Ποιοτική και ποσοτική ανάλυση της PCR για ηπατίτιδα C: αρνητική, θετική, αποκωδικοποίηση

Share Tweet Pin it

Η ηπατίτιδα C είναι μια ιογενής νόσος του ήπατος που προκαλείται από τον HCV του φλαβοϊού (από τον ιό της ηπατίτιδας C), που περιέχει μόριο ριβονουκλεϊνικού οξέος (RNA). Το RNA φέρει τον γενετικό κώδικα του ιού. Η παρουσία της επιτρέπει την ανάλυση της PCR για την ηπατίτιδα C.

Ο HCV είναι ένας κίνδυνος για τον άνθρωπο και ότι η λεγόμενη ορολογική παράθυρο (ο χρόνος μεταξύ της μόλυνσης και της εμφάνισης της αντίδρασης από το ανοσοποιητικό σύστημα) μπορεί να είναι αρκετά μακρύ - από μερικές εβδομάδες έως έξι μήνες.

Αυτό δεν αποκαλύπτει τη μόλυνση και αρχίζει την επεξεργασία εγκαίρως.

Ανάλογα με τα μεμονωμένα χαρακτηριστικά του σώματος του ξενιστή, το HCV μπορεί να εμφανιστεί σε οξεία μορφή και μπορεί επίσης να αναπτυχθεί ως μια χρόνια ασθένεια που θα απαιτήσει μακροχρόνια και δαπανηρή θεραπεία. Όταν η ανίχνευση των αντισωμάτων κατά του HCV πραγματοποίησε μια σειρά εργαστηριακών δοκιμών, συμπεριλαμβανομένων PCR για ηπατίτιδα C. Αυτή η δοκιμή γίνεται σε όλους τους ανθρώπους, τα αντισώματα αντι-ΗΟν βρέθηκαν στο αίμα ενός ατόμου.

Τι είναι η ανάλυση PCR;

Εργαστηριακή ανάλυση της PCR για την ηπατίτιδα C - μελέτη βιολογικού υλικού για τον εντοπισμό της παρουσίας του ιού φλαβά.

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (έτσι αποκρυπτογραφούνται συντομογραφία) δείχνει ποσοτική τιμή οργανισμό ιική αλλοίωση, ποιοτικά χαρακτηριστικά της, καθώς και τον γονότυπο που περιέχουν RNA.

Στη βάση τους, καθώς και με βάση πρόσθετες αναλύσεις, προσδιορίζεται η μέθοδος και η διάρκεια της θεραπείας, καθώς και ο επιδημιολογικός παράγοντας (ο κίνδυνος μετάδοσης σε άλλο φορέα).

Τι είναι η ανάλυση RNA για την ηπατίτιδα C;

Η PCR της ηπατίτιδας C ονομάζεται επίσης ανάλυση RNA (HCV RNA), επειδή δεν είναι γνωστή. Ο ιός Flava αντιπροσωπεύει ένα σωματίδιο RNA με μέγεθος ιού 30-60 nm. Ένα από τα χαρακτηριστικά αυτού του μικροοργανισμού είναι η υψηλή τάση προς τις μεταλλάξεις.

Κάθε ένα από τα υποείδη (γονότυποι) του ιού έχει διαφορετική αντίσταση, η οποία προκαλεί διαφορετικές μεθόδους θεραπείας και τη φύση της περαιτέρω πρόγνωσης για τον ασθενή.

Βιολογικό υλικό (φλεβικό αίμα) εξετάζεται νηστείας και συνήθως δοκιμάζονται από PCR Πραγματικού χρόνου (ιδιαίτερα ευαίσθητη διαγνωστική σε πραγματικό χρόνο για να καθορίσει το κατώτατο όριο των 15 IU / ml χρησιμοποιώντας την αυτοματοποιημένη λειτουργία κλειστό σύστημα).

Υπάρχουν και άλλες δοκιμές, για παράδειγμα το COBAS AMPLICOR με ευαισθησία 50-100 IU / ml. Για οποιαδήποτε εργαστηριακή μελέτη, το όριο ευαισθησίας είναι σημαντικό, δηλ. την ικανότητα του αντιδραστηρίου να ανιχνεύει την ελάχιστη συγκέντρωση του ιού στο βιολογικό υλικό.

Τύποι ανάλυσης για την ηπατίτιδα C με χρήση της μεθόδου PCR

Η PCR για την ηπατίτιδα C περιλαμβάνει τρία σημαντικά στοιχεία:

  • ποιοτική ανάλυση ·
  • ποσοτική ανάλυση.
  • γονοτυπία.

Αυτές οι δοκιμές μπορούν να καθορίσουν τη φύση της ιαιμίας, καθώς και τα γενετικά σημάδια του παθογόνου. Ανάλογα με την ευαισθησία του διαγνωστικού συστήματος, η δοκιμή εκτελείται μία φορά και μερικές φορές γίνεται μια δεύτερη δοκιμή με πιο ευαίσθητο αντιδραστήριο για να επιβεβαιωθούν ή να βελτιωθούν τα αποτελέσματα.

Ποιοτική PCR για την ηπατίτιδα C

Η ανάλυση PCR για την ποιότητα της ηπατίτιδας C είναι μια άλλη κοινή ονομασία για τη δοκιμασία αλυσωτής αντίδρασης πολυμεράσης. Η τυπική ευαισθησία της δοκιμής, η οποία επιτρέπει την ανίχνευση της παρουσίας μιας ιογενούς αλλοίωσης, κυμαίνεται από 10-500 IU / ml.

Η αρνητική ανάλυση της PCR για την ηπατίτιδα C δείχνει ότι η συγκέντρωση του ιού στο αίμα του ασθενούς είναι κάτω από το όριο της ευαισθησίας του διαγνωστικού συστήματος.

Εάν η ποιοτική PCR έδωσε μια απάντηση "δεν ανιχνεύθηκε", τότε για την επακόλουθη θεραπεία είναι σημαντικό να γνωρίζουμε το όριο ευαισθησίας του αντιδραστηρίου.

Τα πρωτεϊνικά κλάσματα στον ιό φλαβά εμφανίζονται πολύ αργότερα.

Ποσοτική PCR της ηπατίτιδας C

Ποσοτική PCR της ηπατίτιδας C - ένα μέτρο του ιικού φορτίου, που εμφανίζει το επίπεδο της συγκέντρωσης του RNA flavavirusa στο σώμα. Αυτός είναι ένας δείκτης που δείχνει πόσα θραύσματα ιικού RNA περιέχονται σε ένα κυβικό εκατοστό αίματος. PCR της ηπατίτιδας C RNA αποτελέσματα ποσοτικών δοκιμών στο συμβατικό σύστημα υποδεικνύονται σε διεθνείς μονάδες ανά ml (IU / ml) και μπορεί να καταγράφονται με διαφορετικούς τρόπους, για παράδειγμα - 1.7 ppm ή 1,700,000 IU / ml.

Ποσοτική PCR διάγνωση των ασθενών με ηπατίτιδα C αποδίδεται πριν την έναρξη της αντι-ιική θεραπεία, και στις 12 εβδομάδες της θεραπείας, για την αξιολόγηση των αποτελεσμάτων της επιλεγμένης μεθόδου για την αντιμετώπιση HCV. Το ιικό φορτίο σας επιτρέπει να εντοπίσετε τρεις σημαντικούς δείκτες της νόσου:

  • μολυσματικότητα, δηλ. ο βαθμός κινδύνου μετάδοσης του ιού από έναν φορέα στον άλλο (όσο υψηλότερη είναι η συγκέντρωση του RNA του φλαβοϊού, τόσο μεγαλύτερη είναι η πιθανότητα μόλυνσης άλλου ατόμου, για παράδειγμα, κατά τη σεξουαλική επαφή).
  • τη μέθοδο και την αποτελεσματικότητα της θεραπείας.
  • τη διάρκεια και την πρόγνωση της αντιιικής θεραπείας (όσο υψηλότερο είναι το ιογενές φορτίο, τόσο μεγαλύτερη είναι η διάρκεια της θεραπείας).

Η ποσοτική PCR διάγνωση της ηπατίτιδας C εξαρτάται από τον τύπο της εργαστηριακής δοκιμασίας και το κατώφλι της ευαισθησίας της. Το κατώτερο όριο του κανόνα θεωρείται συνήθως έως 600.000 IU / ml, η μέση τιμή κυμαίνεται από 600.000-700.000 IU / ml. Αποτελέσματα από 800.000 IU / mL και παραπάνω θεωρούνται υψηλά επίπεδα ιού που περιέχει RNA.

Γονότυπο

Λόγω της υψηλής μεταλλακτικής δραστηριότητας του HCV στη φύση, είναι σημαντικό να προσδιοριστεί στο στάδιο της δοκιμής ποιος είναι ο γονότυπος του ιού στο αίμα του ασθενούς. Συνολικά, 11 γονότυποι του ιού της ηπατίτιδας C καταγράφονται στον πλανήτη, οι οποίοι περιλαμβάνουν πολλά υποείδη. Στο έδαφος της Ρωσικής Ομοσπονδίας, τα 1,2 και 3 είναι κοινά.

Το PCR RNA της ηπατίτιδας C μαζί με τον προσδιορισμό του γονότυπου είναι ένα πολύ σημαντικό συστατικό της ανάλυσης, επειδή επιτρέπει στον γιατρό να καθορίσει την αντίσταση (αντίσταση) του ιού, να επιλέξει κατάλληλα φάρμακα και να συνταγογραφήσει μια πορεία θεραπείας.

Η γονότυπη σας επιτρέπει επίσης να καθορίσετε έμμεσα την κατάσταση του ήπατος. Για παράδειγμα, ο 3 γονότυπος του HCV συχνά συνοδεύεται από στεάτωση, στην οποία συσσωρεύεται λίπος στα κύτταρα του σώματος.

Η εξέταση αίματος για PCR στην ηπατίτιδα C θα πρέπει να δώσει ένα σχήμα που καθορίζει τον γονότυπο. Σε εργαστηριακές απαντήσεις μπορεί να γραφτεί "μη δακτυλογραφημένο" - και αυτό σημαίνει ότι υπάρχει ένας ιός στο ανθρώπινο αίμα που δεν καθορίζεται από το σύστημα δοκιμών. Αυτό μπορεί να υποδεικνύει ότι ο γονότυπος δεν είναι χαρακτηριστικός για μια δεδομένη γεωγραφική περιοχή. Σε αυτή την περίπτωση, είναι απαραίτητο να επαναληφθεί η ανάλυση με μεγαλύτερη ευαισθησία του διαγνωστικού συστήματος.

Αποκωδικοποίηση της ανάλυσης PCR για ηπατίτιδα C

Η δοκιμή για PCR για ηπατίτιδα C μπορεί να ποσοτικοποιηθεί με βάση τα παραπάνω δεδομένα. Κατά τη λήψη των αποτελεσμάτων των εργαστηριακών εξετάσεων, συνήθως συντάσσονται τα ακόλουθα δεδομένα:

  • "Βρέθηκε" / "δεν βρέθηκε" (υψηλής ποιότητας PCR για ηπατίτιδα C).
  • την ποσότητα των κλασμάτων που περιέχουν RNA, για παράδειγμα 831.680 IU / ml (προσδιορισμός ποσοτικού PCR).
  • το σχήμα που καθορίζει τον HCV γονότυπο, για παράδειγμα - 1, 2, 3, 4;
  • το όνομα της δοκιμής είναι πιο συχνά σε πραγματικό χρόνο.

Το σημαντικότερο στην αποκρυπτογράφηση της ανάλυσης PCR για την ηπατίτιδα C είναι το δεύτερο στοιχείο, το οποίο δείχνει το ιικό φορτίο που καθορίζει την πρόγνωση, τη μέθοδο και τη διάρκεια της θεραπείας.

Αν η ανάλυση PCR για την ηπατίτιδα C είναι αρνητική και η ELISA θετική - τι σημαίνει αυτό;

Για να αποκρυπτογραφήσετε εργαστηριακές εξετάσεις, είναι σημαντικό να επικοινωνήσετε με έναν ειδικό ηπατολόγου ή μολυσματικής νόσου, ο οποίος θα εξηγήσει τις πληροφορίες που λαμβάνει σύμφωνα με το είδος του διαγνωστικού συστήματος και το κατώφλι της ευαισθησίας του. Στην ιατρική πρακτική, υπάρχουν πολλά δεδομένα από τα τεστ αίματος που μπορούν να οδηγήσουν σε σύγχυση ένα άτομο χωρίς ιατρική εκπαίδευση.

Για παράδειγμα, εάν η δοκιμή για HCV PCR αρνητικά και θετικά ELISA, αυτό μπορεί να υποδεικνύει ότι αυτή τη στιγμή στο αίμα του ασθενούς δεν είναι HCV, αλλά πριν αυτός δέχτηκε οξεία μορφή της ηπατίτιδας C. Θεωρείται ότι η θετική-συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία (ELISA) δείχνει ότι στο αίμα υπάρχουν αντισώματα που παράγονται μετά την εισβολή του ιού στο παρελθόν. Αλλά στη σύγχρονη ιατρική πρακτική ανάλυση ELISA δεν είναι επαρκώς αξιόπιστο και συχνά δίνει ασυνήθιστα αποτελέσματα, έτσι ώστε οι γιατροί το χρησιμοποιούν ως κύριο έλεγχο. Κατά τη διάγνωση της νόσου, οι ειδικοί καθοδηγούνται ακριβώς με δοκιμές PCR.

Χρήσιμο βίντεο

Στο παρακάτω βίντεο, είναι πολύ λεπτομερές και ενδιαφέρον να πούμε ποια είναι η ουσία της μεθόδου PCR, πώς γίνεται η ανάλυση:

Συμπέρασμα

Το φλεβικό αίμα λαμβάνεται συνήθως για ανάλυση της PCR της ηπατίτιδας C. Τις περισσότερες φορές υπάρχει διπλή δειγματοληψία ενός βιολογικού υλικού - για ELISA και απευθείας για μια δοκιμή PCR. Για τα σωστά αποτελέσματα των δοκιμών, απαιτείται η τήρηση των βασικών κανόνων εργαστηριακής δειγματοληψίας βιολογικού υλικού:

  • Το αίμα για ανάλυση δίνεται το πρωί με άδειο στομάχι.
  • μεταξύ του φαγητού και του αίματος θα πρέπει να διαρκεί τουλάχιστον 8 ώρες.
  • Πριν κάνετε τη δοκιμή, θα πρέπει επίσης να αποκλείσετε το οινόπνευμα και τα τηγανητά τρόφιμα.
  • Κατά τη διάρκεια της ημέρας πριν από την παροχή αίματος, πρέπει να αποφύγετε υψηλή σωματική άσκηση.

Τα αποτελέσματα των εξετάσεων αίματος είναι συνήθως έτοιμα την επόμενη μέρα.

Διάγνωση του ιού της ηπατίτιδας C

Ο ιός της ηπατίτιδας C (HCV) είναι ένας ιός που περιέχει RNA από την οικογένεια Flaviviridae. Αυτή η μόλυνση είναι σε θέση να πολλαπλασιάζεται στα κύτταρα του αίματος (μονοκύτταρα, ουδετερόφιλα, λεμφοκύτταρα Β και μακροφάγα) και επηρεάζουν επίσης το ίδιο το συκώτι κύτταρα - ηπατοκύτταρα. Λόγω του υψηλού βαθμού δραστηριότητας μετάλλαξης, αυτός ο τύπος ηπατίτιδας είναι σε θέση να αποφύγει την επίδραση του ανθρώπινου ανοσοποιητικού συστήματος.

Υπάρχουν 11 γονότυποι και μια μάζα υποτύπων ενός τέτοιου ιού που διαφέρουν ως προς τον βαθμό της ηπατικής βλάβης και επηρεάζουν τον χρόνο της θεραπείας της ηπατίτιδας. Μια τέτοια ποικιλία ηπατίτιδας C απαιτεί διαφορετικές μεθόδους αντιιικής θεραπείας. Για παράδειγμα, η ηπατίτιδα 1 st και 4 ου γονότυποι θα πρέπει να αντιμετωπίζονται για 48 εβδομάδες, και για μια πορεία της θεραπείας κατά του ιού του 2ου και 3ου ειδών μπορεί να απαιτείται μόνο 24 εβδομάδες.

Μετά την ταχεία δοκιμή για την ηπατίτιδα C έδωσε ένα θετικό αποτέλεσμα, πραγματοποιείται ανάλυση PCR για τον προσδιορισμό του RNA του ιού σε δείγματα αίματος.

Διαγνωστικά PCR

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) είναι μια πειραματική τεχνική για την ανίχνευση ιών. Μια τέτοια ανάλυση για την ηπατίτιδα C επιτρέπει μια σημαντική αύξηση της συγκέντρωσης ορισμένων θραυσμάτων του ιού DNA ή RNA στα υποβληθέντα δείγματα. Αυτό καθιστά δυνατή την αναγνώρισή τους και ακόμη και τον αριθμό.

Αυτή η δοκιμή για την ηπατίτιδα C πραγματοποιείται σύμφωνα με την ακόλουθη διαδικασία:

  1. Ένα δείγμα αίματος (γενετικό υλικό), το οποίο μπορεί να περιέχει το επιθυμητό γονίδιο ηπατίτιδας, εισάγεται σε δοκιμαστικό σωλήνα. Στη θέση της ειδικές ουσίες - αστάρια, είναι τμήματα μικρού μήκους από το επιθυμητό γονίδιο, τα οποία συντίθενται χημικά. Σε αυτό το δοχείο προστίθεται επίσης πολυμεράση ϋΝΑ ή RNA, είναι ικανή να δημιουργήσει αλυσίδες νουκλεϊκού οξέος, εντελώς ταυτόσημες με τις αρχικές. Σε αυτή τη σύνθεση προστίθεται και η επιλογή των ελεύθερων νουκλεοτιδίων είναι διακριτές δομικές μονάδες του DNA και RNA, ένα από τα οποία περιέχει τα λεπτότερα σωματίδια από το ραδιενεργό φώσφορο.
  2. Το προκύπτον μίγμα αρχικά θερμαίνεται στους 95 βαθμούς, λόγω του οποίου παρεμβάλλονται στην κανονική κατάσταση, και οι δύο έλικες ϋΝΑ εξασθενούν λόγω αυτής της επίδρασης.
  3. Για να συνεχίσετε την ανάλυση του παρασκευάσματος ψύχεται, στο οποίο σημείο οι εκκινητές συνδέεται με ένα επιθυμητό τμήμα του γονιδιώματος του ιού της ηπατίτιδας C, μη επιτρέποντας το DNA για να σχηματίσουν ένα διπλό έλικα. Όταν το μίγμα ψυχθεί, η πολυμεράση αναζητά μονές έλικες νουκλεοτιδίων. Κατά τη διάρκεια προσάρτηση του ενζύμου ολισθαίνει επί του κλώνου του DNA (όπως μια μονάδα από ένα καλώδιο), ενώ η διπλή έλικα δεν είναι σε θέση να «εργασία», και αυτή η απεικόνιση πραγματοποιείται μίγμα.
  4. Για να παραταθεί η ανάλυση, πραγματοποιείται επαναθέρμανση, η οποία οδηγεί και πάλι στον διαχωρισμό των νουκλεοτιδικών αλυσίδων. Κατά την εκτέλεση τέτοιων PCR κύκλων στο δείγμα, ο αριθμός των γονιδίων της ηπατίτιδας επιζητούσε αύξηση της γεωμετρικής αναλογίας και τα υπόλοιπα γενετικά υλικά παράγονται (σχηματίζονται) μόνο σε γραμμική κανονικότητα.
  5. Για να ολοκληρωθεί η μελέτη, το διάλυμα καθαρίζεται από υπολειμματικά σωματίδια νουκλεοτιδίων. Διαχωρίζονται με ηλεκτροφόρηση, με τον διαχωρισμό μοριακών αλυσίδων DNA από τις παραμέτρους του μοριακού βάρους. Τέτοιες δοκιμές για ηπατίτιδα με τη βοήθεια PCR επιτρέπουν να προσδιοριστεί αν τα επιθυμητά γονίδια του ιού υπάρχουν στο δείγμα ή όχι.

Το πλεονέκτημα αυτής της δοκιμής είναι το πολύ υψηλό όριο ευαισθησίας της αντίδρασης PCR. Μια τέτοια τεχνική για τη διεξαγωγή διαγνωστικών, ιδανικά, απαιτεί μόνο ένα γονιδίωμα του ιού για ολόκληρο το δείγμα.

Επιπλέον, αυτή η PCR είναι εντελώς ειδική. Σε κάθε ένα από τα γονίδια υπάρχει μια μοναδική αλληλουχία νουκλεοτιδίων, η οποία, όπως ένα δακτυλικό αποτύπωμα, δεν μπορεί να επαναληφθεί οπουδήποτε. Για αυτή την ανάλυση ηπατίτιδας C, τα εναρκτήρια μόρια συντίθενται με τέτοιο τρόπο ώστε να αντιστοιχούν απολύτως στα μοναδικά τμήματα των επιθυμητών γονιδίων που δεν έχει άλλη αλληλουχία.

Αυτή η τεχνική καθιστά επίσης δυνατή την ανάλυση και τον προσδιορισμό της ηπατίτιδας στο c, συμβάλλοντας στην καθιέρωση μιας οριστικής διάγνωσης.

Μια τέτοια εργαστηριακή ανάλυση επιτρέπει τη λήψη πληροφοριών περισσότερο από την παρουσία ή απουσία HCV RNA ή άλλου τύπου σε δείγματα αίματος. Καθορίζοντας την παράμετρο της ραδιενεργού ακτινοβολίας, υπάρχει επίσης η ευκαιρία να αποκαλυφθεί πόσο αρχικά βρέθηκε το επιθυμητό γενετικό υλικό στο υπό μελέτη δείγμα. Αυτό μας επιτρέπει να προσδιορίσουμε την παράμετρο του λεγόμενου ιικού φορτίου - τη συγκέντρωση σωματιδίων RNA ηπατίτιδας σε έναν ορισμένο όγκο.

Ποιοτική ανάλυση PCR

Η ανάλυση αυτή επιτρέπει τον προσδιορισμό της παρουσίας του ιού της ηπατίτιδας σε δείγματα αίματος. Πρέπει να γίνει για όλους τους ανθρώπους που έχουν βρεθεί ότι έχουν αντισώματα στην ηπατίτιδα.

Ως αποτέλεσμα μιας τέτοιας μελέτης μπορεί να υπάρχουν μόνο δύο τιμές:

  • "Ανακαλύφθηκε." Ένα τέτοιο θετικό αποτέλεσμα εξέτασης ερμηνεύεται ως εξής: τα θραύσματα του RNA του ιού της ηπατίτιδας βρέθηκαν στο αναλυθέν δείγμα από βιολογικό υλικό. Από αυτό προκύπτει ότι υπήρξε ένα γεγονός μόλυνσης του ασθενούς με αυτόν τον ιό. Αυτό μπορεί να υποδεικνύει ότι ο αιτιολογικός παράγοντας της ηπατίτιδας πολλαπλασιάζεται στο σώμα και μολύνει νέα κύτταρα, καταστρέφοντας το συκώτι.
  • Msgstr "Δεν εντοπίστηκε". Αυτό το αποτέλεσμα υποδεικνύει ότι στο δείγμα, το οποίο αναλύεται στο εργαστήριο, βρέθηκαν θραύσματα του RNA, το οποίο είναι ειδικό για τον ιό της ηπατίτιδας C Υπάρχει επίσης μια πιθανότητα ότι η συγκέντρωση του RNA ιού-παθογόνου στο δείγμα ήταν τόσο μικρή ώστε η δοκιμή δεν ήταν σε θέση να προσδιορίσει. Σε τέτοιες περιπτώσεις, λέγεται ότι το επίπεδο συγκέντρωσης είναι κάτω από το όριο ευαισθησίας της ανάλυσης.

Ένα τέτοιο τεστ μπορεί επίσης να είναι μια ψευδώς θετικά ή ψευδή αρνητικά λόγω της μόλυνσης του βιολογικού υλικού ή της παρουσίας συγκεκριμένων ουσιών σε δείγματα, που αντιδρούν με τα χημικά συστατικά απαραίτητα για την ανάλυση.

Πρέπει να τονιστεί ότι στις οξείες φάσεις της ηπατίτιδας C μια ποιοτική μελέτη που χρησιμοποιεί τη μέθοδο PCR μπορεί να ανιχνεύσει το RNA μετά από μόλις 1-2 εβδομάδες από τη στιγμή της μόλυνσης του σώματος. Αυτό σημαίνει ότι η ασθένεια μπορεί να εντοπιστεί πολύ πριν από την εμφάνιση των εξωτερικών συμπτωμάτων της ή την εμφάνιση αντισωμάτων στην ηπατίτιδα στο σώμα.

Η δειγματοληψία αίματος (από τη φλέβα) εκτελείται κατά προτίμηση με άδειο στομάχι.

Ποσοτική ανάλυση της PCR

Με τη βοήθεια αυτής της ανάλυσης, καθορίστε το επίπεδο συγκέντρωσης του ιού της ηπατίτιδας στον ασθενή (ιικό φορτίο). Μια τέτοια δοκιμή πρέπει να υποβληθεί για να εκτιμηθεί η ποσότητα του RNA του ιού σε μια μονάδα ορισμένου όγκου.

Η ανάλυση των δοκιμών για ηπατίτιδα c, που διεξάγεται χρησιμοποιώντας αυτή την τεχνική, μπορεί να έχει τα ακόλουθα αποτελέσματα:

  • Ποσοτικός δείκτης (σε αριθμούς)

Η συγκέντρωση του ιού (αριθμός) δίδεται σε αριθμητικούς όρους. Για να γίνει αυτό, χρησιμοποιούνται διαφορετικές μονάδες: είτε ME / ml (διεθνής μονάδα ανά χιλιοστόλιτρο) ή αντίγραφα / ml (ο αριθμός αντιγράφων του ιού RNA σε χιλιοστόλιτρα). Κατά μέσο όρο, 1 IU / mL αντιστοιχεί σε 4 αντίγραφα / ml, επειδή διαφορετικά συστήματα δοκιμής έχουν διαφορετικούς συντελεστές μετατροπής για αυτές τις μονάδες.

Το χαμηλό ιικό φορτίο θεωρείται ότι είναι μικρότερο από 400.000 IU / ml για αυτή τη δοκιμασία και το υψηλό είναι 8000000 IU / ml.

Αυτή η ποσοτική εκτίμηση επιτρέπει να προσδιοριστεί το επίπεδο μολυσματικότητας της νόσου («μολυσματικότητα») του ασθενούς. Όσο περισσότερο αυτός ο δείκτης ανάλυσης, τόσο μεγαλύτερος είναι ο κίνδυνος μετάδοσης του παθογόνου παράγοντα σε άλλους ανθρώπους (με σεξουαλική επαφή ή κάθετη διαδρομή).

Αυτή η ετυμηγορία σημαίνει ότι η ποσοτική μέθοδος δεν μπόρεσε να ανιχνεύσει RNA ηπατίτιδας, αλλά ο ίδιος ο ιός υπάρχει στο σώμα, μόνο σε πολύ χαμηλή συγκέντρωση. Αυτό επιβεβαιώθηκε με τη διεξαγωγή πρόσθετης ποιοτικής ανάλυσης της PCR και το θετικό αποτέλεσμα του δείχνει την παρουσία ηπατίτιδας.

  • Αποτέλεσμα "Δεν ανιχνεύθηκε"

    Αυτή η θετική ερμηνεία της ανάλυσης δείχνει ότι η ίδια η ποσοτική δοκιμή στο δείγμα αίματος δεν μπορούσε να ανιχνεύσει συγκεκριμένα σωματίδια RNA του ιού της ηπατίτιδας C.

  • Ποσοτική ανάλυση PCR διεξάγεται σε διάφορα στάδια της αντι-ιική θεραπεία (1η, 4η, 12η και 24η εβδομάδες) δίνει μια ένδειξη της αποτελεσματικότητας της θεραπείας και για να κάνει τις απαραίτητες διορθώσεις.

    Ειδικότητα της ανάλυσης

    Αυτή η δοκιμασία πρέπει να υποβληθεί για τον προσδιορισμό των διαφορετικών γενότυπων της ηπατίτιδας C. Επί του παρόντος, 11 γονότυποι αυτού του παθογόνου είναι γνωστοί και πολλοί υποτύποι. Οι γονοτύποι της ηπατίτιδας C του 1ου, 2ου και 3ου είδους είναι συνηθισμένοι στη χώρα μας. Στα εργαστήρια μπορούν να εντοπιστούν διάφοροι υποτύποι αυτών των ειδών: 1α, 1γ, 2α, 2γ ή 3, 4, 5, 6 γονότυποι με διάφορες τροποποιήσεις υποτύπων. Για όλη αυτή την ηπατίτιδα, η εξειδίκευση της ανίχνευσης είναι 100%.

    Η διευκρίνιση της τροποποίησης του γονότυπου καθιστά δυνατή την επιλογή κατάλληλης θεραπείας. Η παρουσία ενός συγκεκριμένου τύπου γονότυπου στον ασθενή δεν δείχνει ότι η νόσος είναι ευκολότερη ή πιο δύσκολη, είναι μόνο οι ποικιλίες του ιού της ηπατίτιδας και όχι περισσότερο.

    Στις περιπτώσεις που το εργαστήριο δεν μπορεί να απομονώσει τον γονότυπο του ιού, μπορεί να εκδοθεί ένα αποτέλεσμα: "Δεν πληκτρολογείται. Οι γονότυποι μελετήθηκαν: τέτοιες και τέτοιες (για παράδειγμα, 1a, 2b, 3av). Αυτό το αντίγραφο δείχνει ότι δεν υπήρχαν αντίστοιχα αντιδραστήρια σε αυτό το εργαστήριο που θα μπορούσαν να καθορίσουν τον γονότυπο του ιού της ηπατίτιδας. Στη μελέτη, έγινε έλεγχος για τους ιούς που δίνονται στον κατάλογο, αλλά δεν ανιχνεύθηκε η αντιστοιχία τους με δείγματα RNA.

    Για να γίνει μια τελική διάγνωση, μόνο ένα είδος ανάλυσης είναι ανεπαρκές. Κάθε μία από τις δοκιμές μπορεί να δώσει ένα ψευδώς θετικό αποτέλεσμα. Μια πολύπλοκη μελέτη γίνεται για να προσδιοριστεί ο ακριβής τύπος ηπατίτιδας και ο βαθμός μόλυνσης με αυτή τη λοίμωξη του σώματος. Ταυτόχρονα, γίνεται η βιοψία ήπατος και η εξέταση των ενζύμων του: ALAT, ASAT, καθώς και αλκαλική φωσφατάση και LDH. Μπορεί επίσης να πραγματοποιηθεί μια εξέταση χολερυθρίνης και ανάλυση δείκτη προθρομβίνης.

    Μόνο ένα σύνολο τέτοιων δοκιμών και εργαστηριακών εξετάσεων, με μια γενική ανάλυση της κατάστασης του ασθενούς, θα βοηθήσει στον προσδιορισμό της παρουσίας ηπατίτιδας στο σώμα, του σχήματος και του βαθμού σοβαρότητας. Στη βάση τους, ο γιατρός μπορεί να καθορίσει την περαιτέρω θεραπεία και να προβεί σε πιθανή πρόγνωση για τον ασθενή.

    HCV, RNA ποσοτικά [PCR σε πραγματικό χρόνο]

    Μελέτη για την αναγνώριση του αιτιολογικού παράγοντα της ηπατίτιδας C (HCV), με τον οποίο με την μέθοδο της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης σε πραγματικό χρόνο (RT-PCR) προσδιορίζεται από την παρουσία του γενετικού υλικού του ιού (RNA) και ο όγκος του (το ιικό φορτίο) στο δείγμα αίματος.

    Το HCV RNA μπορεί να ανιχνευθεί σε συγκέντρωση κάτω από το κατώτερο όριο της γραμμικής περιοχής συγκεντρώσεων. Το εύρος της γραμμικής συγκέντρωσης είναι το εύρος στο οποίο ο αριθμός των αντιγράφων του παθογόνου μπορεί να υπολογιστεί με ακρίβεια. Για την ανάλυση αυτή, η γραμμική περιοχή των συγκεντρώσεων του HCV DNA που προσδιορίζεται από τον ενισχυτή ανίχνευσης είναι 7,5 × 10 2 - 1,0 × 10 8 αντίγραφα / ml του δείγματος.

    Ρωσικά συνώνυμα

    Ο ιός της ηπατίτιδας C (HCV), ο ποσοτικός προσδιορισμός του RNA.

    Συνώνυμα Αγγλικά

    Ηπατίτιδας C RNA, ποσοτική, PCR σε πραγματικό χρόνο, αίμα, HCV ιικό φορτίο, ιό ηπατίτιδας C RNA Quant.

    Μέθοδος έρευνας

    Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης με αντίστροφη μεταγραφή σε πραγματικό χρόνο.

    Ποιο βιοϋλικό μπορεί να χρησιμοποιηθεί για έρευνα;

    Πώς να προετοιμαστεί σωστά για τη μελέτη;

    Μην καπνίζετε για 30 λεπτά προτού δώσετε αίμα.

    Γενικές πληροφορίες σχετικά με τη μελέτη

    Ο ιός της ηπατίτιδας C (HCV) είναι ένας ιός που περιέχει RNA από την οικογένεια Flaviviridae που επηρεάζει το ήπαρ. Είναι σε θέση να πολλαπλασιάζεται στα κύτταρα του αίματος (ουδετερόφιλα, μονοκύτταρα και μακροφάγα, λεμφοκύτταρα Β) και επάγουν κρυοσφαιριναιμία, νόσος του Sjogren και η νόσος του Β λεμφοϋπερπλαστικών κυττάρων. Ο HCV λόγω της υψηλής μεταλλακτικής δραστηριότητας είναι σε θέση να αποφύγει τις επιδράσεις των προστατευτικών μηχανισμών του ανοσοποιητικού συστήματος. Υπάρχουν 6 γονότυπους και πολλές υποτύπων που έχουν διαφορετικές τιμές για την πρόβλεψη της ασθένειας και της αποτελεσματικότητας της αντι-ιικής θεραπείας.

    Ο κύριος τρόπος μετάδοσης της λοίμωξης είναι μέσω του αίματος (παρασκευάσματα για μετάγγιση αίματος και πλάσματος, όργανα δότη, μη αποστειρωμένες σύριγγες, βελόνες, εργαλεία για τατουάζ, διάτρηση). Πιθανώς μόλυνση κατά τη σεξουαλική επαφή και το παιδί από τη μητέρα κατά τη διάρκεια του τοκετού, αλλά αυτό συμβαίνει σπάνια.

    Η οξεία ιογενής ηπατίτιδα, κατά κανόνα, χαρακτηρίζεται από μια ασυμπτωματική πορεία και παραμένει αδιάγνωστη στις περισσότερες περιπτώσεις. Μόνο το 15% της νόσου εμφανίζεται με οξεία προσβολή - ναυτία, πόνους στο σώμα, έλλειψη όρεξης και απώλεια βάρους (σπάνια συνοδεύεται από ίκτερο). Σε 60-85% των ατόμων που έχουν μολυνθεί αναπτύσσουν χρόνια μόλυνση, η οποία είναι 15 φορές υψηλότερη από τη συχνότητα της χρόνιας ηπατίτιδας Β Χρόνια ηπατίτιδα C λαμβάνει χώρα με αύξηση των ηπατικών ενζύμων και των φτωχών εκδήλωση των συμπτωμάτων. Σε 20-30% των ασθενών, η ασθένεια οδηγεί σε κίρρωση του ήπατος, αυξάνοντας τον κίνδυνο ηπατικής ανεπάρκειας και ηπατοκυτταρικού καρκίνου.

    Η ανίχνευση του HCV RNA δείχνει τον πολλαπλασιασμό του ιού στο σώμα και είναι μια μέθοδος διάγνωσης της νόσου. Το γενετικό υλικό του ιού μπορεί να ανιχνευθεί με PCR σε 10-12 ημέρες μετά την μόλυνση - κατά την περίοδο αυτή, τα ειδικά αντισώματα τα οποία παράγονται σε αρκετούς μήνες μετά την μόλυνση, και καμία λειτουργία του ήπατος είναι εντός μιας περιοχής αναφοράς.

    Με PCR, το RNA του ιού ανιχνεύεται ποιοτικά ή ποσοτικά. Λόγω της ποιοτικής μεθόδου επιβεβαιώνεται η παρουσία του ιού της ηπατίτιδας C και η ενεργός αναπαραγωγή του. Ο ποσοτικός προσδιορισμός του ιϊκού φορτίου λαμβάνοντας υπόψη τον HCV γονότυπο επιτρέπει τον έλεγχο της τρέχουσας θεραπείας και την πρόβλεψη της πορείας της νόσου.

    Η αποτελεσματικότητα της θεραπείας εκτιμάται με την ποσότητα του RNA πριν και κατά τη διάρκεια της θεραπείας. Τυπικά, το ιικό φορτίο του αίματος μειώνεται αρκετές φορές κατά τους πρώτους τρεις μήνες επιτυχούς θεραπείας. Με αποτελεσματική θεραπεία, η ιαιμία μειώνεται κατά δύο τάξεις μεγέθους κατά τις πρώτες 4-12 εβδομάδες θεραπείας και μετά τη λήξη της πορείας της θεραπείας, το γενετικό υλικό του ιού στο αίμα δεν ανιχνεύεται. Η απουσία μείωσης της ιαιμίας μετά από 12 εβδομάδες από την έναρξη της θεραπείας υποδεικνύει την αναποτελεσματικότητά της. Συνιστάται η διεξαγωγή της ανάλυσης πριν από την έναρξη της θεραπείας, την 4η, 12η και 24η εβδομάδα θεραπείας και 24 εβδομάδες μετά το πέρας της θεραπείας. Η διάρκεια της θεραπείας και η συχνότητα ποσοτικού προσδιορισμού του RNA του ιού της ηπατίτιδας C εξαρτάται από τον γονότυπο του ιού και τον βαθμό της ηπατικής βλάβης.

    Για ποια έρευνα χρησιμοποιείται;

    • Για να επιβεβαιώσετε τη διάγνωση της "ιογενούς ηπατίτιδας C".
    • Για την πρόβλεψη της πορείας της ιικής ηπατίτιδας C.
    • Παρακολούθηση της αντιιικής θεραπείας και αντιμετώπιση του προβλήματος των περαιτέρω τακτικών θεραπείας.

    Πότε ανατίθεται η μελέτη;

    • Με ποιοτική ανίχνευση του RNA του ιού της ηπατίτιδας C.
    • Στην οξεία και τη χρόνια ιογενή ηπατίτιδα C.
    • Με μικτή ηπατίτιδα.
    • Κατά τον προγραμματισμό, κατά τη διάρκεια και μετά το τέλος της αντιιικής θεραπείας.

    Τι σημαίνουν τα αποτελέσματα;

    • Δεν βρέθηκε - το RNA του ιού της ηπατίτιδας C δεν ανιχνεύθηκε ή η τιμή είναι κάτω από το όριο ευαισθησίας της μεθόδου (200 αντίγραφα / ml = 400 IU / ml).
    • αντίγραφα / ml (IU / ml) - το RNA του ιού της ηπατίτιδας C ανιχνεύθηκε. Χαμηλή ιαιμία (η ευνοϊκότερη πρόγνωση της πορείας της νόσου και η αποτελεσματικότητα της θεραπείας).
    • > 2 * 10 ^ 6 αντίγραφα / ml (> 4 * 10 ^ 6 IU / ml) - Ανιχνεύθηκε RNA του ιού της ηπατίτιδας C. Υψηλή ιαιμία.
    • > 1,0 * 10 ^ 8 αντίγραφα / ml (> 2 * 10 ^ 8 IU / ml) - Το RNA του ιού της ηπατίτιδας C ανιχνεύθηκε σε συγκεντρώσεις πάνω από το εύρος γραμμικής συγκέντρωσης.

    Γραμμική συγκεντρώσεις RNA φάσμα HCV C προσδιορίζεται ανίχνευση θερμοκυκλοποιητή, ήταν 7,5 × 10 2 - 1,0 χ 10 8 αντίγραφα / ml (1,5 χ 10 3 - 2 10 8 IU / ml).

    Τι μπορεί να επηρεάσει το αποτέλεσμα;

    Ένα αναξιόπιστο αποτέλεσμα μπορεί να επιτευχθεί με:

    • μόλυνση βιοϋλικών ·
    • παρουσία στο δείγμα αναστολέων - χημικές και πρωτεϊνικές ουσίες που επηρεάζουν διάφορα συστατικά της PCR.
    • την παρουσία ηπαρίνης στο αίμα.

    Σημαντικές σημειώσεις

    • Το επίπεδο του ιϊκού φορτίου του αίματος δεν υποδεικνύει το βαθμό της ηπατικής βλάβης και τη σοβαρότητα της νόσου. Για την αξιολόγησή τους είναι απαραίτητο να διερευνηθούν οι βιοχημικοί δείκτες και τα υλικά βιοψίας.
    • Κατά τον προγραμματισμό της θεραπείας είναι πολύ σημαντικό να προσδιοριστεί ο γονότυπος του ιού της ηπατίτιδας C.

    Συνιστάται επίσης

    Ποιος διορίζει τη μελέτη;

    Λογοτεχνία

    • Vozianova Zh.I. Μολυσματικές και παρασιτικές ασθένειες: Σε 3 τόνους - Κ.: Υγεία, 2000. - Τ.1.: 600-690.
    • Kishkun ΑΑ Ανοσολογικές και ορολογικές μελέτες στην κλινική πρακτική. - M.: MIA LLC, 2006. - 471-476 p.
    • Αρχές εσωτερικής ιατρικής του Harrison. 16η έκδοση. Νέα Υόρκη: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.
    • Lerat Η, Rumin S, Habersetzer F και άλλοι. Ιη νίνο τροπισμός των γονιδιωματικών αλληλουχιών του ιού της ηπατίτιδας C σε αιματοποιητικά κύτταρα: η επίδραση του ιικού φορτίου, του ιικού γονότυπου και του κυτταρικού φαινοτύπου. Αίμα. 1998 15 Μαΐου 91 (10): 3841-9.PMID: 9573022.
    • Revie D, Salahuddin SZ. Ανθρώπινοι τύποι κυττάρων σημαντικοί για την αναπαραγωγή του ιού της ηπατίτιδας C in vivo και in vitro: παλαιά ισχυρισμοί και τρέχουσες αποδείξεις. Virol J. 2011 Jul 11, 8: 346. doi: 10.1186 / 1743-422Χ-8-346. PMID: 21745397.

    Μελέτη PCR για ηπατίτιδα C: τύποι, ενδείξεις, μεταγραφή

    Η ιική ηπατίτιδα C είναι μια σοβαρή ασθένεια που εμφανίζεται με ηπατική βλάβη. Σε ογδόντα τοις εκατό των ασθενών περνάει σε μια χρόνια μορφή. Ο ιός πολλαπλασιάζεται στα ηπατικά κύτταρα - ηπατοκύτταρα - και προκαλεί το θάνατό τους. Ο νεκρός ιστός αντικαθίσταται από εστίες συνδετικού ιστού, αναπτύσσεται ίνωση.

    Με την ανάπτυξη της ίνωσης του ήπατος δεν είναι σε θέση να επιτελέσει τη λειτουργία του, αρχίζει κίρρωση, το οποίο είναι επικίνδυνο για τις επιπλοκές της: αυξανόμενη πίεση στην πυλαία φλέβα, γαστρεντερική αιμορραγία, διαταραχές της πήξης του αίματος, ψυχικές αλλαγές που οφείλεται σε βλάβη του εγκεφάλου πυρήνες τοξικά προϊόντα.

    Η αιτία της νόσου είναι η μόλυνση με ιό από την οικογένεια Flaviviridae, που είναι ένας τύπος ιού RNA. Αυτό σημαίνει ότι το γενετικό υλικό με το οποίο συντίθενται πρωτεΐνες του παθογόνου κωδικοποιείται σε ένα μόριο ριβονουκλεϊκού οξέος. Η μόλυνση γίνεται μέσω του αίματος, σεξουαλικά, και από μια έγκυο γυναίκα στο έμβρυο. Δυστυχώς, μεταξύ της μόλυνσης και της έναρξης της παραγωγής των αντισωμάτων μπορεί να περάσει αρκετά μεγάλο χρονικό διάστημα - από δύο εβδομάδες έως έξι μήνες. Αυτό δεν επιτρέπει τον προσδιορισμό της μόλυνσης με τη μέθοδο της ανοσοπροσδιορισμού ενζύμου και την έναρξη της θεραπείας στα αρχικά στάδια.

    Τι είναι η ανάλυση PCR;

    Η PCR είναι μια μέθοδος μοριακής ανάλυσης που επιτρέπει την ανίχνευση του γενετικού υλικού του παθογόνου ήδη από την πρώτη εβδομάδα μετά τη μόλυνση χρησιμοποιώντας αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης. Η μελέτη έχει υψηλή εξειδίκευση, ακρίβεια και επιτρέπει όχι μόνο τον προσδιορισμό της παρουσίας ή απουσίας του ιού, αλλά και της συγκέντρωσης και του γονότυπου του.

    Για τη μελέτη, πάρτε το αίμα του ασθενούς, στο οποίο μπορεί να βρεθεί το RNA του ιού. Το αίμα προστίθεται εκκινητές - τεχνητά συντίθενται τμήματα μικρού μήκους του επιθυμητού γονιδίου, και RNA πολυμεράση - ένα ειδικό ένζυμο, το οποίο πολλαπλασιάζει την ποσότητα του γενετικού υλικού του παθογόνου. Με τη βοήθεια ειδικής συσκευής διεξάγονται αρκετοί κύκλοι θέρμανσης και ψύξης. Το υλικό στη συνέχεια αναλύεται και συγκρίνεται με γνωστά γονίδια ιού, βάσει των οποίων γίνεται συμπέρασμα για την παρουσία ή απουσία μόλυνσης.

    Τύποι ανάλυσης PCR για ηπατίτιδα C

    Υπάρχουν τρεις τύποι ανάλυσης PCR:

    1. Ποιοτική ανάλυση PCR. Το πρώτο στάδιο της μελέτης. Σας επιτρέπει να αναγνωρίσετε το γενετικό υλικό του ιού στο αίμα.

  • Ποσοτική ανάλυση της PCR. Επιτρέπει τον προσδιορισμό του ιικού φορτίου - της συγκέντρωσης του γενετικού υλικού του παθογόνου σε ένα χιλιοστόλιτρο αίματος. Η μελέτη αυτή διεξάγεται πριν από την έναρξη της θεραπείας, και στη συνέχεια στην πρώτη, τέταρτη, δωδέκατη και (εάν η πορεία είναι μεγάλη) την εικοστή τέταρτη εβδομάδα θεραπείας για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητάς της.

  • Γονότυπο. Ο αιτιολογικός παράγοντας της ηπατίτιδας C συχνά και γρήγορα μεταλλάσσεται. Στον πλανήτη βρέθηκαν επτά παραλλαγές του γονότυπου αυτού του ιού. Στη Ρωσία, ο πρώτος, ο δεύτερος και ο τρίτος τύπος είναι κοινός. Κάθε ένας από τους γονότυπους έχει διαφορετική αντίσταση στη θεραπεία, για παράδειγμα, η αποτελεσματικότητα της θεραπείας του πρώτου τύπου είναι εξήντα τοις εκατό, και για το δεύτερο και τρίτο, φτάνει τα ογδόντα πέντε. Επομένως, προκειμένου να επιλεγούν κατάλληλα φάρμακα και να συνταγογραφηθεί μια σειρά θεραπείας επαρκούς διάρκειας, είναι απαραίτητο να προσδιοριστεί με ακρίβεια ποιος τύπος ιού έχει μολυνθεί από τον ασθενή.
  • Ενδείξεις για ανάλυση PCR για ηπατίτιδα C

    Η μελέτη PCR έχει συνταχθεί στις ακόλουθες περιπτώσεις:

    • επαφή με άρρωστο άτομο, η οποία θα μπορούσε να οδηγήσει σε μόλυνση.
    • θετική ενζυμική ανοσοανάλυση ·
    • σημάδια κίρρωσης του ήπατος: αλλαγές στο μέγεθος του ήπατος, μεγέθυνση της σπλήνας, εμφάνιση του υποδόριου φλεβικού πλέγματος στην κοιλία.
    • την εμφάνιση συμπτωμάτων ηπατικής βλάβης: πόνος στη δεξιά πλευρά της κοιλιάς, κιτρίνισμα του δέρματος,
    • αυξημένη δραστικότητα ALT και AST σε βιοχημική ανάλυση αίματος.
    • πριν από την έναρξη της θεραπείας για τον προσδιορισμό του ιικού φορτίου.
    • για την παρακολούθηση της αποτελεσματικότητας της αντιιικής θεραπείας.
    • μετά την ολοκλήρωση της θεραπείας για την παρακολούθηση της υποτροπής.
    • παρουσία διαγνωσμένης ηπατίτιδας Β, για να αποκλειστεί η μικτή ηπατική βλάβη.

    Αποκωδικοποίηση της μελέτης PCR για ηπατίτιδα C

    Απομαγνητοφώνηση ανάλυση PCR και ανοσοδοκιμή για Hepatology ηπατίτιδα C πρέπει να εμπλακεί ή μολυσματικές ασθένειες. Η ανάλυση των αποτελεσμάτων της PCR είναι απαραίτητη σε συνδυασμό με τη βιοχημική εξέταση αίματος, βιοψία και υπερηχογράφημα. Μόνο ένας ειδικευμένος γιατρός θα είναι σε θέση να αναλύσει τα αποτελέσματα των μελετών και, βάσει αυτών, θα συνταγογραφήσει τη σωστή θεραπεία.

    Αποκωδικοποίηση της ποιοτικής ανάλυσης.

    Το γενετικό υλικό του παθογόνου βρέθηκε στο αναλυθέν βιολογικό υλικό. Η μόλυνση επιβεβαιώνεται.

    Δεν υπάρχει μόλυνση ή η ποσότητα του RNA του παθογόνου είναι κάτω από το όριο ευαισθησίας.

    Αποκωδικοποίηση της ποσοτικής ανάλυσης.

    Μια φυσιολογική εικόνα για τους υγιείς ανθρώπους. Σημαίνει ότι δεν υπάρχει RNA ηπατίτιδας C στο υλικό δοκιμής, ή η συγκέντρωσή του είναι κάτω από το όριο ευαισθησίας της μελέτης.

    Η συγκέντρωση του RNA είναι κάτω από το εύρος ποσοτικοποίησης. Τέτοια αποτελέσματα ερμηνεύονται πολύ προσεκτικά, συσχετίζονται με τα δεδομένα άλλων μελετών και συχνά εκτελούν μια δεύτερη μελέτη.

    Το επίπεδο ιικού φορτίου σε δεδομένη συγκέντρωση θεωρείται χαμηλό. Συνήθως μια μείωση στην ποσότητα του ιού σημαίνει ότι η θεραπεία είναι επιτυχής.

    Περισσότερο από 8 * 10 ^ 5 IU / ml

    Το επίπεδο του ιϊκού φορτίου σε δεδομένη συγκέντρωση θεωρείται υψηλό.

    Περισσότερο από 2,4 * 10 ^ 7 IU / ml

    Η ποσότητα του RNA είναι πάνω από το ανώτατο όριο του εύρους ποσοτικοποίησης. Είναι αδύνατο να συναχθούν συμπεράσματα σχετικά με τον βαθμό ιικού φορτίου με αυτό το αποτέλεσμα. Συνήθως σε τέτοιες περιπτώσεις, η δοκιμή επαναλαμβάνεται με την αραίωση του δείγματος αίματος.

    Αποκωδικοποίηση της γονότυπης.

    Ανακαλύφθηκε RNA συγκεκριμένου γονότυπου

    Στο βιοϋλικό, ο ιός της ηπατίτιδας C ανιχνεύεται συγκεκριμένου γονότυπου και υποτύπου. Το αποτέλεσμα είναι κωδικοποιημένο με λατινικούς αριθμούς και λατινικά γράμματα, για παράδειγμα - 1α, 2β. Υπάρχουν επτά γονότυποι και εξήντα επτά υποτύποι, αλλά στη Ρωσία υπάρχουν μόνο τρεις πρώτοι τύποι.

    Βρέθηκε RNA ιού ηπατίτιδας C

    Στο αίμα, το RNA βρίσκεται σπάνιος γονότυπος για τη Ρωσία, ο οποίος δεν μπορεί να αποδοθεί στον πρώτο, δεύτερο ή τρίτο τύπο. Απαιτείται περισσότερη έρευνα.

    Αυτό το αποτέλεσμα δείχνει ότι ο ασθενής είναι υγιής ή ότι το επίπεδο RNA του παθογόνου είναι πολύ μικρό.

    Μια κατάσταση είναι δυνατή όταν η ανάλυση PCR για την ηπατίτιδα C είναι αρνητική, και η ανοσοδοκιμασία ενζύμου ανιχνεύει αντισώματα κατά του ιού. Αυτό σημαίνει ότι ο ασθενής είχε ηπατίτιδα C σε οξεία μορφή και θεραπεύτηκε. Περίπου είκοσι περιπτώσεις λοίμωξης οδηγούν σε αυθόρμητη θεραπεία αν το σώμα του ασθενούς ασκεί επαρκή αντίσταση σε λοίμωξη.

    Παρά το γεγονός ότι η PCR είναι μια πολύ ακριβής ανάλυση, τα αποτελέσματά της μπορούν να αλλοιωθούν στις ακόλουθες περιπτώσεις:

    • το αίμα μεταφέρθηκε στο εργαστήριο υπό ανεπαρκείς συνθήκες, το καθεστώς θερμοκρασίας παραβιάστηκε.
    • το δείγμα του βιοϋλικού μολύνθηκε.
    • στο αίμα υπήρχαν εναπομείναντα ίχνη ηπαρίνης και άλλων αντιπηκτικών.
    • Στην ουσία που ερευνήθηκε ήταν αναστολείς - ουσίες που επιβραδύνουν ή σταματούν την αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης.

    Πλεονεκτήματα της PCR έναντι άλλων μεθόδων

    1. Διάγνωση στα αρχικά στάδια. Η PCR ανιχνεύει το γενετικό υλικό του αιτιολογικού παράγοντα της ασθένειας. ουσίες που παράγει το σώμα σε απόκριση προς λοίμωξη - μόνο ανοσοσφαιρίνες μπορεί να ανιχνευθεί με ανοσοφθορισμό. Στην περίπτωση του διαστήματος της ηπατίτιδας C μεταξύ μόλυνσης και την έναρξη της ανοσολογικής απόκρισης μπορεί να είναι μερικές εβδομάδες ή μήνες, στον οποίο χρόνο η ELISA θα είναι αναποτελεσματική. Η PCR θα δώσει μια απάντηση ήδη την πρώτη εβδομάδα μετά τη μόλυνση.

  • Χαμηλή πιθανότητα σφάλματος. Στο υλικό που μελετήθηκε, προσδιορίζεται το γενετικό υλικό, το οποίο είναι χαρακτηριστικό μόνο για έναν τύπο παθογόνων παραγόντων. Αυτό σας επιτρέπει να αποκλείσετε τα ψευδή αποτελέσματα. Με τη μέθοδο ELISA, είναι δυνατά λάθη, καθώς το ίδιο είδος αντισωμάτων μπορεί να απελευθερωθεί έναντι διαφορετικών ιών - τέτοια αντισώματα ονομάζονται διασταυρούμενα αντιδραστικά.

  • Υψηλή ευαισθησία. Η PCR μπορεί να ανιχνεύσει RNA του παθογόνου ακόμη και σε ελάχιστες ποσότητες. Αυτό καθιστά δυνατό τον εντοπισμό κρυφών μολύνσεων.
  • Πώς να προετοιμαστείτε για χορήγηση αίματος για έρευνα PCR

    Για την ανάλυση PCR, συλλέγεται φλεβικό αίμα για την ηπατίτιδα C. Συνήθως, δύο μερίδες αίματος λαμβάνονται από τη φλέβα του ασθενούς αμέσως: η πρώτη αποστέλλεται στην PCR και η δεύτερη στην ELISA. Αυτό γίνεται προκειμένου να εκτιμηθεί με μεγαλύτερη ακρίβεια πόσο άσχημα ο ασθενής είναι μολυσμένος με τον ιό και πώς η ασυλία στρέφεται εναντίον του.

    Συνήθως, οι ακόλουθοι κανόνες απαιτούνται από τον ασθενή:

    • ένα τεστ αίματος λαμβάνεται το πρωί.
    • το διάλειμμα μεταξύ του τελευταίου γεύματος και της παράδοσης αίματος πρέπει να είναι οκτώ έως δέκα ώρες.
    • δύο ή τρεις ημέρες πριν από την ανάλυση πρέπει να εγκαταλείψετε τα τηγανητά και λιπαρά τρόφιμα και το αλκοόλ.
    • για είκοσι τέσσερις ώρες πριν από την ανάλυση, ο ασθενής θα πρέπει να αποφεύγει τη σωματική άσκηση: μην κουβαλάτε βάρος, μη παρακολουθείτε γυμναστήριο ή πισίνα.

    Τι είναι το RNA του ιού της ηπατίτιδας C;

    Η μελέτη του RNA του ιού της ηπατίτιδας C είναι η πιο σημαντική διαδικασία, η οποία επιτρέπει τον καθορισμό της διάρκειας και των μεθόδων θεραπείας των ασθενών με μεγάλη ακρίβεια. Η διάγνωση της νόσου αποτελείται από πολλές διαφορετικές εξετάσεις αίματος, όπως:

    • δείκτες ηπατίτιδας C (αντι-ΗΟν).
    • την ανίχνευση του RNA του ιού της ηπατίτιδας C (HCV RNA).

    Η πρώτη μελέτη γίνεται με την πρώτη υποψία ηπατίτιδας. Η δεύτερη επιλογή είναι πιο σημαντική στη θεραπεία του HCV RNA, επομένως το εξετάστε λεπτομερέστερα.

    Τι είναι η ιογενής ηπατίτιδα C;

    Η ιογενής ηπατίτιδα C, ή HCV, είναι μολυσματική ασθένεια που επηρεάζει το ήπαρ. Η μόλυνση από τον ιό γίνεται μέσω του αίματος. Μπορείτε να μολυνθείτε με μια μετάγγιση αίματος, όταν δεν τηρούνται οι κανόνες αποστείρωσης ιατρικών οργάνων. Υπάρχουν λιγότερες περιπτώσεις όταν η ασθένεια επιτυγχάνεται σεξουαλικά ή από έγκυο μητέρα σε έμβρυο. Η ηπατίτιδα C είναι 2 τύπων.

    Η χρόνια ηπατίτιδα C είναι η πιο επικίνδυνη. Είναι μια μορφή ασθένειας που μπορεί να διαρκέσει για μια ζωή. Αυτό οδηγεί σε σοβαρά προβλήματα στη λειτουργία του ήπατος, όπως η κίρρωση ή ο καρκίνος. Σε 70-90% των μολυσμένων ανθρώπων, η ασθένεια περνά σε ένα χρόνιο στάδιο.

    Ο σημαντικότερος κίνδυνος της ηπατίτιδας C είναι ότι προχωράει κρυφά, χωρίς παρωχημένα σημάδια. Σε αυτή την περίπτωση, συχνά διαμαρτύρονται για πυρετό, ναυτία και έμετο, σωματική αδυναμία, αυξημένη κόπωση, απώλεια όρεξης και βάρος. Σε αυτή την περίπτωση, στο πλαίσιο μιας μικρής συμπίεσης των ιστών του ήπατος, ο κακοήθης εκφυλισμός συχνά λαμβάνει χώρα. Για το λόγο αυτό, η ιογενής ηπατίτιδα C ονομάζεται συχνά «ωρολογιακή βόμβα» ή «φονικός δολοφόνος».

    Μια άλλη ιδιαιτερότητα της νόσου έγκειται στην πολύ αργή ανάπτυξή της, που εκτιμάται σε δεκάδες χρόνια.

    Κατά κανόνα, τα μολυσμένα δεν αισθάνονται συμπτώματα και δεν υποπτεύονται την πραγματική τους κατάσταση. Συχνά, η ασθένεια μπορεί να εντοπιστεί μόνο όταν αναφέρεται σε γιατρό σε άλλο θέμα.

    Η ομάδα κινδύνου περιλαμβάνει:

    • τα παιδιά που έλαβαν τον ιό της ηπατίτιδας C από τις μητέρες ·
    • οι τοξικομανείς ·
    • οι άνθρωποι που τρυπημένα μέρη του σώματος ή τα τατουάζ μη στείρα εργαλεία?
    • έλαβε αίμα ή όργανα δότη (μέχρι το 1992, όταν δεν πραγματοποιήθηκε αιμοκάθαρση) ·
    • άτομα που έχουν μολυνθεί από τον ιό HIV.
    • Ιατροί που έρχονται σε επαφή με μολυσμένους ασθενείς.

    Προσδιορισμός RNA ηπατίτιδας C

    Προσδιορισμός του RNA του ιού της ηπατίτιδας C, επίσης ονομάζεται ηπατίτιδα C PCR, αυτή τη μελέτη του βιολογικού υλικού (αίμα), με το οποίο μπορείτε να διαπιστώσετε στο σώμα από την άμεση διαθεσιμότητα των genomateriala ιού της ηπατίτιδας Β (οποιοδήποτε δεδομένο ιός είναι ένα ενιαίο σωματίδιο του RNA).

    Η κύρια μέθοδος δοκιμής είναι η PCR, ή η μέθοδος αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης.

    Υπάρχουν δύο τύποι εξετάσεων αίματος για τον προσδιορισμό του HCV RNA:

    Δοκιμή ποιότητας

    Η διεξαγωγή ποιοτικής ανάλυσης καθιστά δυνατό τον προσδιορισμό του εάν ο ιός βρίσκεται στο αίμα. Όλοι οι ασθενείς που έχουν αντισώματα C-ηπατίτιδας πρέπει να υποβληθούν σε αυτή τη δοκιμασία. Με τα αποτελέσματά του, μπορείτε να πάρετε 2 απαντήσεις: "να υπάρχει" ή "να λείπει" ο ιός. Από το θετικό αποτέλεσμα της δοκιμής (βρέθηκε), είναι δυνατόν να κρίνουμε τον ενεργό πολλαπλασιασμό ενός ιού που μολύνει υγιή κύτταρα στο ήπαρ.

    Η δοκιμή διεξάγεται για ένα ποιοτικό PCR συντονισμένοι σε μια συγκεκριμένη ευαισθησία των 10 έως 500 IU / ml. Εάν ανιχνευθεί στο αίμα του ιού της ηπατίτιδας Β στο συγκεκριμένο περιεχόμενο λιγότερο από 10 IU / ml, η ανίχνευση του ιού μπορεί να είναι αδύνατη. Μία πολύ χαμηλή τιμή του συγκεκριμένου περιεχομένου του ιού παρατηρείται σε ασθενείς για τους οποίους συνταγογραφείται αντιιική θεραπεία. Ως εκ τούτου, το σημαντικό γεγονός είναι πόσο υψηλή είναι η ευαισθησία των ιατρικών συστημάτων για τη διάγνωση και σταδιοποίηση υψηλής ποιότητας αποτελέσματα με την αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης.

    Συχνά, η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης της C-ηπατίτιδας διεξάγεται αμέσως μετά την ανεύρεση των αντιστοίχων αντισωμάτων. Οι επόμενες δοκιμές, όταν περνάει η αντιική θεραπεία, πραγματοποιούνται την 4η, 12η και 24η εβδομάδα. Και μια άλλη ανάλυση μετά τον τερματισμό του PVT γίνεται μετά από 24 εβδομάδες. Στη συνέχεια - μία φορά το χρόνο.

    Ποσοτική δοκιμή

    Η ποσοτική ανάλυση του PCR RNA, μερικές φορές αναφέρεται ως ιικό φορτίο, καθορίζει τη συγκέντρωση (συγκεκριμένη περιεκτικότητα) του ιού στο αίμα. Με άλλα λόγια, το ιικό φορτίο ορίζεται ως μια ορισμένη ποσότητα ιικού RNA, το οποίο μπορεί να είναι σε μια συγκεκριμένη ποσότητα αίματος (είναι συνηθισμένο να χρησιμοποιείται 1 ml, ίσο με 1 cm σε κύβο). Οι μονάδες για τα αποτελέσματα των δοκιμών είναι διεθνείς (τυποποιημένες) μονάδες, διαιρούμενες κατά ένα χιλιοστόλιτρο (IU / mL). Το περιεχόμενο του ιού μερικές φορές φαίνεται διαφορετικά, εξαρτάται από τα εργαστήρια όπου διεξάγεται η έρευνα. Για την ηπατίτιδα C, ο ποσοτικός προσδιορισμός μερικές φορές χρησιμοποιεί τιμές όπως τα αντίγραφα / ml.

    Θα πρέπει να γίνει κατανοητό ότι δεν υπάρχει συγκεκριμένη εξάρτηση από τη σοβαρότητα της C-ηπατίτιδας στη συγκέντρωση αυτού του στελέχους στο αίμα.

    Ο έλεγχος του "ιικού φορτίου" σας επιτρέπει να καθορίσετε το βαθμό μολυσματικότητας της νόσου. Έτσι, ο κίνδυνος προσβολής του ιού ενός άλλου ατόμου αυξάνεται με την αύξηση της συγκέντρωσης της ηπατίτιδας στο αίμα. Επιπλέον, η υψηλή περιεκτικότητα του ιού μειώνει την επίδραση της θεραπείας. Επομένως, ένα μικρό ιικό φορτίο είναι ένας πολύ ευνοϊκός παράγοντας για την επιτυχή θεραπεία.

    Επιπλέον, η δοκιμή ηπατίτιδας C και ο προσδιορισμός της με PCR διαδραματίζουν σημαντικό ρόλο στην εφαρμογή της θεραπείας κατά της νόσου και στον προσδιορισμό της επιτυχίας της θεραπείας. Με βάση τα αποτελέσματα των δοκιμών, προγραμματίζεται το πρόγραμμα αποκατάστασης. Για παράδειγμα, με πολύ αργή μείωση της ειδικής συγκέντρωσης του ιού της ηπατίτιδας, η αντιιική θεραπεία παρατείνεται και αντίστροφα.

    Στη σύγχρονη ιατρική πιστεύεται ότι το φορτίο είναι μεγαλύτερο από 800000 ME / ml είναι υψηλό. Το φορτίο υπερβαίνει τα 10000000 ME / ml θεωρείται κρίσιμο. Ωστόσο, εμπειρογνώμονες από διαφορετικές χώρες και μέχρι σήμερα δεν είχαν την ίδια άποψη σχετικά με τα όρια του ιικού φορτίου.

    Η συχνότητα της ποσοτικής δοκιμής

    Γενικά, η ποσοτική ανάλυση για την ηπατίτιδα γίνεται πριν από την αντιική θεραπεία και 3 μήνες μετά το πέρας των θεραπευτικών διαδικασιών για τον προσδιορισμό της ποιότητας της θεραπείας.

    Ως αποτέλεσμα της ποσοτικής δοκιμής θα θεωρηθεί ποσοτική αξιολόγηση των αποτελεσμάτων του δείγματος που προσδιορίστηκε παραπάνω. Ως αποτέλεσμα, μια ετυμηγορία "κάτω από τη μετρούμενη περιοχή" ή "στο αίμα δεν θα ανιχνευθεί" θα αποδίδεται.

    Η παράμετρος ευαισθησίας της ποιοτικής δοκιμής είναι συνήθως χαμηλότερη από την ευαισθησία της ποσοτικής ανάλυσης. Η μεταγραφή "Missing" υποδεικνύει ότι και οι δύο τύποι αναλύσεων δεν βρήκαν το RNA του ιού. Με τη δοκιμή "κάτω από τη μετρούμενη περιοχή", η ποσοτική ανάλυση πιθανότατα δεν βρήκε ηπατίτιδα RNA, αν και αυτό επιβεβαιώνει την παρουσία ενός ιού με πολύ μικρό συγκεκριμένο περιεχόμενο.

    Ηπατίτιδα C και οι γονότυποί της

    Η γονοτύπηση του RNA του ιού της ηπατίτιδας C διαγνώσει την παρουσία διαφορετικών γενετικών τύπων ηπατίτιδας C. Science ξέρει περισσότερα από 10 είδη του γονιδιώματος του ιού, αλλά για την ιατρική πρακτική επαρκώς διακρίνει αρκετές γονότυποι που έχει το μεγαλύτερο μερίδιο της περιοχής. Ο προσδιορισμός του γενετικού τύπου διαδραματίζει βασικό ρόλο στην επιλογή του χρονικού διαστήματος της θεραπείας, κάτι που είναι πολύ σημαντικό αν ληφθεί υπόψη το ευρύ φάσμα παρενεργειών των φαρμάκων κατά της ηπατίτιδας.

    Μέθοδοι θεραπείας της ιογενούς ηπατίτιδας C

    Ο μόνος αποτελεσματικός τρόπος θεραπείας του ιού της ηπατίτιδας είναι κατά κανόνα ένας συνδυασμός 2 φαρμάκων: ιντερφερόνης-άλφα μαζί με ριμπαβιρίνη. Ξεχωριστά, αυτά τα φάρμακα δεν είναι τόσο αποτελεσματικά. Η συνιστώμενη δόση φαρμάκων και ο χρόνος εφαρμογής πρέπει να συνταγογραφούνται μόνο από τον γιατρό και μεμονωμένα σε κάθε ασθενή. Η θεραπεία με αυτά τα φάρμακα μπορεί να διαρκέσει από 6 έως 12 μήνες.

    Σήμερα, δεν έχουν εφευρεθεί φάρμακα που εγγυώνται 100% ανάκτηση από τον ιό. Ωστόσο, με σωστά επιλεγμένη θεραπεία, η επούλωση των ασθενών μπορεί να φτάσει μέχρι και το 90% του αριθμού των περιπτώσεων.

    Ποιοτική ανάλυση της PCR για την ηπατίτιδα C

    Η ηπατίτιδα είναι μια σοβαρή ασθένεια που έχει πολλές αιτίες για την έναρξη. Στο επίκεντρο της ανάπτυξής του είναι άμεση ή έμμεση βλάβη στο ήπαρ. Δεδομένης της σημασίας του για ολόκληρο τον οργανισμό, μπορεί κανείς να μαντέψει πόσο κακή είναι η παθολογία. Σε αυτό το άρθρο, θα συζητήσουμε λεπτομερέστερα τα χαρακτηριστικά της πορείας και τη εργαστηριακή διάγνωση της ηπατίτιδας C.

    Η αιτία της ασθένειας είναι ένας ιικός παράγοντας, ο οποίος αναφέρεται σε παθογόνους που περιέχουν RNA. Έχει ένα χαρακτηριστικό γνώρισμα - τη δυνατότητα να μεταλλαχθεί, δηλαδή να αλλάξει τη δομή του. Λόγω αυτής της μόλυνσης διαφεύγει από την επίθεση του ανοσοποιητικού συστήματος και στις περισσότερες περιπτώσεις οδηγεί σε χρόνια φλεγμονή στο ήπαρ.

    Δεδομένης της ύπαρξης διαφόρων υποτύπων του ιού, η επιλογή των φαρμάκων θα πρέπει να διεξάγεται λαμβάνοντας υπόψη τα αποτελέσματα της γονότυπης. Παρά τη μακρά μελέτη της νόσου και των ιδιαιτεροτήτων της δομής του HCV, δεν ήταν δυνατόν να αναπτυχθεί ένα συγκεκριμένο εμβόλιο κατά της νόσου.

    Οι δυσκολίες της έγκαιρης διάγνωσης είναι στην ασυμπτωματική πορεία της ηπατίτιδας, με αποτέλεσμα το άτομο να στραφεί σε γιατρό στο στάδιο της κίρρωσης. Για την έγκαιρη ανίχνευση της νόσου απαιτούνται τακτικές φυσικές εξετάσεις. Μόνο με εργαστηριακές εξετάσεις αίματος μπορεί να εντοπιστεί ο HCV και να προληφθεί η μόλυνση άλλων. Το γεγονός ότι ο φορέας της λοίμωξης μπορεί για πολύ καιρό να μην γνωρίζει την παθολογία και να συνεχίσει να μεταδίδει τον ιό σε υγιείς ανθρώπους.

    Διαδρομές μετάδοσης

    Ο ιός στις περισσότερες περιπτώσεις εξαπλώνεται μέσω του αίματος, καθώς περιέχει τη μεγαλύτερη συγκέντρωση παθογόνων παραγόντων. Έτσι, η μόλυνση μεταδίδεται:

    • με αιμοκάθαρση.
    • όταν βυθίζετε με βελόνα.
    • κατά τη διάρκεια του αγώνα, όταν το δέρμα τραυματίζεται, και η αιμόσωμη επαφή συμβαίνει?
    • με μετάγγιση αίματος (μετάγγιση αίματος).

    Η πιθανότητα μόλυνσης με στενή οικειότητα είναι ασήμαντη, καθώς το σπέρμα και η κολπική έκκριση περιέχουν μικρό αριθμό παθογόνων παραγόντων. Ο κίνδυνος μόλυνσης αυξάνεται σημαντικά εάν διαταραχθεί η ακεραιότητα του βλεννογόνου των γεννητικών οργάνων. Αυτό παρατηρείται με επιθετικό και πρωκτικό σεξ.

    Όσο για τον κατακόρυφο τρόπο μετάδοσης της λοίμωξης, πραγματοποιείται κατά τη διάρκεια της εργασίας. Κατά την περίοδο της κύησης, το παθογόνο δεν μπορεί να διεισδύσει στον πλακούντα στο έμβρυο. Σε φυσικά είδη ο παθογόνος παράγοντας μεταφέρεται στο παιδί σε τραύμα του δέρματός του όταν παρατηρείται επαφή με το αίμα της μητέρας.

    Μετά τη διείσδυση του παθογόνου παράγοντα σε έναν υγιή οργανισμό, αρχίζει η σύνθεση αντισωμάτων, τα οποία προστατεύουν από τη μόλυνση και ανήκουν σε ανοσοποιητικές δομές. Βρίσκονται κατά τη διάρκεια της αρχικής μελέτης ενός ατόμου με τη βοήθεια της μεθόδου ELISA.

    Για να επιβεβαιωθεί η διάγνωση, ο ασθενής υφίσταται αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης. Πρόκειται για μια ανάλυση για τον προσδιορισμό του γενετικού υλικού ενός παθογόνου παράγοντα και για τον προσδιορισμό του ιικού φορτίου.

    Εργαστηριακή διάγνωση ηπατίτιδας C

    Η εργαστηριακή διάγνωση ξεκινά με μια ανοσοδοκιμασία ενζύμου. Κύριος στόχος του είναι να ανιχνεύσει αντισώματα που παράγονται κατά του παθογόνου. Η απόδοσή του είναι σχεδόν 95%. Χάρη σε αυτή την έρευνα στο προκλινικό στάδιο είναι δυνατόν να εντοπιστεί ο φορέας του ιού και να το στείλει για περαιτέρω εξέταση.

    Η ποιοτική ανάλυση της ELISA υποδεικνύει την παρουσία ή την απουσία ανοσοσφαιρινών στο αίμα του ασθενούς. Το αποτέλεσμά του μπορεί να είναι "θετικό" ή "αρνητικό". Αφού έλαβε την πρώτη παραλλαγή της απάντησης, το άτομο πηγαίνει στην επόμενη εξέταση - PCR. Η τιμή του εξαρτάται από την ποιότητα των αντιδραστηρίων και του εργαστηρίου. Το κόστος μιας αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης μπορεί να φθάσει τα 4.000 ρούβλια.

    Χαρακτηριστικά της PCR

    Με την αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης, ακόμη και μια μικρή ποσότητα βιολογικού υλικού καθιστά δυνατή την εκτίμηση του ιικού φορτίου στο αίμα, δηλαδή για τον υπολογισμό της συγκέντρωσης των παθογόνων σε ένα χιλιοστόλιτρο υγρού.

    Με την έλευση της PCR, η διάγνωση της ηπατίτιδας ήταν πολύ απλούστερη. Η ανάλυση καθιστά δυνατή την ταυτοποίηση του HCV RNA, για να καθοριστεί το στάδιο της μολυσματικής διαδικασίας και η μολυσματικότητα του φορέα του ιού.

    Υπάρχουν διάφοροι τύποι γενετικής διάγνωσης:

    1. ποιοτική ανάλυση της PCR για την ηπατίτιδα C - επιβεβαιώνει την παρουσία ή την απουσία HCV στο αίμα του εξεταστή:
    2. ποσοτική, λόγω της οποίας είναι δυνατόν να υπολογιστεί η συγκέντρωση των ιών και να καθοριστεί το στάδιο της νόσου. Το αποτέλεσμα δίδεται σε IU / ml ή αντίγραφα / ml (ανάλογα με το εργαστήριο).
    3. ο γονότυπος είναι απαραίτητος για τον προσδιορισμό του γονότυπου του HCV. Αυτό απαιτείται για την ακριβή επιλογή των φαρμάκων που θα είναι πιο αποτελεσματικά στην περίπτωση αυτή. Η ανάλυση εμμέσως υποδεικνύει τη σοβαρότητα της παθολογικής διαδικασίας στο ήπαρ. Έτσι, με τον τρίτο γονότυπο του παθογόνου, παρατηρείται συχνότερα στεάτωση, η ανάπτυξη της οποίας είναι η συσσώρευση λίπους στα ηπατοκύτταρα (τα κύτταρα του). Επιπλέον, ο τύπος του ιού επηρεάζει το αποτέλεσμα και τη διάρκεια της θεραπευτικής πορείας.

    Ποιοτική ανάλυση της PCR για την ηπατίτιδα C

    Το πρώτο βήμα στο εργαστήριο είναι η μελέτη του βιολογικού υλικού για την παρουσία HCV RNA. Είναι σημαντικό να θυμόμαστε ότι μια ποιοτική ανάλυση για την ηπατίτιδα C έχει ένα ορισμένο επίπεδο ευαισθησίας και συνεπώς δεν μπορεί πάντα να δώσει τη σωστή απάντηση. Σε αυτή την περίπτωση, συνιστάται η διεξαγωγή επαναλαμβανόμενης εργαστηριακής διάγνωσης με τη χρήση άλλων αντιδραστηρίων.

    Για να ληφθούν αξιόπιστα αποτελέσματα, πρέπει να χρησιμοποιηθεί ένα σύστημα δοκιμής με ευαισθησία τουλάχιστον 50 IU / ml.

    Το αποτέλεσμα της διάγνωσης μπορεί να είναι είτε "θετικό" είτε "αρνητικό". Εάν ο παθογόνος παράγοντας δεν βρίσκεται στο αίμα, η μελέτη τελειώνει. Όταν ανιχνεύεται παθογόνος παράγοντας στο δείγμα, πραγματοποιείται κατόπιν ποσοτικός μετρητής του ιικού φορτίου.

    Μια ψευδής αρνητική απάντηση λαμβάνεται όταν διακόπτεται η τεχνολογική διαδικασία, για παράδειγμα, ενεργά συστατικά που καταπιέζουν την κατασκευή αντιγράφων του παθογόνου εισέρχονται στο περιβάλλον. Έτσι, δεν είναι δυνατό να εμφανιστεί η πραγματική εικόνα του αίματος, λόγω της οποίας δεν διαγνωσθεί η ανθρώπινη λοίμωξη.

    Ένα ψευδώς θετικό αποτέλεσμα μπορεί να επιτευχθεί εάν ο σωλήνας συλλογής για το βιολογικό υλικό, καθώς και το περιβάλλον για τη μελέτη, έχουν μολυνθεί. Επιπλέον, μια τέτοια αντίδραση ανάλυσης είναι δυνατή με μια μικτή μόλυνση, όταν το ήπαρ επηρεάζεται από διάφορους ιούς, για παράδειγμα ηπατίτιδα C και D.

    Ενδείξεις για ποιοτική έρευνα

    Ένας γιατρός μπορεί να εκχωρήσει μια ποιοτική μελέτη σε έναν ασθενή για την ανίχνευση του RNA του ιού της ηπατίτιδας C:

    • όταν λαμβάνουν θετική ή αμφισβητήσιμη απόκριση της ανοσοδοκιμασίας του ενζύμου.
    • για επαλήθευση της διάγνωσης.
    • προσδιορισμός του ιικού φορτίου.
    • τη σταδιοποίηση της φάσης της νόσου.
    • διάγνωση μικτής μόλυνσης. Συχνά, η ηπατίτιδα C επηρεάζει το ήπαρ ταυτόχρονα με τον ιό "D".
    • προσδιορισμός θεραπευτικών τακτικών λαμβάνοντας υπόψη τον γονότυπο του παθογόνου παράγοντα ·
    • αξιολόγηση της δυναμικής των μεταβολών στο πλαίσιο της θεραπείας με αντιιικά φάρμακα.

    Τα πλεονεκτήματα μιας αλυσωτής αντίδρασης πολυμεράσης περιλαμβάνουν:

    1. υψηλή ευαισθησία της τεχνικής, η οποία επιτρέπει να διαπιστωθεί το γεγονός της μόλυνσης στο προκλινικό στάδιο,
    2. την ταυτοποίηση του γενετικού υλικού του παθογόνου, και όχι τα αντισώματα του ·
    3. τη δυνατότητα δημιουργίας ενός υποτύπου παθογόνου παράγοντα ·
    4. υψηλή ταχύτητα διάγνωσης, δεδομένου ότι δεν είναι απαραίτητο να σπείρει υλικό σε θρεπτικό μέσο, ​​αλλά αρκεί να χρησιμοποιηθούν ειδικά συστήματα δοκιμών. Ένα άτομο λαμβάνει αποτέλεσμα μετά από 5 ώρες.
    5. καθολικότητα. Η ανάλυση καθιστά δυνατή την ταυτοποίηση οποιουδήποτε γενετικού υλικού (RNA, DNA). Λόγω αυτού, ο γιατρός μπορεί να επιβεβαιώσει την ηπατίτιδα C και άλλους τύπους ασθένειας (Β).
    6. τη δυνατότητα ανίχνευσης λανθάνουσας λοίμωξης.

    Ποσοτική έρευνα

    Στη μελέτη του αίματος με αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης, είναι δυνατόν να υπολογιστεί ο αριθμός των παθογόνων σε σταθερό όγκο βιολογικού υλικού. Ο δείκτης παρουσιάζεται σε IU / ml. Λόγω της ανάλυσης είναι δυνατόν να καθοριστεί ο βαθμός μολυσματικότητας του ασθενούς, να προσδιοριστεί το στάδιο της μολυσματικής διαδικασίας και επίσης να αξιολογηθεί η αποτελεσματικότητα της φαρμακευτικής θεραπείας.

    Με βάση την PCR, ο εμπειρογνώμονας αποφασίζει ποιες δοσολογίες φαρμάκων μπορούν να εμποδίσουν τη διάδοση παθογόνων παραγόντων. Επιπλέον, προσδιορίζεται η διάρκεια της αντιιικής αγωγής και η πρόγνωση για τη ζωή. Είναι σημαντικό να θυμόμαστε ότι τα πειραματικά συστήματα είναι ιδιαίτερα ευαίσθητα, οπότε η μέθοδος καθιστά δυνατή την επιβεβαίωση της ανθρώπινης μόλυνσης ακόμα και στο προκλινικό στάδιο.

    Γονότυπο

    Δεδομένης της ικανότητας του αιτιολογικού παράγοντα να μεταλλαχθεί, να καθορίσει την τακτική της θεραπείας και την επιλογή των αντιιικών φαρμάκων, χρειάζεται ο γονότυπός του. Για παράδειγμα, η θεραπεία της ηπατίτιδας HCV 1 διαρκεί 48 εβδομάδες, με θετική τάση παρατηρούμενη μόνο στο 60% των περιπτώσεων. Οι γονοτύποι 2 και 3 έχουν ευνοϊκότερη πρόγνωση. Τα αντιιικά φάρμακα συνταγογραφούνται για 8 μήνες και η αποτελεσματικότητά τους φτάνει το 85%.

    Σύμφωνα με στατιστικά στοιχεία, στις περισσότερες περιπτώσεις οι HCV 1, 2 και 3 είναι εγγεγραμμένοι στο έδαφος της Ρωσικής Ομοσπονδίας.

    Κατά την αποκρυπτογράφηση μιας εργαστηριακής μελέτης, μπορεί να αναφερθεί μια τέτοια απάντηση - "μη δακτυλογραφημένη". Αυτό σημαίνει ότι ένας ιός κυκλοφορεί στο κυκλοφορικό σύστημα του ασθενούς, ο οποίος δεν μπορεί να αναγνωριστεί από το σύστημα δοκιμών. Το αποτέλεσμα της ανάλυσης στην περίπτωση αυτή δείχνει τη μόλυνση ενός ατόμου που είναι άτυπη για μια δεδομένη γεωγραφική περιοχή του αιτιολογικού παράγοντα.

    Πώς να αποκτήσετε αξιόπιστα αποτελέσματα;

    Για την ποιοτική έρευνα της PCR για την ανίχνευση του RNA του αιτιολογικού παράγοντα της ηπατίτιδας C έχει δείξει τα σωστά αποτελέσματα, είναι απαραίτητο να συμμορφωθούν με τις απαιτήσεις για την προετοιμασία για εργαστηριακή διάγνωση:

    1. η δειγματοληψία αίματος πραγματοποιείται με άδειο στομάχι και το "πεινασμένο" κενό δεν πρέπει να είναι μικρότερο από 8 ώρες.
    2. δύο ημέρες πριν από τη μελέτη συνιστάται να σταματήσετε να πίνετε αλκοόλ και να απορρίπτετε από αιχμηρά, λιπαρά και καπνισμένα πιάτα.
    3. να καταργηθεί η εισαγωγή φαρμάκων που μειώνουν την πήξη του αίματος, όπως η ηπαρίνη. Εάν αυτά τα φάρμακα συνταγογραφούνται για λόγους ζωής, θα πρέπει να ενημερώσετε το γιατρό σχετικά. Επιπλέον, ο ειδικός θα πρέπει να γνωρίζει την εισαγωγή άλλων φαρμάκων που μπορεί να επηρεάσουν το αποτέλεσμα μιας εργαστηριακής δοκιμής.
    4. Την παραμονή της συλλογής του βιολογικού υλικού, οι φυσιοθεραπευτικές διαδικασίες δεν θα πρέπει να εκτελούνται και να υποβάλλονται σε βαριά σωματική άσκηση.

    Τα αποτελέσματα της ανάλυσης μπορούν να επηρεαστούν όχι μόνο από το άτομο που δωρίζει αίμα αλλά και από άλλους παράγοντες, όπως:

    • κακή συλλογή αίματος.
    • μη τήρηση των συστάσεων για τη μεταφορά βιολογικού υλικού ·
    • ανεπαρκής κατάρτιση των εργαστηριακών εργαζομένων ·
    • μη τήρηση των ερευνητικών τεχνικών ·
    • την εισαγωγή αντιπηκτικών (ηπαρίνη) την παραμονή της δειγματοληψίας αίματος. Αυτή η ομάδα φαρμάκων μειώνει την πήξη, επιβραδύνοντας έτσι την εργασία των αντιδραστηρίων.

    Σε διαφορετικά εργαστήρια, η διαγνωστική απόκριση μπορεί να είναι ελαφρώς διαφορετική, αλλά αυτά τα σφάλματα δεν επηρεάζουν το τελικό αποτέλεσμα της μελέτης.

    Ιδιαίτερη προσοχή δίνεται στους τύπους συστημάτων δοκιμών που χρησιμοποιούνται στο εργαστήριο. Συχνά προτιμώνται τα αντιδραστήρια με υψηλή ευαισθησία. Αυτό είναι σημαντικό για ασθενείς με χαμηλό ιικό φορτίο, καθώς είναι δύσκολο να εντοπιστεί.

    Πόσο συχνά εκτελείται ένας εργαστηριακός έλεγχος;

    Πρωτίστως, η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης διεξάγεται σε άτομα που έχουν δοκιμαστεί για αντισώματα στον ιό ηπατίτιδας σε ανοσοδοκιμασία. Σε αυτή την περίπτωση, διορίζεται για να επιβεβαιώσει το γεγονός της λοίμωξης ενός ατόμου και να καθορίσει το στάδιο της νόσου. Επιπλέον, η ανάλυση σας επιτρέπει να προσδιορίσετε τον υποτύπο του ιού, ο οποίος είναι ιδιαίτερα σημαντικός για την επιλογή φαρμάκων.

    Η επόμενη περίοδος για υποχρεωτικό εργαστηριακό έλεγχο είναι 3 μήνες από την έναρξη της αντιιικής θεραπείας. Η διάγνωση παρέχει την ευκαιρία να εκτιμηθεί η αποτελεσματικότητα των φαρμάκων, να ρυθμιστεί η δόση ή να αντικατασταθεί.

    Εκτός από τις βασικές αναλύσεις, η PCR μπορεί να πραγματοποιηθεί επιπρόσθετα στις 4 και 24 εβδομάδες από την έναρξη της θεραπείας. Μια θετική πρόγνωση της νόσου επιβεβαιώνεται από τη μείωση του ιικού φορτίου μετά από τρεις μήνες θεραπείας. Έτσι, για παράδειγμα, θα πρέπει να μειωθεί από 1 εκατομμύριο IU / ml σε αρκετές εκατοντάδες χιλιάδες.

    Εάν η συγκέντρωση των παθογόνων παραγόντων στο αίμα παραμένει στο ίδιο επίπεδο ή αυξάνεται ελαφρώς, αυτό δείχνει την αναποτελεσματικότητα των αντιιικών παραγόντων και απαιτεί την αντικατάστασή τους. Με τη βοήθεια της PCR στο τέλος της θεραπείας είναι δυνατόν να επιβεβαιωθεί η ανάκτηση του ασθενούς.

    Για την ορθή ερμηνεία των αποτελεσμάτων της εργαστηριακής διάγνωσης, απαιτείται η πραγματοποίηση διαβουλεύσεων με έναν ειδικό ήπατολόγο ή ειδικό για μολυσματικές ασθένειες. Δεδομένης της μεγάλης συχνότητας εμφάνισης λανθασμένων απαντήσεων για τη μέθοδο ELISA, η ανάλυση χρησιμοποιείται αποκλειστικά για πρωτογενή εξέταση. Για μια πιο εμπεριστατωμένη εξέταση του ασθενούς, χρησιμοποιείται αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης.

    Μπορεί να θεραπευτεί από ηπατίτιδα C χωρίς παρενέργειες;

    Σήμερα, σύγχρονα φάρμακα και νέα γενιά sofosbuvir Daklatasvir με 97-100% πιθανότητες για πάντα θα σας θεραπεύσει από ηπατίτιδα C. Το νέο φάρμακο είναι διαθέσιμο στα Ρωσικά στο επίσημο εκπρόσωπο της ινδικής farmgiganta Zydus Heptiza. Τα παραγγελθέντα προϊόντα παραδίδονται από τον courier εντός 4 ημερών, μετά την παραλαβή. Αποκτήστε δωρεάν συμβουλές σχετικά με τη χρήση σύγχρονων ναρκωτικών καθώς και μάθετε για τις μεθόδους αγοράς που μπορείτε να βρείτε στην επίσημη ιστοσελίδα του προμηθευτή Zydus στη Ρωσία.


    Σχετικά Άρθρα Ηπατίτιδα