ανίχνευση της παρουσίας της και λαμβάνει τα κατάλληλα μέτρα.

Διάγνωση της ηπατίτιδας C: ποιοτικές και ποσοτικές αναλύσεις

Επί του παρόντος, μέθοδοι όπως η ηπατική βιοψία, το ανοσογράφημα χρησιμοποιούνται για τη διάγνωση της ηπατίτιδας C.

Επιτρέπουν τον άμεσο προσδιορισμό της παρουσίας επηρεαζόμενων ηπατοκυττάρων (μελέτη βιοψίας ήπατος) ή συγκεκριμένων αντισωμάτων κατά μολυσμένων κυττάρων (ανοσογράφημα). Ωστόσο, υπάρχει μια μέθοδος που μπορεί να προσδιορίσει με αξιοπιστία την παρουσία του ίδιου του ιού. Αυτή η PCR είναι αλυσωτή αντίδραση πολυμεράσης.

Η ουσία αυτής της μεθόδου έγκειται στο γεγονός ότι κάτω από ορισμένες συνθήκες, εμφανίζεται η ανάπτυξη αλυσίδων RNA. Αυτό οφείλεται στο γεγονός ότι υπάρχουν θραύσματα του σωματιδίου του ιού στο αίμα ή στο δείγμα βιοψίας. Όταν συνδυάζονται με μερικά μόρια στο μέσο, ​​λαμβάνει χώρα η σύνθεση αλυσίδων συμπληρωματικών του ιικού RNA. Σε επακόλουθη ανάλυση και τη σύγκρισή τους με γνωστές νουκλεοτιδική αλληλουχία του HCV είναι δυνατό να προσδιοριστεί εάν υπάρχει ο ιός στο σώμα και αν η ηπατική βλάβη είναι παρούσα.

Η PCR διεξάγεται μετά την ανίχνευση συγκεκριμένων αντισωμάτων κατά του ιού της ηπατίτιδας στο αίμα. Μετά τη δοκιμή, το αποτέλεσμα αποδίδεται - το RNA "ανιχνεύεται" ή "δεν ανιχνεύεται". Περιστασιακά, μπορεί να πει "ανεπαρκές υλικό" - στην περίπτωση αυτή, μια επαναλαμβανόμενη ανάλυση για την ηπατίτιδα C.

Εάν ο αριθμός των ιικών σωματιδίων είναι μικρότερη από την ελάχιστη απαιτούμενη ποσότητα, τότε μπορούμε να μιλήσουμε για το γεγονός ότι η ηπατίτιδα Β δεν είναι παρόν, και το ελάχιστο ποσό του γενετικού υλικού θα μπορούσε να «σύγχυση» λόγω της μιμητισμό του γενετικού υλικού, ή μερικές αλληλουχίες νουκλεοτιδίων που πιθανότητα θα μπορούσε να συμπίπτει με εκείνη του ιού.

  1. PCR αρνητικά αποτελέσματα μπορεί να συμβεί όταν στην πραγματικότητα υπάρχουν ιικά σωματίδια στο αίμα, αλλά είναι τόσο μικρό (λοίμωξη παρουσιάστηκε πρόσφατα ή προηγείται από μακρά και εντατική αντιιική θεραπεία η ανάλυση) ότι το σύστημα δοκιμής απλά δεν ήταν σε θέση να προσδιορίσει σωστά τη συγκέντρωσή τους. RNA - "δεν ανιχνεύθηκε".
  2. Εάν η PCR έχει θετικό αποτέλεσμα, τότε υπάρχουν τόσα πολλά σωματίδια ιού στο αίμα που ο αριθμός τους υπερβαίνει το κατώτατο όριο της ευαισθησίας του συστήματος δοκιμής. Σε αυτήν την περίπτωση, ο κίνδυνος ανάπτυξης μολυσματικής διαδικασίας είναι υψηλός (ή υπάρχει ήδη σε ένα αρκετά παραμελημένο στάδιο). Συνήθως μια μεγάλη ποσότητα του ιού είναι ήδη μια ένδειξη για τη θεραπεία και την μεταγενέστερη μεταμόσχευση ήπατος.

Μερικές φορές η δοκιμή μπορεί να γίνει ψευδώς θετική ή ψευδώς αρνητική.

Ένα ψευδώς αρνητικό αποτέλεσμα της ηπατίτιδας PCR παρατηρείται όταν υπάρχουν μερικά συστατικά στο μέσο αντίδρασης που αναστέλλουν το σχηματισμό αντιγράφων του σωματιδίου του ιού. Εξαιτίας αυτού, δεν είναι δυνατόν να αποκτηθεί μια πραγματική εικόνα της κατάστασης του αίματος, η οποία συμβάλλει στη διέλευση του ιού και στην εξέλιξη της νόσου. Η αντίδραση μπορεί να επηρεαστεί από την παρουσία ηπαρίνης στο αίμα (λόγω της μείωσης του σχετικού ιξώδους του αίματος). Μια εσφαλμένη ερμηνεία της ανάλυσης είναι επίσης δυνατή όταν δεν πληρούνται οι συνθήκες μεταφοράς και αποθήκευσης του υλικού δοκιμής.

Ψευδώς θετικά αποτελέσματα, όταν διαγνωσθεί η ηπατίτιδα C, συχνά δίνεται σε PCR όταν μολύνεται ο δοκιμαστικός σωλήνας ή το μέσο εργασίας. Επιπλέον, παρατηρούνται θετικά αποτελέσματα παρουσία και ιών ηπατίτιδας άλλων ομάδων (λόγω διασταυρούμενης αντίδρασης).

Ποιοτική ανάλυση της PCR για την ανίχνευση της ηπατίτιδας C

Η παρουσία στο αίμα μεγάλου αριθμού κρυογλοβουλίνης επηρεάζει άμεσα τη συμπεριφορά της PCR. Εξαιτίας αυτού, πριν από την ανάλυση για την ηπατίτιδα C, είναι απαραίτητο να προσδιοριστεί στο αίμα η συγκέντρωσή τους, προκειμένου να ανιχνευθεί εκ των προτέρων η παραμόρφωση του αποτελέσματος και να αποφευχθεί.

Μετά τη διεξαγωγή των συγκεκριμένων δοκιμών γίνεται σαφές, αν υπάρχουν σωματίδια ιού αίματος. Όταν ορίζονται, συνιστάται η άμεση έναρξη αντιιικής θεραπείας προκειμένου να επιβραδυνθεί η εξέλιξη της διαδικασίας. Σε αντίθεση με την ηπατίτιδα Β, δεν υπάρχει πλήρης θεραπεία για την ηπατίτιδα C. η ασθένεια περνάει μόνο σε λανθάνουσα κατάσταση και αρχίζει να ρέει πιο αργά. Η ήττα του ήπατος είναι αναπόφευκτη. Στο τελευταίο στάδιο της διαδικασίας, όταν το συκώτι δεν ανταποκρίνεται πλέον στη λειτουργία του, μπορεί να χρειαστεί να μεταμοσχευθεί.

Η θεραπεία πραγματοποιείται κυρίως με δύο φάρμακα - ιντερφερόνη και ριμπαβιρίνη.

Η αποτελεσματικότητά τους στην επιβράδυνση της διαδικασίας της βλάβης των ηπατοκυττάρων αποδεικνύεται. Εν τω μεταξύ, είναι απαραίτητο να χορηγηθεί θεραπεία έγχυσης για να διευκολυνθεί η εργασία του ήπατος.

Όλοι οι ασθενείς που έχουν παρατηρήσει αύξηση του αριθμού των σωματιδίων του ιού στο αίμα είναι απαραίτητα στον απολογισμό του ηπατολόγου. Πολλές φορές το χρόνο συνιστάται να υποβληθούν σε προληπτική εξέταση για τον προσδιορισμό της εξέλιξης της διαδικασίας και την έγκαιρη ανίχνευση των ενδείξεων για μεταμόσχευση. Επιπλέον, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε και hepatoprotectors, αν και οι απόψεις των γιατρών είναι κάπως αποκλίνουσες. Μερικοί πιστεύουν ότι αυτά τα φάρμακα μπορούν να σταματήσουν τη διαδικασία και να προστατεύσουν τα μη σφραγισμένα ηπατοκύτταρα. Άλλοι είναι πεπεισμένοι ότι δεν έχει νόημα να τις παίρνουν και ότι πρέπει να διεξάγεται εντατική αντιιική θεραπεία.

Έτσι, η ηπατίτιδα C ανήκει στην κατηγορία των ασθενειών, η ανίχνευση των οποίων συνιστά μερικές δυσκολίες. Η βελτίωση των διαγνωστικών μεθόδων, καθώς και οι έγκαιρες προληπτικές εξετάσεις θα μειώσουν τη συχνότητα εμφάνισης αυτής της νόσου. Είναι επίσης σημαντικό να αποφευχθεί αυτή η ασθένεια. Θα πρέπει να αποφεύγετε προσεκτικά την επαφή με το αίμα, να αρνηθείτε να παίρνετε φάρμακα, μόνο τότε αυτή η ασθένεια θα εξαλειφθεί. Το κύριο πράγμα στην πρόληψη και θεραπεία είναι η συνειδητή στάση του ασθενούς για την υγεία του.

Ανάλυση της PCR για ηπατίτιδα

PCR ON HEPATITIS C

  1. RNA της ηπατίτιδας C ( «PCR-ποιότητας») - ανίχνευσης στην ανάλυση του αίματος είναι μια απόδειξη της οξείας ή χρόνιας ηπατίτιδας C προσδιορίζεται από την 2η εβδομάδα της λοίμωξης, εμφανίζεται πριν αντι-ΗΟν, επιτρέποντας τη διάγνωση της ασθένειας στα πρώιμα στάδια. Προσδιορισμός του RNA πραγματοποιείται σε ασθενείς με κλινικά οξεία ηπατίτιδα Β και οι ασθενείς με θετικό τεστ για την ηπατίτιδα.
  2. RNA της ηπατίτιδας C ("Ποσοτική PCR") - ιικό φορτίο - ένας από τους δείκτες της αποτελεσματικότητας της αντιιικής θεραπείας και της αξιολόγησής της (με την αλλαγή του επιπέδου από την αρχική τιμή). Ο ποσοτικός χαρακτηρισμός του περιεχομένου του RNA της ηπατίτιδας C είναι σημαντικός για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας της αντιιικής θεραπείας και έχει προγνωστική σημασία για τον προσδιορισμό της χρόνιας κατάστασης. Οι ασθενείς με υψηλό ιικό φορτίο (υψηλές ποσότητες RNA) πριν από τη θεραπεία ανταποκρίνονται χειρότερα στη θεραπεία.
  3. RNA της ηπατίτιδας C (γονότυποι 1, 2, 3) - Ο τύπος της θεραπείας εξαρτάται από τον τύπο και την αποτελεσματικότητά του. Η ασθένεια που προκαλείται από τον ιό του γονότυπου 1 είναι η πλέον δυσμενή σε σχέση με την πρόγνωση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας. Σύμφωνα με τις τρέχουσες συστάσεις, πριν από την έναρξη της αντιιικής θεραπείας θα πρέπει να διενεργηθεί εξέταση αίματος για τον προσδιορισμό της γονοτυπίας της ηπατίτιδας C.
  4. RNA της ηπατίτιδας C (εκτεταμένη γονότυπη 1a, 1b, 2, 3a, 4, 5, 6) - στο έδαφος της Ρωσίας κυκλοφορούν οι υποτύποι 1α, 1β, 2α, 2γ, 2κ, 3α. Η ηπατίτιδα C, που προκαλείται από τον ιό των γονότυπων 1 και 4, είναι η πλέον δυσμενή σε σχέση με την πρόγνωση.
  5. Υπερευαισθητική PCR για ηπατίτιδα C (ποιοτική μέθοδος) - ανάλυση χρησιμοποιείται για τη διάγνωση της ασθένειας στα πρώιμα στάδια της μόλυνσης είναι η βέλτιστη για τη δοκιμή του αίματος και την αξιολόγηση της ανταπόκρισης στην αντιική θεραπεία. Αυτή η μελέτη ακόμη και αν απαρατήρητα αντισώματα σε ηπατίτιδα C, συνιστάται να διεξάγει ασθενείς με ηπατική νόσο απροσδιόριστη λόγους, γ επίκτητης ανοσοανεπάρκειας, ή υποβάλλονται σε ανοσοκατασταλτική θεραπεία.
  6. Υπερευαίσθητη PCR για ηπατίτιδα C (ποσοτική μέθοδος) - μοναδική ανάλυση με υψηλή ευαισθησία (10 IU / ml) για τον προσδιορισμό του RNA του ιού της ηπατίτιδας C σε ποσοτικούς όρους. Η μελέτη χρησιμοποιείται για την παρακολούθηση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας.

PCR ON HEPATITIS Β

  1. Ηπατίτιδα Β DNA (ποιοτική ανάλυση) - ο δείκτης αναπαραγωγής του ιού της ηπατίτιδας Β. Εμφανίζεται πρώτα στο αίμα, κατά μέσο όρο 1 μήνα μετά τη μόλυνση. Σε ορισμένες περιπτώσεις, είναι ο μόνος δείκτης της λανθάνουσας μόλυνσης από τον ιό HBV. Ο προσδιορισμός του DNA του ιού επιτρέπει τη διάγνωση της ηπατίτιδας Β που προκαλείται από μεταλλαγμένα στελέχη, στα οποία δεν ανιχνεύονται άλλοι δείκτες μόλυνσης.
  2. Ηπατίτιδα Β DNA (ποσοτική ανάλυση) - Η συγκέντρωση του DNA (ιικό φορτίο) είναι μία από τις δοκιμασίες που χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό του σταδίου της χρόνιας ηπατίτιδας Β και της αποτελεσματικότητας της αντιιικής θεραπείας. Η ανάλυση πραγματοποιείται πριν και κατά τη διάρκεια της θεραπείας.
  3. Γονότυπο της ηπατίτιδας Β - οι ασθένειες που προκαλούνται από διαφορετικούς γονότυπους του ιού μπορεί να διαφέρουν στην κλινική πορεία και την έκβαση. Η ηπατίτιδα Β προκαλείται από έναν ιό του γονότυπου C, συχνά χρειάζεται μια χρόνια πορεία και υψηλό κίνδυνο μετασχηματισμό σε κίρρωση ή ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα. Οι ασθενείς που έχουν μολυνθεί με ιό γονότυπου Α ανταποκρίνονται καλύτερα στη θεραπεία.
  4. Υπερευαισθησία DNA-PCR για ηπατίτιδα Β (ποιοτική μέθοδος) - τα παραδίδει για έγκαιρη ανίχνευση της νόσου. Πολύ ενημερωτικό στη μελέτη του αίματος του δότη. Μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να επιβεβαιώσει αυθόρμητη ή θεραπευτικώς προκληθείσα αφαίρεση του ιού από το ανθρώπινο σώμα.
  5. Υπερευαίσθητη PCR για ηπατίτιδα C (ποσοτική μέθοδος) - διάγνωση του DNA του ιού της ηπατίτιδας Β σε ποσοτικούς όρους. Η ανάλυση λαμβάνεται για να αξιολογηθεί η αποτελεσματικότητα της θεραπείας.
  6. Προσδιορισμός μεταλλάξεων αντοχής στα αντιικά φάρμακα λαμιβουδίνη, τελμπιβουδίνη, entecavir, adefovir, τενοφοβίρη (περάσει μαζί με την ανάλυση των «ποσοτικών ηπατίτιδας Β DNA»). Για να περάσει η ανάλυση είναι απαραίτητη για ασθενείς με χρόνια ηπατίτιδα Β πριν από την έναρξη της αντιιικής θεραπείας και κατά τη διάρκεια της χορήγησης φαρμάκων. Το αποτέλεσμα περιέχει πληροφορίες σχετικά με τη διαθεσιμότητα της αντοχής του ιού της ηπατίτιδας Β σε αντιιικά φάρμακα:
    • R - ο ιός είναι ανθεκτικός στο αντιικό φάρμακο (έχουν ανιχνευθεί μεταλλάξεις αντοχής σε αυτό το φάρμακο),
    • S - ο ιός της ηπατίτιδας Β είναι ευαίσθητος στο φάρμακο (η νόμιμη τιμή, δεν ανιχνεύονται μεταλλάξεις αντοχής).
    • I - ο αιτιολογικός παράγοντας της λοίμωξης μπορεί να προκαλέσει αντίσταση σε αυτό το φάρμακο.

Μελέτη PCR για ηπατίτιδα C: τύποι, ενδείξεις, μεταγραφή

Η ιική ηπατίτιδα C είναι μια σοβαρή ασθένεια που εμφανίζεται με ηπατική βλάβη. Σε ογδόντα τοις εκατό των ασθενών περνάει σε μια χρόνια μορφή. Ο ιός πολλαπλασιάζεται στα ηπατικά κύτταρα - ηπατοκύτταρα - και προκαλεί το θάνατό τους. Ο νεκρός ιστός αντικαθίσταται από εστίες συνδετικού ιστού, αναπτύσσεται ίνωση.

Με την ανάπτυξη της ίνωσης του ήπατος δεν είναι σε θέση να επιτελέσει τη λειτουργία του, αρχίζει κίρρωση, το οποίο είναι επικίνδυνο για τις επιπλοκές της: αυξανόμενη πίεση στην πυλαία φλέβα, γαστρεντερική αιμορραγία, διαταραχές της πήξης του αίματος, ψυχικές αλλαγές που οφείλεται σε βλάβη του εγκεφάλου πυρήνες τοξικά προϊόντα.

Η αιτία της νόσου είναι η μόλυνση με ιό από την οικογένεια Flaviviridae, που είναι ένας τύπος ιού RNA. Αυτό σημαίνει ότι το γενετικό υλικό με το οποίο συντίθενται πρωτεΐνες του παθογόνου κωδικοποιείται σε ένα μόριο ριβονουκλεϊκού οξέος. Η μόλυνση γίνεται μέσω του αίματος, σεξουαλικά, και από μια έγκυο γυναίκα στο έμβρυο. Δυστυχώς, μεταξύ της μόλυνσης και της έναρξης της παραγωγής των αντισωμάτων μπορεί να περάσει αρκετά μεγάλο χρονικό διάστημα - από δύο εβδομάδες έως έξι μήνες. Αυτό δεν επιτρέπει τον προσδιορισμό της μόλυνσης με τη μέθοδο της ανοσοπροσδιορισμού ενζύμου και την έναρξη της θεραπείας στα αρχικά στάδια.

Τι είναι η ανάλυση PCR;

Η PCR είναι μια μέθοδος μοριακής ανάλυσης που επιτρέπει την ανίχνευση του γενετικού υλικού του παθογόνου ήδη από την πρώτη εβδομάδα μετά τη μόλυνση χρησιμοποιώντας αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης. Η μελέτη έχει υψηλή εξειδίκευση, ακρίβεια και επιτρέπει όχι μόνο τον προσδιορισμό της παρουσίας ή απουσίας του ιού, αλλά και της συγκέντρωσης και του γονότυπου του.

Για τη μελέτη, πάρτε το αίμα του ασθενούς, στο οποίο μπορεί να βρεθεί το RNA του ιού. Το αίμα προστίθεται εκκινητές - τεχνητά συντίθενται τμήματα μικρού μήκους του επιθυμητού γονιδίου, και RNA πολυμεράση - ένα ειδικό ένζυμο, το οποίο πολλαπλασιάζει την ποσότητα του γενετικού υλικού του παθογόνου. Με τη βοήθεια ειδικής συσκευής διεξάγονται αρκετοί κύκλοι θέρμανσης και ψύξης. Το υλικό στη συνέχεια αναλύεται και συγκρίνεται με γνωστά γονίδια ιού, βάσει των οποίων γίνεται συμπέρασμα για την παρουσία ή απουσία μόλυνσης.

Τύποι ανάλυσης PCR για ηπατίτιδα C

Υπάρχουν τρεις τύποι ανάλυσης PCR:

  1. Ποιοτική ανάλυση PCR. Το πρώτο στάδιο της μελέτης. Σας επιτρέπει να αναγνωρίσετε το γενετικό υλικό του ιού στο αίμα.

  • Ποσοτική ανάλυση της PCR. Επιτρέπει τον προσδιορισμό του ιικού φορτίου - της συγκέντρωσης του γενετικού υλικού του παθογόνου σε ένα χιλιοστόλιτρο αίματος. Η μελέτη αυτή διεξάγεται πριν από την έναρξη της θεραπείας, και στη συνέχεια στην πρώτη, τέταρτη, δωδέκατη και (εάν η πορεία είναι μεγάλη) την εικοστή τέταρτη εβδομάδα θεραπείας για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητάς της.

  • Γονότυπο. Ο αιτιολογικός παράγοντας της ηπατίτιδας C συχνά και γρήγορα μεταλλάσσεται. Στον πλανήτη βρέθηκαν επτά παραλλαγές του γονότυπου αυτού του ιού. Στη Ρωσία, ο πρώτος, ο δεύτερος και ο τρίτος τύπος είναι κοινός. Κάθε ένας από τους γονότυπους έχει διαφορετική αντίσταση στη θεραπεία, για παράδειγμα, η αποτελεσματικότητα της θεραπείας του πρώτου τύπου είναι εξήντα τοις εκατό, και για το δεύτερο και τρίτο, φτάνει τα ογδόντα πέντε. Επομένως, προκειμένου να επιλεγούν κατάλληλα φάρμακα και να συνταγογραφηθεί μια σειρά θεραπείας επαρκούς διάρκειας, είναι απαραίτητο να προσδιοριστεί με ακρίβεια ποιος τύπος ιού έχει μολυνθεί από τον ασθενή.
  • Ενδείξεις για ανάλυση PCR για ηπατίτιδα C

    Η μελέτη PCR έχει συνταχθεί στις ακόλουθες περιπτώσεις:

    • επαφή με άρρωστο άτομο, η οποία θα μπορούσε να οδηγήσει σε μόλυνση.
    • θετική ενζυμική ανοσοανάλυση ·
    • σημάδια κίρρωσης του ήπατος: αλλαγές στο μέγεθος του ήπατος, μεγέθυνση της σπλήνας, εμφάνιση του υποδόριου φλεβικού πλέγματος στην κοιλία.
    • την εμφάνιση συμπτωμάτων ηπατικής βλάβης: πόνος στη δεξιά πλευρά της κοιλιάς, κιτρίνισμα του δέρματος,
    • αυξημένη δραστικότητα ALT και AST σε βιοχημική ανάλυση αίματος.
    • πριν από την έναρξη της θεραπείας για τον προσδιορισμό του ιικού φορτίου.
    • για την παρακολούθηση της αποτελεσματικότητας της αντιιικής θεραπείας.
    • μετά την ολοκλήρωση της θεραπείας για την παρακολούθηση της υποτροπής.
    • παρουσία διαγνωσμένης ηπατίτιδας Β, για να αποκλειστεί η μικτή ηπατική βλάβη.

    Αποκωδικοποίηση της μελέτης PCR για ηπατίτιδα C

    Απομαγνητοφώνηση ανάλυση PCR και ανοσοδοκιμή για Hepatology ηπατίτιδα C πρέπει να εμπλακεί ή μολυσματικές ασθένειες. Η ανάλυση των αποτελεσμάτων της PCR είναι απαραίτητη σε συνδυασμό με τη βιοχημική εξέταση αίματος, βιοψία και υπερηχογράφημα. Μόνο ένας ειδικευμένος γιατρός θα είναι σε θέση να αναλύσει τα αποτελέσματα των μελετών και, βάσει αυτών, θα συνταγογραφήσει τη σωστή θεραπεία.

    Αποκωδικοποίηση της ποιοτικής ανάλυσης.

    Το γενετικό υλικό του παθογόνου βρέθηκε στο αναλυθέν βιολογικό υλικό. Η μόλυνση επιβεβαιώνεται.

    Δεν υπάρχει μόλυνση ή η ποσότητα του RNA του παθογόνου είναι κάτω από το όριο ευαισθησίας.

    Αποκωδικοποίηση της ποσοτικής ανάλυσης.

    Μια φυσιολογική εικόνα για τους υγιείς ανθρώπους. Σημαίνει ότι δεν υπάρχει RNA ηπατίτιδας C στο υλικό δοκιμής, ή η συγκέντρωσή του είναι κάτω από το όριο ευαισθησίας της μελέτης.

    Η συγκέντρωση του RNA είναι κάτω από το εύρος ποσοτικοποίησης. Τέτοια αποτελέσματα ερμηνεύονται πολύ προσεκτικά, συσχετίζονται με τα δεδομένα άλλων μελετών και συχνά εκτελούν μια δεύτερη μελέτη.

    Το επίπεδο ιικού φορτίου σε δεδομένη συγκέντρωση θεωρείται χαμηλό. Συνήθως μια μείωση στην ποσότητα του ιού σημαίνει ότι η θεραπεία είναι επιτυχής.

    Περισσότερο από 8 * 10 ^ 5 IU / ml

    Το επίπεδο του ιϊκού φορτίου σε δεδομένη συγκέντρωση θεωρείται υψηλό.

    Περισσότερο από 2,4 * 10 ^ 7 IU / ml

    Η ποσότητα του RNA είναι πάνω από το ανώτατο όριο του εύρους ποσοτικοποίησης. Είναι αδύνατο να συναχθούν συμπεράσματα σχετικά με τον βαθμό ιικού φορτίου με αυτό το αποτέλεσμα. Συνήθως σε τέτοιες περιπτώσεις, η δοκιμή επαναλαμβάνεται με την αραίωση του δείγματος αίματος.

    Αποκωδικοποίηση της γονότυπης.

    Ανακαλύφθηκε RNA συγκεκριμένου γονότυπου

    Στο βιοϋλικό, ο ιός της ηπατίτιδας C ανιχνεύεται συγκεκριμένου γονότυπου και υποτύπου. Το αποτέλεσμα είναι κωδικοποιημένο με λατινικούς αριθμούς και λατινικά γράμματα, για παράδειγμα - 1α, 2β. Υπάρχουν επτά γονότυποι και εξήντα επτά υποτύποι, αλλά στη Ρωσία υπάρχουν μόνο τρεις πρώτοι τύποι.

    Βρέθηκε RNA ιού ηπατίτιδας C

    Στο αίμα, το RNA βρίσκεται σπάνιος γονότυπος για τη Ρωσία, ο οποίος δεν μπορεί να αποδοθεί στον πρώτο, δεύτερο ή τρίτο τύπο. Απαιτείται περισσότερη έρευνα.

    Αυτό το αποτέλεσμα δείχνει ότι ο ασθενής είναι υγιής ή ότι το επίπεδο RNA του παθογόνου είναι πολύ μικρό.

    Μια κατάσταση είναι δυνατή όταν η ανάλυση PCR για την ηπατίτιδα C είναι αρνητική, και η ανοσοδοκιμασία ενζύμου ανιχνεύει αντισώματα κατά του ιού. Αυτό σημαίνει ότι ο ασθενής είχε ηπατίτιδα C σε οξεία μορφή και θεραπεύτηκε. Περίπου είκοσι περιπτώσεις λοίμωξης οδηγούν σε αυθόρμητη θεραπεία αν το σώμα του ασθενούς ασκεί επαρκή αντίσταση σε λοίμωξη.

    Παρά το γεγονός ότι η PCR είναι μια πολύ ακριβής ανάλυση, τα αποτελέσματά της μπορούν να αλλοιωθούν στις ακόλουθες περιπτώσεις:

    • το αίμα μεταφέρθηκε στο εργαστήριο υπό ανεπαρκείς συνθήκες, το καθεστώς θερμοκρασίας παραβιάστηκε.
    • το δείγμα του βιοϋλικού μολύνθηκε.
    • στο αίμα υπήρχαν εναπομείναντα ίχνη ηπαρίνης και άλλων αντιπηκτικών.
    • Στην ουσία που ερευνήθηκε ήταν αναστολείς - ουσίες που επιβραδύνουν ή σταματούν την αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης.

    Πλεονεκτήματα της PCR έναντι άλλων μεθόδων

    1. Διάγνωση στα αρχικά στάδια. Η PCR ανιχνεύει το γενετικό υλικό του αιτιολογικού παράγοντα της ασθένειας. ουσίες που παράγει το σώμα σε απόκριση προς λοίμωξη - μόνο ανοσοσφαιρίνες μπορεί να ανιχνευθεί με ανοσοφθορισμό. Στην περίπτωση του διαστήματος της ηπατίτιδας C μεταξύ μόλυνσης και την έναρξη της ανοσολογικής απόκρισης μπορεί να είναι μερικές εβδομάδες ή μήνες, στον οποίο χρόνο η ELISA θα είναι αναποτελεσματική. Η PCR θα δώσει μια απάντηση ήδη την πρώτη εβδομάδα μετά τη μόλυνση.

  • Χαμηλή πιθανότητα σφάλματος. Στο υλικό που μελετήθηκε, προσδιορίζεται το γενετικό υλικό, το οποίο είναι χαρακτηριστικό μόνο για έναν τύπο παθογόνων παραγόντων. Αυτό σας επιτρέπει να αποκλείσετε τα ψευδή αποτελέσματα. Με τη μέθοδο ELISA, είναι δυνατά λάθη, καθώς το ίδιο είδος αντισωμάτων μπορεί να απελευθερωθεί έναντι διαφορετικών ιών - τέτοια αντισώματα ονομάζονται διασταυρούμενα αντιδραστικά.

  • Υψηλή ευαισθησία. Η PCR μπορεί να ανιχνεύσει RNA του παθογόνου ακόμη και σε ελάχιστες ποσότητες. Αυτό καθιστά δυνατό τον εντοπισμό κρυφών μολύνσεων.
  • Πώς να προετοιμαστείτε για χορήγηση αίματος για έρευνα PCR

    Για την ανάλυση PCR, συλλέγεται φλεβικό αίμα για την ηπατίτιδα C. Συνήθως, δύο μερίδες αίματος λαμβάνονται από τη φλέβα του ασθενούς αμέσως: η πρώτη αποστέλλεται στην PCR και η δεύτερη στην ELISA. Αυτό γίνεται προκειμένου να εκτιμηθεί με μεγαλύτερη ακρίβεια πόσο άσχημα ο ασθενής είναι μολυσμένος με τον ιό και πώς η ασυλία στρέφεται εναντίον του.

    Συνήθως, οι ακόλουθοι κανόνες απαιτούνται από τον ασθενή:

    • ένα τεστ αίματος λαμβάνεται το πρωί.
    • το διάλειμμα μεταξύ του τελευταίου γεύματος και της παράδοσης αίματος πρέπει να είναι οκτώ έως δέκα ώρες.
    • δύο ή τρεις ημέρες πριν από την ανάλυση πρέπει να εγκαταλείψετε τα τηγανητά και λιπαρά τρόφιμα και το αλκοόλ.
    • για είκοσι τέσσερις ώρες πριν από την ανάλυση, ο ασθενής θα πρέπει να αποφεύγει τη σωματική άσκηση: μην κουβαλάτε βάρος, μη παρακολουθείτε γυμναστήριο ή πισίνα.

    Αποκωδικοποίηση της ανάλυσης PCR για ηπατίτιδα C

    Μια ειδική εργαστηριακή μελέτη - η ανάλυση του ptsr της ηπατίτιδας C - απλοποιεί σημαντικά τη διάγνωση αυτής της ιογενούς νόσου. Μια εξαίρεση δεν είναι και η ηπατίτιδα C. Μπορεί να ελεγχθεί ένα μικρό δείγμα αίματος για το περιεχόμενο του RNA και άλλου γενετικού υλικού του ιικού παράγοντα. Η ανάλυση με την PCR διεξάγεται από όλα τα άτομα με αντισώματα στην ηπατίτιδα C που κυκλοφορούν στο πλάσμα αίματος, η παρουσία των οποίων επιβεβαίωσε την ποιοτική ανίχνευση.

    Η ερμηνεία των αποτελεσμάτων ερμηνεύεται στο γράφημα της ερευνητικής φόρμας ως μια "θετική" ή "αρνητική" ανάλυση. Επιπλέον, με τη βοήθεια της PCR είναι δυνατόν όχι μόνο να καθοριστεί ποιοτικά το ελάχιστο περιεχόμενο του ιού, αλλά και να μετρηθεί ο αριθμός των σωματιδίων. Έτσι, είναι δυνατόν να προσδιοριστεί το εκτιμώμενο ιικό φορτίο και να προσδιορισθεί όσο το δυνατόν ακριβέστερα η ιατρική τακτική της θεραπείας.

    Ιογενή βλάβη του ήπατος

    Το ήπαρ ως στοιχείο του πεπτικού συστήματος παίρνει ένα τεράστιο φορτίο. Στα κύτταρα του, λαμβάνει χώρα η πλειονότητα των μεταβολικών αντιδράσεων όλων των τύπων μεταβολισμού, γεγονός που εξασφαλίζει τη βέλτιστη λειτουργία όλων των οργάνων και συστημάτων. Ταυτόχρονα, η αξία αποτοξίνωσης είναι μεγάλη για την απομάκρυνση των σκωριών και των προϊόντων του μεταβολισμού με ζυμώδη χολή.

    Η ήττα του ήπατος από ιούς διαφορετικής φύσης είναι εξαιρετικά επικίνδυνη για το όργανο. Η ποικιλία της κλινικής εικόνας και η μη συμμόρφωση με τη θεραπεία της ηπατίτιδας οδηγεί στην πρώτη θέση όσον αφορά τους κινδύνους για την υγεία. Η ηπατίτιδα C είναι χρόνια και μπορεί να δώσει ένα αρνητικό αποτέλεσμα δοκιμής για μεγάλο χρονικό διάστημα, αργά παρασιτίζοντας το ανθρώπινο σώμα. Ο ιός μεταδίδεται μέσω βιολογικών υγρών: αίματος και λιγότερο συχνά μέσω σπέρματος. Η ναρκωτική κακοποίηση των μη αποστειρωμένων συρίγγων, η φυσική παράδοση μολυσμένων γυναικών, οι τυχαίες βλάβες ή οι περικοπές των εργαζομένων στον τομέα της υγείας μπορούν να οδηγήσουν στη μετάδοση του ιού σε υγιείς ανθρώπους.

    Η έγκαιρη διάγνωση της νόσου παρεμποδίζεται από μια κρυμμένη κλινική εικόνα και από μη συστηματική παθολογία. Ένα θετικό αποτέλεσμα μπορεί απλά να χαθεί από δοκιμές κακής ποιότητας. Μόνο μια σημαντική αλλοίωση των ηπατικών κυττάρων προκαλεί κάποια συμπτωματολογία, ωστόσο, η αρνητική επίδραση της ιαιμίας μέχρι τότε δεν αφήνει καμία πιθανότητα να αποκαταστήσει το όργανο.

    Η σύγχρονη ιατρική έχει αναπτύξει ειδικές μεθόδους για την αναγνώριση του παραμικρού ίχνους του ιού. Η PCR, ifa, βιοψία ήπατος μπορεί να ανιχνεύσει την παραμικρή βλάβη στο ήπαρ και το ελάχιστο επίπεδο αντισωμάτων κατά του ιού. Η ανάλυση με τη βοήθεια της PCR είναι η πιο απλή και αξιόπιστη στη διαγνωστική πρακτική.

    Ποιοτική ανάλυση

    Η ουσία της αντίδρασης πολυμεράσης είναι η ανάπτυξη μιας αλληλουχίας RNA. Η αντίδραση εκτελείται όταν υπάρχουν οι ίδιες ιικές πρωτεΐνες στο πλάσμα αίματος.

    Ειδικοί καταλύτες καθιστούν δυνατή τη σύνθεση μίας παρόμοιας αλληλουχίας ιικής αλυσίδας, η οποία συγκρίνεται με τα γνωστά νουκλεοτίδια του ιικού RNA. Με βάση αυτό, καθορίζεται το ιικό φορτίο και η ηπατική βλάβη.

    Η PCR είναι ικανή να ανιχνεύει ακόμη και μία απλή παρουσία του επιθυμητού γονιδίου στο αίμα που λαμβάνεται. Αυτή η διαγνωστική αλυσιδωτή αντίδραση είναι επίσης πολύ ειδική. Η αλληλουχία των νουκλεοτιδικών αλυσίδων είναι μοναδική για κάθε πλάσμα, έτσι ώστε οι ενζυματικοί εκκινητές να δημιουργούν ταυτόσημες αλληλουχίες της επιθυμητής γενετικής πληροφορίας. Έτσι, οποιοσδήποτε ιός μπορεί να ανιχνευθεί με την παραμικρή ακρίβεια, ακόμη και αν ο ποσοτικός δείκτης του είναι εξαιρετικά μικρός.

    Οι ασθενείς στο αίμα των οποίων έχουν βρεθεί τα αναπτυγμένα αντισώματα κατά της ιογενούς ηπατίτιδας εκτελούν μια ποιοτική μελέτη του ptsr ή ifa. Το αποτέλεσμα της ανάλυσης μπορεί να είναι είτε θετικό είτε αρνητικό, το οποίο και στις δύο περιπτώσεις απαιτεί θεραπεία.

    Ο αποκρυπτογράφος ακολουθεί την θετική απόκριση της αλυσιδωτής αντίδρασης ως παρουσία θραυσμάτων RNA του ιού της ηπατίτιδας ή ως φαινόμενο μόλυνσης.

    Στο πλάσμα αίματος τη στιγμή που ο ιός πολλαπλασιάζεται ενεργά και παρασιτίζει τα ηπατικά κύτταρα. Η διάγνωση PCR μπορεί να δώσει αρνητική απόκριση εάν τα σωματίδια του ιικού RNA είναι παρόντα στο πλάσμα λίγο, κάτω από το επίπεδο ευαισθησίας της εξέτασης ή καθόλου. Μετά την άμεση λοίμωξη, η ποσότητα του ιού αναπτύσσεται σχετικά αργά και μόνο μετά από 1-2 εβδομάδες εάν μια άλλη ποιοτική έρευνα μπορεί να τα διακρίνει.

    Αρνητική ανάλυση μπορεί να επιτευχθεί στις ακόλουθες περιπτώσεις:

    1. Όταν παίρνετε υλικό κάτω από ακατάλληλες συνθήκες, πάρτε ένα δείγμα αίματος με μόλυνση.
    2. Με προηγούμενες ενέσεις του ασθενούς ηπαρίνη.
    3. Όταν υπάρχουν άλλα ένζυμα και υποστρώματα στα ληφθέντα δείγματα, τα οποία διαταράσσουν την πορεία της αλυσιδωτής αντίδρασης.

    Ποσοτική ανάλυση

    Η ποσοτική δοκιμή ως μικροβιολογική διάγνωση έχει σχεδιαστεί για τον προσδιορισμό του ιικού φορτίου. Η επιβεβαιωμένη ποιοτική ανάλυση της ιαιμίας είναι η βάση για τον προσδιορισμό της ποσότητας του γενετικού υλικού και της συγκέντρωσής του. Ο αριθμός του ανιχνευθέντος ιικού RNA προσδιορίζεται σε μία μονάδα όγκου αίματος, συνήθως σε 1 χιλιοστόλιτρο. Τα απαιτούμενα υλικά εκφράζονται σε διεθνείς μονάδες, ορισμένα εργαστήρια στην ανάλυση του ifa χρησιμοποιούν τον αριθμό των αντιγράφων.

    Συνήθως, πριν από οποιαδήποτε θεραπευτική αγωγή, πραγματοποιείται ποσοτική ανάλυση της PCR. Τα ιογενή RNA υπολογίζονται αρκετά συχνά: μετά από μία, τέσσερις, δώδεκα και είκοσι τέσσερις εβδομάδες. Η 12η εβδομάδα θεωρείται ενδεικτική, διότι με βάση την ανάλυση κατά την περίοδο αυτή πραγματοποιείται η αποκωδικοποίηση της αποτελεσματικότητας των ιατρικών μέτρων.

    Η ποσοτική ανάλυση χρησιμοποιώντας PCR ή ifa περιλαμβάνει λήψη δειγμάτων από τη φλέβα.

    Η ερμηνεία των αποτελεσμάτων ως υψηλού ιικού φορτίου ξεκινά από ένα σχήμα 800.000 IU / mL. Ένα τέτοιο θετικό αποτέλεσμα για την ηπατίτιδα C αντανακλά την παρουσία τουλάχιστον 3.000.000 αντιγράφων σε ένα χιλιοστόλιτρο αίματος. Ένα χαμηλό επίπεδο ιαιμίας σταματά σε μια τιμή 400.000 IU / mL. Τα αποτελέσματα της μελέτης μπορεί να είναι τιμές ως αρνητική απόκριση, καθώς και "κάτω από το εύρος μέτρησης".

    Μια ποσοτική δοκιμή με μια εκτίμηση "κάτω από την περιοχή μέτρησης" λέει ότι η αντίδραση απέτυχε να υπολογίσει το RNA. Ο ιός κυκλοφορεί στο σώμα, όπως υποδεικνύεται από μια θετική ποιοτική δοκιμή. Ένας αρνητικός δείκτης ποσοτικής ανάλυσης του ptsr ή ifa υποδεικνύει την απουσία RNA σε αυτό το δείγμα αίματος.

    Παρά τους περιορισμένους τρόπους μετάδοσης του ιού μέσω του αίματος, ο κίνδυνος μετάδοσης του ιού μέσω των μυστικών των γονάδων, από τη μητέρα στο παιδί, αυξάνεται.

    Η ποσοτική ανάλυση παρέχει σημαντική βοήθεια στην αξιολόγηση των θεραπευτικών παρεμβάσεων. Εάν τα και ptsr αντικατοπτρίζουν την επίδραση των αντιικών φαρμάκων, βοηθούν στην καθιέρωση του χρονικού διαστήματος της θεραπείας και αξιολογούν τον σχηματισμό ανοσίας στους ασθενείς. Μια πρώιμη αρνητική απόκριση από τις εργαστηριακές εξετάσεις δείχνει την επιτυχή θεραπεία και την ανάγκη να μειωθεί η διάρκεια της θεραπείας. Η αργή μείωση των ποσοστών ιαιμίας μπορεί να αποκρυπτογραφηθεί ως η ανάγκη τροποποίησης της θεραπευτικής πορείας. Το επίπεδο του ιϊκού φορτίου καθορίζει την πρόγνωση της νόσου. Η ηπατίτιδα με χαμηλό ρυθμό είναι πιθανό να αντιμετωπιστεί απλά και μπορεί να απομακρύνει εντελώς τον ιό από το σώμα. Οι υψηλοί ρυθμοί παρουσίας του ιού στο αίμα απαιτούν προσεκτική θεραπεία και ευέλικτη θεραπεία.

    Ποιοτική ανάλυση για την ηπατίτιδα C

    Αφήστε μια απάντηση

    Η ποιοτική ανάλυση της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης - η PCR για την ηπατίτιδα C καθορίζει την παρουσία ή την απουσία HCV στο σώμα. Στο εργαστήριο, μελετάται η δομή του RNA, στον οποίο βρίσκεται ο ιός. Εάν ανιχνευθεί ένας ιός C, είναι απαραίτητο να υποβληθεί σε μια πορεία θεραπείας, καθώς η παραμελημένη κατάσταση του ήπατος έχει σοβαρές συνέπειες. Πραγματική PCR διεξάγεται μετά από ανάκτηση για να επιβεβαιωθεί η απουσία αντισωμάτων. Διορίζεται και για προληπτική εξέταση. Με χαμηλή συγκέντρωση του παθογόνου στο αίμα, η PCR (ποιοτική) δεν μπορεί να ανιχνεύσει τίποτα, επειδή το διαγνωστικό σύστημα έχει τα όρια ευαισθησίας του. Στην περίπτωση ενός αρχικού σταδίου της νόσου ή μιας ήπιας μορφής, η PCR τελικά διαγνωσθεί με υπερευαίσθητο εξοπλισμό.

    Τι είναι ένας ιός RNA;

    Ο όρος RNA του ιού της ηπατίτιδας C (ή RNA του ιού της ηπατίτιδας C) ονομάζεται η ίδια ηπατική νόσος. Ο ιός C δεσμεύεται σε ένα υγιές κύτταρο σώματος, διεισδύοντας μέσα του. Με την πάροδο του χρόνου, εξαπλωθεί σε όλο το σώμα, είναι μόνο για να μπει στο αίμα. Ως αποτέλεσμα, ο παθογόνος παράγοντας διαπερνά το συκώτι, ασφαλίζει με τα κύτταρα του και εργάζεται σκληρά. Τα ηπατικά κύτταρα (ηπατοκύτταρα) λειτουργούν υπό την επιρροή τους, υφίστανται αλλαγές και από αυτό ξεχνούν. Όσο μεγαλύτερος είναι ο ιός C στο ήπαρ, τόσο περισσότερα κύτταρα πεθαίνουν. Με την πάροδο του χρόνου αναπτύσσονται επικίνδυνες ασθένειες που οδηγούν σε κακοήθη εκφυλισμό και θάνατο.

    Η μόλυνση του ήπατος με αυτόν τον τύπο ιού δεν μπορεί να εκδηλωθεί με κανέναν τρόπο εξωτερικά. Για πολλά χρόνια ή δεκάδες χρόνια, ο μολυσμένος άνθρωπος αισθάνεται εντελώς υγιής και μόνο μια τυχαία εξέταση συχνά αποκαλύπτει μια παθολογία. Όταν χορηγείται αίμα για ηπατίτιδα, εξετάζεται τμήμα της αλυσίδας RNA (ριβονουκλεϊνικού οξέος) που είναι μέρος του ανθρώπινου γονιδίου (DNA). Τα αποτελέσματα της εργαστηριακής έρευνας δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται για αυτοθεραπεία, διότι αυτό αποτελεί μόνο δείκτη. Ο γιατρός θα καθορίσει την ακριβή εικόνα και την περαιτέρω διάγνωση.

    Όταν γίνει: μαρτυρία της μελέτης

    Για να επιβεβαιωθεί η HCV, ανατίθεται ανάλυση PCR (αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης). Οι μελέτες PCR συμβάλλουν στην εύρεση του υλικού παθογόνου στη δομή του RNA και στη συνταγογράφηση αποτελεσματικής θεραπείας. Διορίζεται στις ακόλουθες περιπτώσεις:

    • ταυτοποίηση σημείων φλεγμονής του ήπατος,
    • μελέτες για την πρόληψη.
    • εξέταση των ατόμων που έρχονται σε επαφή ·
    • διάγνωση ηπατίτιδας μικτής προέλευσης (ορισμός του κύριου παθογόνου) ·
    • Προσδιορισμός του επιπέδου δραστηριότητας της αναπαραγωγής του ιού σε χρόνια μορφή.
    • κίρρωση του ήπατος.
    • για να προσδιοριστεί η αποτελεσματικότητα της προβλεπόμενης θεραπείας.
    Οι μελέτες PCR αποδίδονται από γιατρό για να προσδιοριστεί η αποτελεσματικότητα της πορείας της θεραπείας για την ηπατίτιδα.

    Υπάρχει ποιοτική και ποσοτική ανάλυση της PCR. Η ποσοτική PCR δείχνει το ποσοστό του RNA με τους φορείς του ιού στο αίμα και η ποιοτική PCR δείχνει παρουσία ή απουσία ιού. Ένας θετικός δείκτης ποιότητας (παρουσία RNA ηπατίτιδας C) απαιτεί επίσης μια ποσοτική μελέτη. Ένα υψηλό επίπεδο συγκέντρωσης του παθογόνου της ηπατίτιδας C συνδέεται με τον κίνδυνο μετάδοσης, δηλαδή με μόλυνση άλλων. Οι χαμηλές ποσότητες αντιμετωπίζονται καλύτερα. Η ποσότητα των ιών RNA στο αίμα δεν σχετίζεται με την ένταση της νόσου. Η ανάλυση PCR γίνεται επίσης στην περίπτωση της θεραπείας με ιντερφερόνη, προκειμένου να συνταγογραφηθεί η διάρκεια και η πολυπλοκότητα της πορείας θεραπείας.

    Χαρακτηριστικά ποιοτικής ανάλυσης PCR για ηπατίτιδα C

    Μια ποιοτική ανάλυση με έναν δείκτη αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης αποδίδεται σε όλους τους ασθενείς που έχουν αντισώματα στην ηπατίτιδα C στο αίμα τους. Όποιος ανακτάται και ανακτάται, πρέπει να επανεξεταστεί. Συνιστάται να περάσει μια ανάλυση για την ηπατίτιδα Β, στη συνέχεια, σε περίπτωση θετικού συμπεράσματος, και για την ηπατίτιδα D. Επίσης, η ποιοτική ανάλυση της αντίδρασης θα πρέπει να πραγματοποιείται σε συνδυασμό με άλλες εξετάσεις αίματος. Οι αναλύσεις θα παρουσιάσουν μια πλήρη εικόνα της εξάπλωσης του ιού.

    Από τα αποτελέσματα των δοκιμών, θα παρατηρηθεί μόνο μια θετική δοκιμασία για ηπατίτιδα C ή αρνητική, δηλαδή η παρουσία ή απουσία του ιού. Εάν το συμπέρασμα είναι "ανιχνευμένο", τότε ο ιός είναι και εξακολουθεί να ενεργεί ενεργά. Η ονομασία "δεν βρέθηκε" υποδηλώνει την απουσία του ιού ή το μικρό του ποσό. Με αυτόν τον δείκτη, θα πρέπει να ληφθεί υπόψη το γεγονός ότι η αναλυτική ευαισθησία των διαγνωστικών συστημάτων είναι διαφορετική και η ηπατίτιδα C του RNA μπορεί να παραμείνει στο αίμα, αλλά δεν εμφανίζεται στην ανάλυση.

    Μια ιδιαίτερα ευαίσθητη μέθοδος της υπερευαισθησίας C της PCR αποκαλύπτεται ακόμη και σε ελάχιστες ποσότητες. Χρησιμοποιείται μια μελέτη φθορισμού υβριδισμού που είναι πολλές φορές υψηλότερη από τα πρότυπα συστήματα PCR. Η μέθοδος χρησιμοποιείται σε πολλές περιπτώσεις:

    • υποψίες για κρυφές μορφές ηπατίτιδας C ·
    • Η διάγνωση της PCR δεν επιβεβαιώθηκε από το παθογόνο, αλλά υπάρχουν αντισώματα.
    • σε περίπτωση ανάκτησης.
    • για τον εντοπισμό του πρώιμου σταδίου μόλυνσης.
    Επιστροφή στα περιεχόμενα

    Επεξήγηση της ανάλυσης

    Η τελική απόφαση στη διάγνωση επηρεάζεται από την αποκωδικοποίηση PCR του HCV, ειδικότερα με την υπερμετρωπία. Το κύριο μειονέκτημα αυτής της έρευνας είναι η αυστηρή τήρηση των στείρων συνθηκών για το δείγμα και τα υλικά. Μια μικρή απόκλιση δείχνει μερικές φορές ανακριβή συμπεράσματα του αναλυτή, περιπλέκει τη διάγνωση και την επακόλουθη θεραπεία. Η ανάλυση της PCR για τον προσδιορισμό του RNA του ιού της ηπατίτιδας δεν δείχνει πάντα την εικόνα της νόσου με σιγουριά, μερικές φορές οι ανακρίβειες γίνονται δεκτές και με τους δύο τρόπους.

    Διαγνωρίζοντας τον ιό της ηπατίτιδας, συνιστάται να κάνετε μια συνολική εξέταση.

    Πρότυπο των δεικτών

    Η απουσία αντισωμάτων JgM στο RNA σε ιική ηπατίτιδα C θεωρείται ο κανόνας στην ανάλυση της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης. Ταυτόχρονα, τα ευρήματα της ορολογικής ανάλυσης δείχνουν την παρουσία αντισωμάτων στον ιό C και αυτό είναι επίσης εντός των ορίων του κανόνα. Ο ποιοτικός ορισμός δεν δείχνει την ένταση της ασθένειας, αλλά αποκαλύπτει μόνο τον αιτιολογικό παράγοντα της ηπατίτιδας C στο RNA. Μια τέτοια ανάλυση επαναλαμβάνεται μετά τη θεραπεία για να επιβεβαιωθεί η πραγματική ανάκτηση.

    Αποκλίσεις

    Αν υπάρχουν αντισώματα JgM στο HCV RNA, αυτό δείχνει μια αναπτυσσόμενη μόλυνση. Η ασθένεια είναι οξεία ή χρόνια, εκδηλώνεται σε διαφορετικά στάδια. Εάν καταγραφεί μείωση του αριθμού των αντισωμάτων, η ανάλυση θα δείξει την επίτευξη των αποτελεσμάτων της θεραπείας κατά τη διάρκεια της ανάρρωσης. Υπάρχουν εξαιρετικά σπάνιες περιπτώσεις ψευδώς θετικών ευρημάτων στη διάγνωση. Βρίσκονται σε γυναίκες κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης και σε άτομα με άλλες μολυσματικές ασθένειες.

    Ποιοτική και ποσοτική ανάλυση της PCR για ηπατίτιδα C: αρνητική, θετική, αποκωδικοποίηση

    Η ηπατίτιδα C είναι μια ιογενής νόσος του ήπατος που προκαλείται από τον HCV του φλαβοϊού (από τον ιό της ηπατίτιδας C), που περιέχει μόριο ριβονουκλεϊνικού οξέος (RNA). Το RNA φέρει τον γενετικό κώδικα του ιού. Η παρουσία της επιτρέπει την ανάλυση της PCR για την ηπατίτιδα C.

    Ο HCV είναι ένας κίνδυνος για τον άνθρωπο και ότι η λεγόμενη ορολογική παράθυρο (ο χρόνος μεταξύ της μόλυνσης και της εμφάνισης της αντίδρασης από το ανοσοποιητικό σύστημα) μπορεί να είναι αρκετά μακρύ - από μερικές εβδομάδες έως έξι μήνες.

    Αυτό δεν αποκαλύπτει τη μόλυνση και αρχίζει την επεξεργασία εγκαίρως.

    Ανάλογα με τα μεμονωμένα χαρακτηριστικά του σώματος του ξενιστή, το HCV μπορεί να εμφανιστεί σε οξεία μορφή και μπορεί επίσης να αναπτυχθεί ως μια χρόνια ασθένεια που θα απαιτήσει μακροχρόνια και δαπανηρή θεραπεία. Όταν η ανίχνευση των αντισωμάτων κατά του HCV πραγματοποίησε μια σειρά εργαστηριακών δοκιμών, συμπεριλαμβανομένων PCR για ηπατίτιδα C. Αυτή η δοκιμή γίνεται σε όλους τους ανθρώπους, τα αντισώματα αντι-ΗΟν βρέθηκαν στο αίμα ενός ατόμου.

    Τι είναι η ανάλυση PCR;

    Εργαστηριακή ανάλυση της PCR για την ηπατίτιδα C - μελέτη βιολογικού υλικού για τον εντοπισμό της παρουσίας του ιού φλαβά.

    Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (έτσι αποκρυπτογραφούνται συντομογραφία) δείχνει ποσοτική τιμή οργανισμό ιική αλλοίωση, ποιοτικά χαρακτηριστικά της, καθώς και τον γονότυπο που περιέχουν RNA.

    Στη βάση τους, καθώς και με βάση πρόσθετες αναλύσεις, προσδιορίζεται η μέθοδος και η διάρκεια της θεραπείας, καθώς και ο επιδημιολογικός παράγοντας (ο κίνδυνος μετάδοσης σε άλλο φορέα).

    Τι είναι η ανάλυση RNA για την ηπατίτιδα C;

    Η PCR της ηπατίτιδας C ονομάζεται επίσης ανάλυση RNA (HCV RNA), επειδή δεν είναι γνωστή. Ο ιός Flava αντιπροσωπεύει ένα σωματίδιο RNA με μέγεθος ιού 30-60 nm. Ένα από τα χαρακτηριστικά αυτού του μικροοργανισμού είναι η υψηλή τάση προς τις μεταλλάξεις.

    Κάθε ένα από τα υποείδη (γονότυποι) του ιού έχει διαφορετική αντίσταση, η οποία προκαλεί διαφορετικές μεθόδους θεραπείας και τη φύση της περαιτέρω πρόγνωσης για τον ασθενή.

    Βιολογικό υλικό (φλεβικό αίμα) εξετάζεται νηστείας και συνήθως δοκιμάζονται από PCR Πραγματικού χρόνου (ιδιαίτερα ευαίσθητη διαγνωστική σε πραγματικό χρόνο για να καθορίσει το κατώτατο όριο των 15 IU / ml χρησιμοποιώντας την αυτοματοποιημένη λειτουργία κλειστό σύστημα).

    Υπάρχουν και άλλες δοκιμές, για παράδειγμα το COBAS AMPLICOR με ευαισθησία 50-100 IU / ml. Για οποιαδήποτε εργαστηριακή μελέτη, το όριο ευαισθησίας είναι σημαντικό, δηλ. την ικανότητα του αντιδραστηρίου να ανιχνεύει την ελάχιστη συγκέντρωση του ιού στο βιολογικό υλικό.

    Τύποι ανάλυσης για την ηπατίτιδα C με χρήση της μεθόδου PCR

    Η PCR για την ηπατίτιδα C περιλαμβάνει τρία σημαντικά στοιχεία:

    • ποιοτική ανάλυση ·
    • ποσοτική ανάλυση.
    • γονοτυπία.

    Αυτές οι δοκιμές μπορούν να καθορίσουν τη φύση της ιαιμίας, καθώς και τα γενετικά σημάδια του παθογόνου. Ανάλογα με την ευαισθησία του διαγνωστικού συστήματος, η δοκιμή εκτελείται μία φορά και μερικές φορές γίνεται μια δεύτερη δοκιμή με πιο ευαίσθητο αντιδραστήριο για να επιβεβαιωθούν ή να βελτιωθούν τα αποτελέσματα.

    Ποιοτική PCR για την ηπατίτιδα C

    Η ανάλυση PCR για την ποιότητα της ηπατίτιδας C είναι μια άλλη κοινή ονομασία για τη δοκιμασία αλυσωτής αντίδρασης πολυμεράσης. Η τυπική ευαισθησία της δοκιμής, η οποία επιτρέπει την ανίχνευση της παρουσίας μιας ιογενούς αλλοίωσης, κυμαίνεται από 10-500 IU / ml.

    Η αρνητική ανάλυση της PCR για την ηπατίτιδα C δείχνει ότι η συγκέντρωση του ιού στο αίμα του ασθενούς είναι κάτω από το όριο της ευαισθησίας του διαγνωστικού συστήματος.

    Εάν η ποιοτική PCR έδωσε μια απάντηση "δεν ανιχνεύθηκε", τότε για την επακόλουθη θεραπεία είναι σημαντικό να γνωρίζουμε το όριο ευαισθησίας του αντιδραστηρίου.

    Τα πρωτεϊνικά κλάσματα στον ιό φλαβά εμφανίζονται πολύ αργότερα.

    Ποσοτική PCR της ηπατίτιδας C

    Ποσοτική PCR της ηπατίτιδας C - ένα μέτρο του ιικού φορτίου, που εμφανίζει το επίπεδο της συγκέντρωσης του RNA flavavirusa στο σώμα. Αυτός είναι ένας δείκτης που δείχνει πόσα θραύσματα ιικού RNA περιέχονται σε ένα κυβικό εκατοστό αίματος. PCR της ηπατίτιδας C RNA αποτελέσματα ποσοτικών δοκιμών στο συμβατικό σύστημα υποδεικνύονται σε διεθνείς μονάδες ανά ml (IU / ml) και μπορεί να καταγράφονται με διαφορετικούς τρόπους, για παράδειγμα - 1.7 ppm ή 1,700,000 IU / ml.

    Ποσοτική PCR διάγνωση των ασθενών με ηπατίτιδα C αποδίδεται πριν την έναρξη της αντι-ιική θεραπεία, και στις 12 εβδομάδες της θεραπείας, για την αξιολόγηση των αποτελεσμάτων της επιλεγμένης μεθόδου για την αντιμετώπιση HCV. Το ιικό φορτίο σας επιτρέπει να εντοπίσετε τρεις σημαντικούς δείκτες της νόσου:

    • μολυσματικότητα, δηλ. ο βαθμός κινδύνου μετάδοσης του ιού από έναν φορέα στον άλλο (όσο υψηλότερη είναι η συγκέντρωση του RNA του φλαβοϊού, τόσο μεγαλύτερη είναι η πιθανότητα μόλυνσης άλλου ατόμου, για παράδειγμα, κατά τη σεξουαλική επαφή).
    • τη μέθοδο και την αποτελεσματικότητα της θεραπείας.
    • τη διάρκεια και την πρόγνωση της αντιιικής θεραπείας (όσο υψηλότερο είναι το ιογενές φορτίο, τόσο μεγαλύτερη είναι η διάρκεια της θεραπείας).

    Η ποσοτική PCR διάγνωση της ηπατίτιδας C εξαρτάται από τον τύπο της εργαστηριακής δοκιμασίας και το κατώφλι της ευαισθησίας της. Το κατώτερο όριο του κανόνα θεωρείται συνήθως έως 600.000 IU / ml, η μέση τιμή κυμαίνεται από 600.000-700.000 IU / ml. Αποτελέσματα από 800.000 IU / mL και παραπάνω θεωρούνται υψηλά επίπεδα ιού που περιέχει RNA.

    Γονότυπο

    Λόγω της υψηλής μεταλλακτικής δραστηριότητας του HCV στη φύση, είναι σημαντικό να προσδιοριστεί στο στάδιο της δοκιμής ποιος είναι ο γονότυπος του ιού στο αίμα του ασθενούς. Συνολικά, 11 γονότυποι του ιού της ηπατίτιδας C καταγράφονται στον πλανήτη, οι οποίοι περιλαμβάνουν πολλά υποείδη. Στο έδαφος της Ρωσικής Ομοσπονδίας, τα 1,2 και 3 είναι κοινά.

    Το PCR RNA της ηπατίτιδας C μαζί με τον προσδιορισμό του γονότυπου είναι ένα πολύ σημαντικό συστατικό της ανάλυσης, επειδή επιτρέπει στον γιατρό να καθορίσει την αντίσταση (αντίσταση) του ιού, να επιλέξει κατάλληλα φάρμακα και να συνταγογραφήσει μια πορεία θεραπείας.

    Η γονότυπη σας επιτρέπει επίσης να καθορίσετε έμμεσα την κατάσταση του ήπατος. Για παράδειγμα, ο 3 γονότυπος του HCV συχνά συνοδεύεται από στεάτωση, στην οποία συσσωρεύεται λίπος στα κύτταρα του σώματος.

    Η εξέταση αίματος για PCR στην ηπατίτιδα C θα πρέπει να δώσει ένα σχήμα που καθορίζει τον γονότυπο. Σε εργαστηριακές απαντήσεις μπορεί να γραφτεί "μη δακτυλογραφημένο" - και αυτό σημαίνει ότι υπάρχει ένας ιός στο ανθρώπινο αίμα που δεν καθορίζεται από το σύστημα δοκιμών. Αυτό μπορεί να υποδεικνύει ότι ο γονότυπος δεν είναι χαρακτηριστικός για μια δεδομένη γεωγραφική περιοχή. Σε αυτή την περίπτωση, είναι απαραίτητο να επαναληφθεί η ανάλυση με μεγαλύτερη ευαισθησία του διαγνωστικού συστήματος.

    Αποκωδικοποίηση της ανάλυσης PCR για ηπατίτιδα C

    Η δοκιμή για PCR για ηπατίτιδα C μπορεί να ποσοτικοποιηθεί με βάση τα παραπάνω δεδομένα. Κατά τη λήψη των αποτελεσμάτων των εργαστηριακών εξετάσεων, συνήθως συντάσσονται τα ακόλουθα δεδομένα:

    • "Βρέθηκε" / "δεν βρέθηκε" (υψηλής ποιότητας PCR για ηπατίτιδα C).
    • την ποσότητα των κλασμάτων που περιέχουν RNA, για παράδειγμα 831.680 IU / ml (προσδιορισμός ποσοτικού PCR).
    • το σχήμα που καθορίζει τον HCV γονότυπο, για παράδειγμα - 1, 2, 3, 4;
    • το όνομα της δοκιμής είναι πιο συχνά σε πραγματικό χρόνο.

    Το σημαντικότερο στην αποκρυπτογράφηση της ανάλυσης PCR για την ηπατίτιδα C είναι το δεύτερο στοιχείο, το οποίο δείχνει το ιικό φορτίο που καθορίζει την πρόγνωση, τη μέθοδο και τη διάρκεια της θεραπείας.

    Αν η ανάλυση PCR για την ηπατίτιδα C είναι αρνητική και η ELISA θετική - τι σημαίνει αυτό;

    Για να αποκρυπτογραφήσετε εργαστηριακές εξετάσεις, είναι σημαντικό να επικοινωνήσετε με έναν ειδικό ηπατολόγου ή μολυσματικής νόσου, ο οποίος θα εξηγήσει τις πληροφορίες που λαμβάνει σύμφωνα με το είδος του διαγνωστικού συστήματος και το κατώφλι της ευαισθησίας του. Στην ιατρική πρακτική, υπάρχουν πολλά δεδομένα από τα τεστ αίματος που μπορούν να οδηγήσουν σε σύγχυση ένα άτομο χωρίς ιατρική εκπαίδευση.

    Για παράδειγμα, εάν η δοκιμή για HCV PCR αρνητικά και θετικά ELISA, αυτό μπορεί να υποδεικνύει ότι αυτή τη στιγμή στο αίμα του ασθενούς δεν είναι HCV, αλλά πριν αυτός δέχτηκε οξεία μορφή της ηπατίτιδας C. Θεωρείται ότι η θετική-συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία (ELISA) δείχνει ότι στο αίμα υπάρχουν αντισώματα που παράγονται μετά την εισβολή του ιού στο παρελθόν. Αλλά στη σύγχρονη ιατρική πρακτική ανάλυση ELISA δεν είναι επαρκώς αξιόπιστο και συχνά δίνει ασυνήθιστα αποτελέσματα, έτσι ώστε οι γιατροί το χρησιμοποιούν ως κύριο έλεγχο. Κατά τη διάγνωση της νόσου, οι ειδικοί καθοδηγούνται ακριβώς με δοκιμές PCR.

    Χρήσιμο βίντεο

    Στο παρακάτω βίντεο, είναι πολύ λεπτομερές και ενδιαφέρον να πούμε ποια είναι η ουσία της μεθόδου PCR, πώς γίνεται η ανάλυση:

    Συμπέρασμα

    Το φλεβικό αίμα λαμβάνεται συνήθως για ανάλυση της PCR της ηπατίτιδας C. Τις περισσότερες φορές υπάρχει διπλή δειγματοληψία ενός βιολογικού υλικού - για ELISA και απευθείας για μια δοκιμή PCR. Για τα σωστά αποτελέσματα των δοκιμών, απαιτείται η τήρηση των βασικών κανόνων εργαστηριακής δειγματοληψίας βιολογικού υλικού:

    • Το αίμα για ανάλυση δίνεται το πρωί με άδειο στομάχι.
    • μεταξύ του φαγητού και του αίματος θα πρέπει να διαρκεί τουλάχιστον 8 ώρες.
    • Πριν κάνετε τη δοκιμή, θα πρέπει επίσης να αποκλείσετε το οινόπνευμα και τα τηγανητά τρόφιμα.
    • Κατά τη διάρκεια της ημέρας πριν από την παροχή αίματος, πρέπει να αποφύγετε υψηλή σωματική άσκηση.

    Τα αποτελέσματα των εξετάσεων αίματος είναι συνήθως έτοιμα την επόμενη μέρα.


    Σχετικά Άρθρα Ηπατίτιδα

    Ποιος είναι άρρωστος

    Ηπατίτιδα C PCR

    Ποιος είναι άρρωστος

    Φόρουμ για την ηπατίτιδα