HCV εξέταση αίματος: τι είναι αυτό;

Share Tweet Pin it

Σύμφωνα με τις έννοιες της σύγχρονης ιατρικής, ο επιπολασμός της επικράτησης στον πλανήτη ανήκει στους ιούς. Η ανθρωπότητα έπρεπε να χρησιμοποιήσει πολλές δυνάμεις και πόρους για να πολεμήσει. Εξαιρετικά σημαντικό ρόλο ανήκει στην διάγνωση της ιογενούς ηπατικών αλλοιώσεων, ιδίως της ηπατίτιδας C. σωστή αποκωδικοποίηση των εργαστηριακών παραμέτρων για την ανίχνευση της νόσου είναι δύσκολη λόγω του μεγάλου αριθμού των ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων μιας δοκιμής αίματος. Επομένως, η σωστή επιλογή και ερμηνεία της μελέτης είναι τόσο σημαντική.

Μέθοδοι ανίχνευσης ιού

Ο ιός της ηπατίτιδας C (hcv) είναι μια μικρή αλυσίδα RNA μέσα στον ιικό φάκελο, ο οποίος χρησιμοποιεί γενετικό υλικό των ηπατικών κυττάρων για την αναπαραγωγή του. Η άμεση επαφή τους οδηγεί:

  • Η εμφάνιση της φλεγμονώδους διαδικασίας στο ήπαρ.
  • Καταστροφή ηπατικών κυττάρων (κυτταρόλυση).
  • Η εκκίνηση ανοσολογικών μηχανισμών με τη σύνθεση ειδικών αντισωμάτων.
  • Αυτοάνοση επιθετικότητα ανοσοσυμπλεγμάτων έναντι φλεγμονωδών ηπατοκυττάρων.

Ο ιός της ηπατίτιδας C, που εισέρχεται στο σώμα, προκαλεί μια πολύ αργή ανοσιακή ανταπόκριση, η οποία δεν αφήνει εντοπισμένη για μεγάλο χρονικό διάστημα. Η ασθένεια συχνά βρίσκεται μόνο στο στάδιο της κίρρωσης του ήπατος, αν και όλη την ώρα τα ιικά σωματίδια και τα αντίστοιχα αντισώματα κυκλοφορούν στο αίμα. Αυτή είναι η βάση για όλες τις γνωστές μεθόδους διάγνωσης της μόλυνσης από hcv. Αυτά περιλαμβάνουν:

  1. Ορολογικές δοκιμές σε εργαστηριακές συνθήκες.
  2. Διαγνωστικά PCR (αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης).
  3. Εκτελέστε δοκιμές για να προσδιορίσετε την ασθένεια στο σπίτι.

Βίντεο για την ηπατίτιδα C:

Πιθανές ενδείξεις για τη μελέτη

Ο καθένας μπορεί να πάει για να ελέγξει για hcv-λοίμωξη. Ειδική μαρτυρία για αυτό δεν είναι απαραίτητη, εκτός από την επιθυμία ενός ατόμου να υποβληθεί σε αυτή τη δοκιμασία αίματος. Υπάρχει όμως μια κατηγορία ατόμων που είναι υποχρεωτικά να ερευνούνται. Αυτά περιλαμβάνουν:

  • Δότες αίματος.
  • Τα άτομα που έλαβαν μετάγγιση αίματος, τα συστατικά του ή τα παρασκευάσματά του με βάση αυτό.
  • Αύξηση του επιπέδου των ηπατικών τρανσαμινασών (ALT, ASAT), ειδικά μετά από προηγούμενες χειρουργικές επεμβάσεις, εργαστηριακές και άλλες ιατρικές επεμβάσεις.
  • Υποψία της ιογενούς ηπατίτιδας C ή η ανάγκη να αποκλειστεί αυτή η διάγνωση.
  • Αρνητικές δοκιμές για ιική ηπατίτιδα Β παρουσία συμπτωμάτων ηπατικής φλεγμονής.
  • Ελέγχει την αποτελεσματικότητα της θεραπείας με λοίμωξη με hcv και αντιμετωπίζει θέματα σχετικά με την τακτική της περαιτέρω θεραπείας.

Χαρακτηριστικά της ορολογικής διάγνωσης και της αξιολόγησης των αποτελεσμάτων

Εργαστηριακή ανάλυση του αίματος για HCV περιλαμβάνει την ανίχνευση των αντισωμάτων (ανοσοσφαιρινών) τάξεις Μ και ιό G αντιγονικό συστατικό της ηπατίτιδας C χρησιμοποιούνται για την αντίδραση αυτή κυρίως συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία (ELISA) και ραδιοανοσοδοκιμασία (RIA). Οι εργαστηριακές μέθοδοι για την ανίχνευση αντισωμάτων θεωρούνται οι πλέον αξιόπιστες, δεδομένου ότι επιτρέπουν τη χρήση διαφόρων αντιγονικών συμπλοκών των πιο κοινών τύπων ιού ηπατίτιδας C ως αντιδραστήρια.

Για τη μελέτη, συλλέγονται περίπου 20 χιλιοστόλιτρα φλεβικού αίματος από την περιφερειακή φλέβα. Αυτό φυγοκεντρίζεται και καθιζάνει για να ληφθεί ένα πλάσμα (υγρό διαφανές τμήμα). Στοιχεία μορφής και ιζήματα αφαιρούνται. Για να αποφύγετε ψευδώς θετικά αποτελέσματα, είναι προτιμότερο να παίρνετε αίμα το πρωί πριν φάτε. Λίγες μέρες πριν, είναι επιθυμητό να αποκλειστεί η χρήση φαρμάκων, ειδικά που επηρεάζουν την κατάσταση του ανοσοποιητικού συστήματος.

Τα αποτελέσματα των αναλύσεων μπορούν να παρουσιαστούν με αυτόν τον τρόπο:

  1. Hcv - αρνητικό. Αυτό σημαίνει ότι δεν ανιχνεύθηκαν αντισώματα στον ιό της ηπατίτιδας C στο σώμα. Δεν υπάρχουν ασθένειες.
  2. Hcv - θετικό. Αυτό δείχνει την παρουσία αντισωμάτων στον ιό της ηπατίτιδας C στα δείγματα αίματος που εξετάστηκαν. Το άτομο είτε είχε αυτή την ασθένεια είτε είναι σήμερα άρρωστος ή έχει χρόνια μορφή.
  3. Ανιχνεύθηκε IgG κατά της hcv. Σε αυτή την περίπτωση, αξίζει να σκεφτούμε τη χρόνια ιογενή ηπατίτιδα C.
  4. Αντι-hcv IgM ανιχνεύθηκε. Η μεμονωμένη παρουσία του μιλά για μια οξεία διαδικασία και ένα συνδυασμό με IgG αντι-hcv - επιδείνωση της χρόνιας.

Χαρακτηριστικά των ταχέων δοκιμών

Ο καθένας μπορεί να κάνει μια εξέταση αίματος μόνο με hcv. Αυτό κατέστη δυνατό με τη δημιουργία ειδικών συστημάτων ελέγχου για την ταχεία διάγνωση της ηπατίτιδας C. Η αποτελεσματικότητά τους είναι κατώτερη από εργαστηριακές μεθόδους ορολογικής, αλλά ιδανικό για μια κατά προσέγγιση προσδιορισμό της πιθανής μόλυνσης σε σύντομο χρονικό διάστημα.

Μπορείτε να αγοράσετε ή να παραγγείλετε ένα σύστημα δοκιμών σε οποιοδήποτε φαρμακείο. Περιλαμβάνει όλα τα απαραίτητα για τη δοκιμή. Η ανάλυση αρχίζει με το άνοιγμα του αποστειρωμένου δοχείου και την προετοιμασία όλων των συστατικών. Μετά από θεραπεία με ειδική σερβιέτα με αντισηπτικό δάκτυλο, τρυπάται απαλά με ένα εργαλείο διάστρωσης. Χρησιμοποιώντας μια πιπέτα, 1-2 σταγόνες αίματος συλλέγονται και μεταφέρονται στην εσοχή στην πλάκα δοκιμής. Στο αίμα προσθέστε 1-2 σταγόνες αντιδραστηρίου από το φιαλίδιο, το οποίο αποτελεί μέρος της δοκιμής. Το αποτέλεσμα πρέπει να αξιολογηθεί μετά από 10 λεπτά. Είναι εξαιρετικά σημαντικό να μην αξιολογηθεί το αποτέλεσμα μετά από 20 λεπτά λόγω της πιθανότητας ενός ψευδώς θετικού αποτελέσματος.

Η διεξαχθείσα εξέταση αίματος μπορεί να θεωρηθεί ως εξής:

  1. Στο παράθυρο του δισκίου εμφανίστηκε μια μωβ ταινία (η δοκιμή είναι αρνητική). Αυτό σημαίνει ότι δεν ανιχνεύονται αντισώματα έναντι του hcv στο αίμα της εξέτασης. Το άτομο είναι υγιές.
  2. Στο παράθυρο του δισκίου εμφανίστηκαν δύο μοβ λωρίδες (η δοκιμή είναι θετική). Αυτό υποδηλώνει την παρουσία αντισωμάτων στο υπό εξέταση αίμα και τη σύνδεση του οργανισμού με τη ιογενή ηπατίτιδα C. Τέτοια άτομα υπόκεινται σε πιο διεξοδικές μεθόδους ορολογικής διάγνωσης χωρίς αποτυχία.
  3. Στο παράθυρο του tablet δεν εμφανίστηκε ούτε μία λωρίδα. Το σύστημα δοκιμής είναι κατεστραμμένο. Συνιστούμε την επανεξέταση.

Χαρακτηριστικά της διάγνωσης PCR

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης είναι ο πιο σύγχρονος τρόπος ανίχνευσης του γενετικού υλικού οποιωνδήποτε κυττάρων. Όσον αφορά την ιική ηπατίτιδα C, η μέθοδος καθιστά δυνατή την ανίχνευση μορίων RNA ιικών σωματιδίων. Αυτό μπορεί να γίνει ποιοτικά και ποσοτικά. Η πρώτη μέθοδος μπορεί να μην είναι ενημερωτική εάν ο αριθμός των σωματιδίων του ιού στο υπό εξέταση αίμα δεν φτάνει την τιμή κατωφλίου. Η δεύτερη μέθοδος σάς επιτρέπει να υποδείξετε με ακρίβεια τον αριθμό ανιχνευμένων αλυσίδων ιού RNA και είναι πιο ευαίσθητη.

Η ανάλυση μπορεί να εκπροσωπείται από τα ακόλουθα αποτελέσματα:

  1. Δεν ανιχνεύθηκε RNA Hcv. Αυτό σημαίνει ότι δεν υπάρχουν σωματίδια ιού στο δοκιμαστικό αίμα.
  2. Ανιχνεύεται RNA hcv. Αυτό υποδεικνύει τη μόλυνση με ηπατίτιδα C.
  3. Εκτελείται μια ποσοτική δοκιμή hcv-PCR για να εκτιμηθεί ο βαθμός μόλυνσης του αίματος του ασθενούς και η δραστηριότητα του πολλαπλασιασμού του ιού στον οργανισμό. Υψηλό ιικό φορτίο αίματος από 600 έως 700 IU / ml θεωρείται. Οι δείκτες πάνω από αυτό το σχήμα ονομάζονται πολύ υψηλό, κάτω από αυτό - χαμηλό ιικό φορτίο αίματος.

Ένας έλεγχος αίματος για hcv στη διάγνωση της ιογενούς ηπατίτιδας C είναι η μόνη ενημερωτική, προσβάσιμη και αβλαβής μέθοδος για την επαλήθευση της διάγνωσης. Η ορθή ερμηνεία και ο συνδυασμός διαφορετικών τρόπων αντιμετώπισης ελαχιστοποιούν τον αριθμό των διαγνωστικών σφαλμάτων.

BEST anti-HCV (κιτ 2) 12x8

Cat. № 0772

Τιμή: κατόπιν αιτήματος

Μπορείτε να προσθέσετε το στοιχείο στο καλάθι καθορίζοντας την ποσότητα

Τύπος συσκευασίας: κουτί από χαρτόνι

Σετ αντιδραστηρίων για immunoenzyme προσδιορίσει κατηγορίες ανοσοσφαιρινών G και Μ του ιού της ηπατίτιδας C σε ορό / πλάσμα ανθρώπινου αίματος και προϊόντων αίματος (ανοσοσφαιρίνες, ιντερφερόνες, κρυοϊζήματος, αλβουμίνη). Το κιτ 2 σχεδιάστηκε για 96 προσδιορισμούς, συμπεριλαμβανομένων ελέγχων - 4 φρεάτια ανά ανάλυση, καθώς και κλασματική χρήση μιας ταινίας ανά μελέτη. Προορίζεται για χειροκίνητη ρύθμιση, σε αυτόματους αναλυτές ELISA ανοιχτού τύπου. Η τεχνική βασίζεται σε ELISA στερεής φάσης χρησιμοποιώντας ανασυνδυασμένα αντιγόνα. Είναι δυνατός ο υπολογισμός του συντελεστή θετικότητας. Ογκομετρική ισότητα ελέγχων και δειγμάτων. Τυποποίηση των συνθηκών διεξαγωγής της ενζυματικής αντίδρασης με το χρωμογόνο σε θερμοστάτη στους 37 ° C. Διάρκεια αντίδρασης: 1 ώρα 20 λεπτά

Λειτουργικός σκοπός

Συνιστάται για εξέταση των δοτών αίματος, οργάνων, ανθρώπινων ιστών, διαφορική διάγνωση της ιογενούς ηπατίτιδας

Τεχνικές προδιαγραφές

Περιεχόμενα κιτ:
1. Πτυσσόμενο δισκίο - 1 τεμ.
2. Θετικοί και αρνητικοί έλεγχοι - 2x1 fl.
3. Σύζευξη και διάλυμα για την αραίωση του (PK) - 2x1 fl.
4. Διάλυμα αραίωσης ορού (PC) - 1 fl.
5. Φωσφορικό ρυθμισμένο αλατούχο διάλυμα, συμπύκνωμα (PBS) - 2 fl.
6. Διάλυμα ρυθμιστικού διαλύματος υποστρώματος (SBR) - 1 fl.
7. Τετραμεθυλβενζιδίνη, συμπύκνωμα (ΤΜΒ) - 1 κ.εκ.
8. Αντιδραστήριο στάσης - 1 φλ.
9. Οδηγίες χρήσης.
10. Ταινία για σφράγιση.
Δοκιμαστικό δείγμα: ορός ή πλάσμα αίματος, με όγκο όχι μεγαλύτερο από 40 μl.
Αριθμός πρωτοκόλλων για διεξαγωγή ELISA: τουλάχιστον 4.
Συνθήκες αποθήκευσης: σε θερμοκρασία +2. 8 ° C για ολόκληρη τη διάρκεια ζωής που αναφέρεται στην ετικέτα.
Η διάρκεια ζωής του κιτ είναι 12 μήνες από την ημερομηνία παραγωγής.
Εγγραφή με Roszdravnadnadzor

Έλεγχος αίματος HCV

Οι τρόποι διάδοσης της ασθένειας μπορούν να χωριστούν σε ομάδες:

  • Παρεντερική - που σημαίνει ότι η λοίμωξη συμβαίνει μέσω της ανταλλαγής ιατρικών οργάνων, βελόνων και μιας μη υφασμένης συσκευής μανικιούρ.
  • Σεξουαλική - ένας ιός μεταδίδεται από έναν σύντροφο στον άλλο κατά τη διάρκεια της σεξουαλικής επαφής χωρίς προστασία.
  • Η κάθετη διαδρομή είναι η μόλυνση του εμβρύου από μια άρρωστη μητέρα.

Η ανάλυση της ηπατίτιδας πρέπει να παραδοθεί από άτομα που:

  • Προετοιμαστείτε για τη σχεδιαζόμενη νοσηλεία.
  • Σχεδιάζουν να έχουν ένα μωρό.
  • Η αύξηση της χολερυθρίνης, ALT ή AST ανιχνεύθηκε στην κλινική ανάλυση.
  • Έχετε μια συμπτωματική εικόνα, παρόμοια με τα σημάδια της ηπατίτιδας C.
  • Συχνά αλλάζουν τους σεξουαλικούς τους συντρόφους ή προτιμούν το σεξ χωρίς προστασία.
  • Είναι εθισμένοι στα ναρκωτικά.
  • Ήταν ένας δωρητής.
  • Οι εργαζόμενοι σε ιατρικά ή προσχολικά ιδρύματα πρέπει να υποβάλλονται σε ετήσια συνολική εξέταση, συμπεριλαμβανομένου αυτού του είδους της ανάλυσης.

Η εξέταση αίματος HCV είναι μια εργαστηριακή μέθοδος για τη διάγνωση της ηπατίτιδας C, ο μηχανισμός της δράσης της βασίζεται στην ταυτοποίηση αντισωμάτων όπως IgG και IgM, τα οποία αρχίζουν να παράγονται ενεργά όταν εμφανίζονται αντισώματα του ιού στο αίμα. Τι είναι αυτό; Αυτοί είναι παθογόνοι μικροοργανισμοί που εμφανίζονται αρκετές εβδομάδες ή ακόμα και μήνες μετά τη μόλυνση.

Επεξήγηση της ανάλυσης

Μελετώντας τη δομή του HCV, οι επιστήμονες κατέληξαν στο συμπέρασμα ότι αυτός ο αιτιολογικός παράγοντας είναι ένα γονιδίωμα, που σχετίζεται με τα ζώα και τους ιούς των φυτών. Αποτελείται από ένα γονίδιο στο οποίο μπορούν να χωρέσουν πληροφορίες για εννέα πρωτεΐνες. Ο πρώτος στόχος είναι να διεισδύσει ο ιός στο κύτταρο, ο δεύτερος είναι υπεύθυνος για το σχηματισμό του ιικού σωματιδίου, ενώ άλλοι αυτή τη στιγμή αλλάζουν τις φυσικές λειτουργίες του κυττάρου στον εαυτό του. Ανήκουν στη δομική ομάδα πρωτεϊνών, όταν οι άλλες έξι είναι μη δομικές.

Το γονιδίωμα HCV είναι ένας απλός κλώνος RNA εγκλεισμένος σε μια κάψουλα δική του (καψίδιο) που σχηματίζεται από μια νουκλεοκαψιδική πρωτεΐνη. Όλα αυτά καλύπτονται από ένα κέλυφος που αποτελείται από πρωτεΐνες και λιπίδια, σας επιτρέπει να συνδέσετε με επιτυχία τον ιό σε ένα υγιές κύτταρο.

Μόλις ο ιός εισέλθει στην κυκλοφορία του αίματος, αρχίζει να κυκλοφορεί σε όλο το σώμα μέσω της κυκλοφορίας του αίματος. Μόλις βρεθεί στο ήπαρ, το γονιδίωμα ενεργοποιεί τις λειτουργίες του και ενώνει τα ηπατικά κύτταρα, σταδιακά διεισδύοντας σε αυτά. Τα ηπατοκύτταρα (τα αποκαλούμενα αυτά κύτταρα) υφίστανται διαταραχές κατά τη διάρκεια της λειτουργίας τους. Ο κύριος στόχος τους είναι να "εργάζονται για τον ιό", κατά τη διάρκεια του οποίου πρέπει να συνθέτουν ιικές πρωτεΐνες και ριβονουκλεϊκό οξύ.

Ο HCV διακρίνει διάφορους γονότυπους, δηλαδή στελέχη. Επί του παρόντος, υπάρχουν 6 γονότυποι, ενώ κάθε είδος έχει το δικό του υποείδος. Όλα αυτά καθορίζονται ανάλογα με την αρίθμηση από το 1 έως το 6. Υπάρχουν αναφορές σχετικά με τον εντοπισμό αυτού του ή εκείνου του ιού στον πλανήτη. Για παράδειγμα, 1, 2 και 3 γονότυπος συμβαίνει σε όλο τον κόσμο, ενώ 4 - περισσότερα στη Μέση Ανατολή και την Αφρική, 5 - στη Νότια Αφρική και 6 - στη Νοτιοανατολική Ασία.

Η βάση για τον ορισμό της θεραπείας θα πρέπει να είναι ένα θετικό αποτέλεσμα μιας δοκιμασίας αίματος για HCV, καθώς και ενός συγκεκριμένου γονότυπου.

Αποκωδικοποίηση της ανάλυσης HCV:

  • Το αντι-HCV IgM είναι ένας δείκτης ενεργού αναδιπλασιασμού του ιού της ηπατίτιδας C.
  • Anti-HCV Ig G είναι η πιθανή παρουσία του ιού της ηπατίτιδας C.
  • Ag HCV - ένα θετικό αποτέλεσμα, που δείχνει την παρουσία του ιού της ηπατίτιδας C,
  • HCV RNA - Ο ιός της ηπατίτιδας C υπάρχει στο σώμα και προχωρά ενεργά.

Λάθος θετικό αποτέλεσμα

Είναι ακόμη λιγότερο πιθανό να μιλήσουμε για ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα, τα οποία είναι καταχωρημένα σε ασθενείς που λαμβάνουν ανοσοκατασταλτικά ή επηρεάζονται από τα χαρακτηριστικά του ανοσοποιητικού τους συστήματος. Το ίδιο αποτέλεσμα αναμένεται εάν η ηπατίτιδα C βρίσκεται σε πρώιμο στάδιο ανάπτυξης.

Σε περίπτωση παρεξήγησης, μπορείτε να καταφύγετε σε δοκιμασία PCR της ηπατίτιδας C, εάν δίνει θετικό αποτέλεσμα, και στη συνέχεια να κάνετε άλλη ανάλυση για τον προσδιορισμό του ιικού γονότυπου.

Διάρκεια και τρόπος λήψης

Η ανάλυση για την ηπατίτιδα C συνεπάγεται τη λήψη δείγματος αίματος από τον ασθενή με άδειο στομάχι, δεδομένου ότι πρέπει να δει το δείπνο το αργότερο 8 ώρες πριν από την παράδοση του υλικού. Αφού ξυπνήσετε, μπορείτε να πιείτε μόνο λίγο νερό. Θα είναι καλύτερα εάν την παραμονή της μελέτης ακολουθήσετε τη διατροφή σας, καθιστώντας την όσο το δυνατόν πιο εύκολη και απλή. Τα τηγανισμένα και λιπαρά τρόφιμα θα πρέπει να αποκλειστούν εντελώς, καθώς και το αλκοόλ. Η βαριά σωματική εργασία και ο αθλητισμός μπορούν να επηρεάσουν την αξιοπιστία των αποτελεσμάτων των δοκιμών, οπότε προσπαθήστε να το αποφύγετε.

Αν θέλετε να κάνετε ένα τεστ αίματος για την ανίχνευση της ηπατίτιδας C, τότε θα πρέπει να πούμε ότι τα φάρμακα μπορεί να στρεβλώσει την πραγματική αξία, τόσο για τη διεξαγωγή έρευνας ή για να αρχίσετε να παίρνετε το φάρμακο, ή να έχουν μια-δυο εβδομάδες μετά την απόσυρσή τους. Αν σταματήσετε τη φαρμακευτική αγωγή είναι αδύνατη από τη μαρτυρία του γιατρού, τότε ενημερώστε τη νοσοκόμα που κάνει την ανάλυση. Πρέπει να σημειώνει το όνομα του φαρμάκου και τη δοσολογία στην οποία σας συνταγογραφήθηκε.

Ο εργαστηριακός έλεγχος απαιτεί ορό. Πόσο είναι έγκυρα τα υλικά; Μπορούν να αποθηκευτούν για λιγότερο από πέντε ημέρες σε θερμοκρασία από 2 έως 8 βαθμούς Κελσίου και περισσότερο από πέντε ημέρες, υπό την προϋπόθεση ότι η θερμοκρασία αποθήκευσης είναι -20 βαθμοί Κελσίου.

Η εξέταση αίματος HCV είναι υποχρεωτική για άτομα με ανοσοανεπάρκεια, ιδιαίτερα για τον ιό HIV.

Η διαχείριση της πύλης κατηγορηματικά δεν συνιστά αυτοθεραπεία και συμβουλεύει να συμβουλευτεί γιατρό σε πρώτα συμπτώματα της νόσου. Στην πύλη μας μπορείτε να βρείτε τους καλύτερους γιατρούς-ειδικούς, στους οποίους μπορείτε να εγγραφείτε στο διαδίκτυο ή μέσω τηλεφώνου. Μπορείτε να επιλέξετε το σωστό γιατρό σας ή θα το πάρουμε για σας απολύτως δωρεάν. Επίσης, μόνο κατά την εγγραφή μέσω μας, η τιμή της διαβούλευσης θα είναι χαμηλότερη από ό, τι στην ίδια την κλινική. Αυτό είναι το μικρό μας δώρο για τους επισκέπτες μας. Γίνετε υγιείς!

Καλύτερο αντι-vss

Ένα σύνολο αντιδραστηρίων για ανοσο-ενζυματική ανίχνευση ανοσοσφαιρινών κατηγορίας Μ στον ιό της ηπατίτιδας C.

Το καλύτερο αντι-HCV auto (κιτ 1)
(Για αυτόματους αναλυτές)

Το καλύτερο αντι-HCV auto (κιτ 2 / Charoite)

Ένα σύνολο αντιδραστηρίων για ανοσοπροσροφητική ανίχνευση κατηγοριών ανοσοσφαιρίνης G και M στον ιό της ηπατίτιδας C για τους αυτόματους αναλυτές ELISA.

Καλύτερο αντι-HCV (κιτ 1)

Καλύτερο αντι-HCV (κιτ 2)

Το καλύτερο αντι-HCV (κιτ 3)

Το καλύτερο αντι-HCV (κιτ 4)

Ένα σύνολο αντιδραστηρίων για ανοσοπροσροφητική ανίχνευση ανοσοσφαιρινών κατηγοριών G και M στον ιό της ηπατίτιδας C.

Ένα σύνολο αντιδραστηρίων για ανοσοπροσροφητική ανίχνευση ανοσοσφαιρινών κατηγοριών G και Μ σε μεμονωμένες πρωτεΐνες του ιού της ηπατίτιδας C (πυρήνας, NS3, NS4, NS5).

Καλύτερη δοκιμή επιβεβαίωσης κατά του HCV

Ένα σύνολο αντιδραστηρίων για την επιβεβαίωση ανοσοενζύμου της παρουσίας ανοσοσφαιρινών κατηγοριών G και M στον ιό της ηπατίτιδας C.

HCV AG / ΑΤ-IFA-BEST (κιτ 1)

HCV AG / ΑΤ-IFA-BEST (κιτ 2)

Ένα σύνολο αντιδραστηρίων για την ανίχνευση ανοσοενισχυτικών αντισωμάτων στον ιό της ηπατίτιδας C και το αντιγόνο πυρήνα του HCV.

Ένα σύνολο αντιδραστηρίων για την ανίχνευση ανοσοενζύμων του αντιγόνου πυρήνα του ιού της ηπατίτιδας C.

Ένα σύνολο αντιδραστηρίων για την επιβεβαίωση της παρουσίας αντισωμάτων στον ιό της ηπατίτιδας C με τη μέθοδο του ανοσοποιητικού στυπώματος.

Ένα κιτ για ELISA ελέγχου ποιότητας εργαστηρίου "Ορός που περιέχει αντισώματα στον ιό της ηπατίτιδας C".

Πίνακας ελέγχου αντι-HCV ορού

Ένα σύνολο δειγμάτων ορού που περιέχουν και δεν περιέχουν αντισώματα στον ιό της ηπατίτιδας C. Για ενδο-εργαστηριακό ποιοτικό έλεγχο (επικύρωση) μελετών για αντι-HCV.

Πρότυπο πάνελ ορού αντι-ΗΟν

Ένα σύνολο δειγμάτων ορού που περιέχουν και δεν περιέχουν αντισώματα στον ιό της ηπατίτιδας C.

Anti-vgs θετικό τι σημαίνει αυτό

Αντισώματα στην ηπατίτιδα C και τι πρέπει να γνωρίζετε για αυτά

Όταν τα διαφορετικά σωματίδια ξένων εισέρχονται στο σώμα, όπως οι ιοί, το ανθρώπινο ανοσοποιητικό σύστημα αρχίζει να παράγει τέτοιες ουσίες που ονομάζονται ανοσοσφαιρίνες. Αυτά είναι ειδικά κύτταρα που βοηθούν το σώμα να αρχίσει να καταπολεμά τον ιό. Ονομάζονται αντισώματα για την ηπατίτιδα C. Τι πρέπει να γνωρίζω γι 'αυτά;

Ποια είναι τα αντισώματα έναντι της ηπατίτιδας C;

Τέτοια αντισώματα ανιχνεύονται με ειδική ανάλυση ELISA ή δοκιμή διαλογής που χρησιμοποιείται για να καθοριστεί η ύπαρξη ενός ανθρώπινου ιογενούς ηπατίτιδας C. Τέτοια αντισώματα κατά της ηπατίτιδας C, υπάρχουν δύο κατηγορίες:

- έτσι τα αντισώματα αυτά της ηπατίτιδας C ονομάζονται Λατινικά. Ταυτόχρονα, συνολικά αυτά τα αντισώματα είναι αντισώματα κατά της ηπατίτιδας C.

Τι σημαίνει η παρουσία αντισωμάτων κατά της ηπατίτιδας C;

Απολύτως όλοι οι ασθενείς να ελέγχονται για την παρουσία τέτοιων δεικτών να διαπιστώσει αν αυτές έχουν ηπατίτιδα C. Εάν η νόσος έχει ήδη λαμβάνει χώρα στην οξεία ή χρόνια, τότε θα έχουν αντισώματα αντι-ΗΟν, αυτά τα αντισώματα στην ηπατίτιδα C μπορεί να βρεθεί μόνο μετά από 4 ή 6 εβδομάδες από την εμφάνιση της νόσου.

Υπάρχουν περιπτώσεις όπου, με την παρουσία αντισωμάτων, το σύνολο των αντι-HCV, οι άνθρωποι ανακτώνται χωρίς τη βοήθεια ειδικών και ανεξάρτητα. Αυτοί οι άνθρωποι έχουν αυτή την αγορά μπορεί να βρεθεί ακόμη και κατά τη διάρκεια των 4-8 ετών μετά την ανάκαμψή τους. Ακόμα και αν η δοκιμή κατά του HCV είναι θετική, αυτό δεν επαρκεί για να τεθεί σωστά μια διάγνωση. Στη χρόνια ηπατίτιδα αυτά τα αντισώματα για ηπατίτιδα C που διατίθενται συνεχώς, και μετά τη θετική έκβαση της θεραπείας μπορεί να παραμείνει στο σώμα για μεγάλο χρονικό διάστημα, αλλά οι τίτλοι τους, ενώ σταδιακά αρχίζουν να μειώνονται.

Αντισώματα στην ηπατίτιδα C και τι πρέπει να γνωρίζετε για αυτά;

Το πιο σημαντικό είναι ότι πρέπει να γνωρίζετε ότι τέτοια αντισώματα δεν μπορούν να προστατεύσουν από την ανάπτυξη της ίδιας της λοίμωξης και επίσης δεν μπορούν να παρέχουν ανοσία από την εκ νέου μόλυνση.

Υπάρχει ακόμα ένα τέτοιο πράγμα όπως το φάσμα του αντι-HCV. Αυτά είναι επίσης αντισώματα, εξάλλου, ειδικά, είναι κατάλληλα για μεμονωμένες δομικές και μη δομικές πρωτεΐνες αυτού του ιού. Ο ορισμός τους είναι σημαντικός για να εκτιμηθεί το πόσο υψηλό είναι το ιικό φορτίο, η δραστηριότητα της λοίμωξης, ο κίνδυνος χρόνιας λοίμωξης και επίσης η διάκριση μεταξύ οξείας ή χρόνιας ηπατίτιδας και του πόσο ήδη επηρεάζεται το ήπαρ.

Τα αντισώματα έναντι της ηπατίτιδας c από την κατηγορία IgM αναφέρονται στα αντιγόνα αυτού του ιού. Μπορούν να προσδιοριστούν ήδη μετά από 6, και σε ορισμένες περιπτώσεις και 4 εβδομάδες αμέσως μετά τη μόλυνση, οπότε η συγκέντρωσή τους μπορεί να φτάσει στο μέγιστο. Και μετά την ολοκλήρωση αυτής της διαδικασίας, το επίπεδο IgM θα αρχίσει να πέφτει, αλλά όταν η μόλυνση επανενεργοποιηθεί, το επίπεδο θα αυξηθεί ξανά. Επομένως, πιστεύεται ότι τέτοια αντισώματα είναι ένα άμεσο σημάδι μιας χρόνιας ή οξείας λοίμωξης με ένα σημάδι επανενεργοποίησης.

HCV - μια εξέταση αίματος - τι είναι;

Μια από τις πιο σύνθετες και ευρέως διαδεδομένες ασθένειες του τέλους του περασμένου αιώνα είναι η μόλυνση από τον ιό της ηπατίτιδας C. Στις ανεπτυγμένες χώρες ο επιπολασμός της νόσου είναι 2%, ενώ ο συνολικός αριθμός των ασθενών παγκοσμίως είναι 500 εκατομμύρια άνθρωποι. Η μόλυνση εντοπίστηκε πολύ αργότερα από τους προκατόχους της: ηπατίτιδα Α και Β - και αρχικά ονομάστηκε "ούτε μόλυνση Α ούτε Β". Μαζί με την αύξηση του εθισμού στα ναρκωτικά, ο αριθμός των μολυσμένων ανθρώπων αυξάνεται κάθε χρόνο. Ο λόγος για όλα είναι ο τρόπος μόλυνσης: με ενδοφλέβια ένεση του φαρμάκου.

Επίσης, ο ιός μεταδίδεται κατά τη διάρκεια του τοκετού από τη μητέρα στο παιδί εάν έχει υποστεί βλάβη στο δέρμα. Γι 'αυτό είναι τόσο σημαντικό να γνωρίζετε, HCV δοκιμή αίματος - τι είναι αυτό; Κατά την εγκυμοσύνη είναι απαραίτητο να περάσει σε κάθε μελλοντική μαμά. Αυτή η ασθένεια είναι ο ηγέτης μεταξύ των λόγων που απαιτούν μεταμόσχευση σε ασθενή με ήπαρ.

Πώς αναπτύσσεται η ηπατίτιδα C;

Η μόλυνση από τον ιό της ηπατίτιδας C συμβαίνει ως εξής: Το αίμα ενός άρρωστου πρέπει να εισέλθει στο αίμα ενός υγιούς ατόμου. Η πρώτη ροή αίματος μεταφέρει τα σωματίδια του ιού, διαλυμένα σε υγιές αίμα, στο ήπαρ και στη συνέχεια αρχίζει η αναπαραγωγή. Στην περίπτωση αυτή, ο ανθρώπινου ήπατος υποφέρει διπλά: από τη μία πλευρά, τα κύτταρα του ήπατος καταστραφεί η δραστικότητα του ιού, από την άλλη - το ανθρώπινο σώμα αρχίζει να καταπολεμήσει: στέλνει την ανοσοαπόκριση, ήτοι ειδική-λεμφοκύτταρα είναι τα κύτταρα που θα κληθεί να καταστρέψει τα μολυσμένα ηπατικά κύτταρα.

Αναγνωρίζει το ανοσοποιητικό σύστημα του ιού από το περιεχόμενο ξένου γενετικού υλικού. Όλοι όσοι έχουν βιώσει αυτό, καθώς και ορισμένοι ασθενείς που είναι υποχρεωμένοι, γνωρίζουν τι σημαίνει η εξέταση αίματος HCV. Ότι πρόκειται για πολύ σημαντικούς δείκτες τόσο στο στάδιο της ανίχνευσης όσο και στο στάδιο της θεραπείας, θα πει ο καθένας, αν και μάλιστα μια μέρα αντιμετώπισε αυτό το πρόβλημα.

Πότε γίνεται ανάλυση HCV;

Όταν ένας ασθενής έχει μια καταγγελία σχετικά με το ήπαρ, οι γιατροί συνήθως συνταγογραφούν μια εξέταση αίματος για έναν τέτοιο ασθενή με HBS και HCV. Προκειμένου να προσδιοριστεί εάν η ασθένεια προκαλείται από την παρουσία στο αίμα του ιού της ηπατίτιδας C ή άλλων συν-νοσηρών συνθηκών, απαιτούνται εξετάσεις αίματος HCV. Τι είναι αυτός ο δείκτης;

Η ανάλυση αποκαλύπτει αντισώματα στο ανθρώπινο αίμα που μπορούν να ανήκουν σε μία από τις δύο τάξεις:

  • Αντισώματα στο HCV. Είναι ο κύριος δείκτης. Η παρουσία λοίμωξης στο σώμα επιβεβαιώνεται όταν ανιχνεύεται HCV RNA. Αυτά τα αντισώματα βρίσκονται στο στάδιο της ανάρρωσης και μπορούν επίσης να συνεχίσουν να βρίσκονται στο αίμα για άλλα 1-4 χρόνια. Ο κύριος δείκτης της παρουσίας χρόνιας ηπατίτιδας είναι οι αυξανόμενοι ρυθμοί αντι-HCV.
  • Το επίπεδο IgA, IgM, IgG στον ορό του αίματος. Η αύξηση των δεικτών αυτών των δεικτών υποδηλώνει ηπατική βλάβη όταν εκτίθεται σε αλκοόλ, με κίρρωση μπιλιάρδου και μερικές άλλες ασθένειες.

Για ποιους μιλούν οι δείκτες;

Από τη στιγμή λήψης του αντιγόνου στο ανθρώπινο σώμα, η εξέταση αίματος HCV μπορεί να ανιχνευθεί ήδη την 4-5η εβδομάδα. Ότι ο ιός της ηπατίτιδας C δεν μπορεί να πει ακριβώς. Αυτά τα δεδομένα είναι απαραίτητα για να μπορεί ο γιατρός να αποφασίσει σχετικά με την ανάγκη ενός τέτοιου ασθενούς να λάβει αντιιική θεραπεία. Ειδικά εάν στο αίμα υπάρχουν λιγότερα από 750 αντίγραφα RNA ανά 1 ml αίματος, τότε αυτό υποδεικνύει μια ελάχιστη ιογενή επίθεση.

Τα αντισώματα της ηπατίτιδας C αναφέρονται πάντοτε σε μία από τις δύο κατηγορίες - G ή M, τα δεδομένα των οποίων πρέπει αναγκαστικά να εισαχθούν στη δοκιμασία αίματος HCV. Η εξήγηση εξηγεί αυτές τις παραμέτρους ως ανοσοσφαιρινών κατηγορίας G (IgG) και Μ (IgM). Ένα θετικό αποτέλεσμα στον πρώτο δείκτη δεν δείχνει ακόμη μια συγκεκριμένη διάγνωση. Η κατηγορία ανοσοσφαιρίνης G φτάνει τις μέγιστες τιμές για 5-6 μήνες από τη στιγμή της μόλυνσης στο σώμα και παραμένει η ίδια με τη χρόνια ηπατίτιδα.

Η τάξη των ανοσοσφαιρινών M μπορεί να προσδιοριστεί το νωρίτερο 1-1,5 μήνες μετά τη μόλυνση και να επιτευχθεί πολύ γρήγορα η μέγιστη συγκέντρωση. Υπάρχει ακόμη ένας δείκτης - anti-NS3, ο οποίος, με τους υψηλούς δείκτες του, είναι ένας σαφής πρόγονος της παρουσίας μιας οξείας διαδικασίας στο σώμα.

Πώς να δωρίσετε αίμα για ανάλυση HCV;

Για να δώσετε αίμα στο εργαστήριο για να προσδιορίσετε την παρουσία αντισωμάτων HCV, δεν υπάρχουν συγκεκριμένες οδηγίες. Η μόνη σύσταση των γιατρών: ο φράκτης πρέπει να εκτελείται με άδειο στομάχι. Λαμβάνεται αίμα από τη φλέβα του εξεταζόμενου ασθενούς με μία σύριγγα μιας χρήσης.

Αποκωδικοποίηση των δεικτών

Έτσι, ο υποτιθέμενος ασθενής έκανε μια εξέταση αίματος HCV. Ποια είναι αυτά τα πλεονεκτήματα και τα μειονεκτήματα στο αποτέλεσμα; Ο παρακάτω πίνακας θα απαντήσει σε αυτό.

Τύποι δοκιμών με HCV

Υπάρχουν ποιοτικές και ποσοτικές εξετάσεις που καθορίζουν τον HCV (εξέταση αίματος). Τι είναι αυτό;

Χρησιμοποιούνται ποσοτικές δοκιμές αν το κατώτερο όριο φθάνει 500 αντίγραφα RNA ανά ml ή 200 μονάδες ανά ml. Προσδιορίστε αυτές τις δοκιμές για HCV-RNA. Οι μετρήσεις διεξάγονται δύο φορές, επειδή τα δεδομένα είναι συχνά διαφορετικά. Με θετικές αντι-HCV και ποσοτικές εξετάσεις δίνουν θετικό αποτέλεσμα σε περίπου 75% των περιπτώσεων. Επιπλέον, ένα τέτοιο αποτέλεσμα μπορεί να ληφθεί σε σχεδόν 95% των ασθενών με οξεία ή χρόνια ηπατίτιδα C. Αυτές οι εξετάσεις που χρησιμοποιούνται στη διάγνωση της οξείας μολύνσεις, καθώς επίσης και σε ανοσοανεπαρκείς ασθενείς των οποίων αντίσωμα δοκιμής έδωσε αρνητικό αποτέλεσμα, ωστόσο, υπάρχει υπόνοια για την παρουσία λοίμωξης από HCV.

Οι ποιοτικές δοκιμές είναι πιο ευαίσθητες, το κατώτερο όριο είναι 100 αντίγραφα RNA ανά 1 ml. Χρησιμοποιείται για να διαπιστωθεί η διάγνωση της οξείας λοίμωξης από τον HCV με εξέταση αίματος για HCV. Ένα θετικό αποτέλεσμα μπορεί να ανιχνευθεί ήδη εντός των πρώτων δύο εβδομάδων μετά τη μόλυνση. Μια ποιοτική δοκιμασία είναι διαφορετική, καθώς μπορεί επίσης να δώσει ένα ψευδώς θετικό ή ένα ψευδώς αρνητικό αποτέλεσμα.

Έλεγχος αίματος HCV: τι σημαίνει αυτό και πότε συνταγογραφείται;

Ανάλυση αίματος για HCV - μία από τις μεθόδους διάγνωσης του ιού της ηπατίτιδας C Η δοκιμή εκχωρείται όταν τα συμπτώματα της ηπατίτιδας C, αυξημένα ηπατικά ένζυμα, καθώς και εξετάσεις των ατόμων σε κίνδυνο για λοίμωξη με ιογενή ηπατίτιδα. Στην τελευταία περίπτωση, μαζί με εξέταση αίματος για HCV, διεξάγεται εξέταση αίματος σε HBs Ag.

Ο HCV (ιός ηπατίτιδας C του ιού της ηπατίτιδας C) ανήκει στην οικογένεια φλαβινοϊών. Ανακαλύφθηκε για πρώτη φορά το 1988 από μια ομάδα ερευνητών της αμερικανικής βιοτεχνολογικής εταιρείας Chiron. Το HCV γονιδίωμα αντιπροσωπεύεται από ένα μόριο RNA, οπότε ο ρυθμός μετάλλαξης του ιού είναι πολύ υψηλός. Τα άτομα που έχουν μολυνθεί από τον ιό της ηπατίτιδας C έχουν τα ιικά σωματίδια των οποίων τα γονιδιώματα διαφέρουν κατά 1-2%. Αυτό το χαρακτηριστικό του πληθυσμού του ιού του επιτρέπει να αναπαραχθεί με επιτυχία παρά τις προστατευτικές αντιδράσεις της ανθρώπινης ανοσίας. Οι διαφορές στα γονιδιώματα του ιού μπορεί να επηρεάσουν την πορεία της λοίμωξης και τα αποτελέσματα της θεραπείας.

Σύμφωνα με τον Παγκόσμιο Οργανισμό Υγείας, μέχρι σήμερα, ο ιός του HCV έχει μολύνει περίπου 150 εκατομμύρια ανθρώπους, κάθε χρόνο ο ιός της ηπατίτιδας C προκαλεί το θάνατο περισσότερων από 350.000 ασθενών.

Μέθοδοι μετάδοσης της ηπατίτιδας C

Ο ιός της ηπατίτιδας C μεταδίδεται από μολυσμένο αίμα, όπως ο αποδέκτης του αίματος ή των οργάνων του δότη από ένα μολυσμένο μητέρα στο βρέφος, μέσω της σεξουαλικής επαφής, χρησιμοποιώντας μη-αποστειρωμένες σύριγγες σε περιβάλλοντα φροντίδας υγείας και εργαλεία για τατουάζ και piercing κομμωτήρια.

Η νόσος μπορεί να εμφανιστεί σε οξεία μορφή, που διαρκεί αρκετές εβδομάδες και σε χρόνια, η οποία μπορεί να οδηγήσει σε καρκίνο ή κίρρωση του ήπατος.

HCV-ανάλυση του αίματος: τι σημαίνει αυτό από την άποψη της ανοσολογίας;

Μια εξέταση αίματος για HCV βασίζεται στην ανίχνευση ειδικών ανοσοσφαιρινών IgG και IgM κατηγοριών, έτσι ώστε αυτό το είδος έρευνας ονομάζεται μερικές φορές το αντι-ΗΟν αίματος ανάλυση. Ανοσοσφαιρίνες - αυτό ειδικές πρωτεΐνες του ανοσοποιητικού συστήματος, που παράγονται από Β-λεμφοκύτταρα σε απόκριση προς την ανίχνευση των ξένων πρωτεϊνών στο σώμα. Κατά την μόλυνση με ηπατίτιδα ανοσοσφαιρίνες ιό C παράγονται πρωτεΐνες ελύτρου του ιού, πρωτεΐνη πυρηνοκαψιδίου πυρήνα και μη δομικές πρωτεΐνες NS. Η εμφάνιση των πρώτων αντισωμάτων στον ιό δεν εμφανίζεται νωρίτερα από 1-3 μήνες μετά τη μόλυνση. Για την ανίχνευση των αντισωμάτων ιατρός μπορεί να καθορίσει τη φάση της λοίμωξης (οξεία, λανθάνουσα ή επανενεργοποιηθεί). Ειδικά αντισώματα για ηπατίτιδα C μπορεί να ανιχνευθεί ακόμη και μετά την πάροδο των 10 ετών από την ασθένεια, αλλά η συγκέντρωσή τους είναι χαμηλή, και από την προστασία εκ νέου ιού, δεν είναι ικανοί.

Ερμηνεία των αποτελεσμάτων της ανάλυσης

  • Θετική εξέταση αίματος HCV. Τι σημαίνει αυτό; Αυτό το αποτέλεσμα υποδεικνύει μια ασθένεια ηπατίτιδας Ο σε οξεία ή χρόνια μορφή ή μια μεταφερθείσα νόσος.
  • Αρνητική ανάλυση HCV του αίματος. Τι σημαίνει αυτό; Δεν υπάρχει ιός ηπατίτιδας C στο αίμα ή η μόλυνση έχει συμβεί πρόσφατα, επομένως δεν υπάρχουν αντισώματα σε αυτό. Σε ορισμένους ασθενείς δεν παράγονται καθόλου αντισώματα αυτού του ιού. Αυτό το σενάριο ανάπτυξης της νόσου καλείται οροαρνητικό, συμβαίνει σε 5% των περιπτώσεων.
  • Η PCR σε HCV RNA δεν έδειξε ιό, είχε προηγουμένως ληφθεί θετικό τεστ HCV αίματος. Τι σημαίνει αυτό; Το αποτέλεσμα της δοκιμασίας αίματος για HCV ήταν ψευδώς θετικό, η αιτία μπορεί να είναι μερικές λοιμώξεις, νεοπλάσματα, αυτοάνοσες ασθένειες.

Ανίχνευση HBV αντισωμάτων στο αίμα, τι σημαίνει αυτό;

Natalka

Αντισώματα κατά του ιού της ηπατίτιδας C (αντι-ΗΟν) - λοίμωξη με ηπατίτιδα C διαγνωστική μέθοδο για την ανίχνευση του αίματος μέσω και των δύο IgG αντισώματα τάξης και IgM (συνολικό ειδικά αντισώματα που παράγονται με τις πρωτεΐνες του ιού της ηπατίτιδας C με ELISA-συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία). Στο πρότυπο δεν υπάρχουν αντισώματα στον ιό της ηπατίτιδας C στο αίμα.
Η ανίχνευση συνολικών αντισωμάτων (anti-HCV) επιτρέπει τη διάγνωση της ηπατίτιδας C από 3-6 εβδομάδες και περισσότερο μετά τη μόλυνση. Ωστόσο, η ανίχνευση αντισωμάτων με ELISA είναι διαλογή και δεν αρκεί για τη διάγνωση του ιού της ηπατίτιδας C και απαιτεί επιβεβαίωση με τη μέθοδο ανοσοκηλίδας.

Τζούλια

Σε αντίθεση με HBV, τα οποία καταγράφονται στη διάγνωση αντισώματος και αντιγονικούς δείκτες με HCV ELISA μόνο παγιδευτεί αντίσωμα. Τα αντιγόνα HCV, εάν εισέλθουν στο αίμα, βρίσκονται σε ποσότητες που δεν έχουν καταγραφεί. Τα αντιγόνα HCV μπορούν να ανιχνευθούν σε βιοψίες ήπατος χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημικές μεθόδους έρευνας. Αυτό περιορίζει σημαντικά την ικανότητα αξιολόγησης της πορείας και της δραστηριότητας της μολυσματικής διαδικασίας.
Πρόσφατα, υπήρξαν ενδείξεις για μια νέα προσέγγιση στην ένδειξη των αντιγόνων του HCV στο αίμα. Το πρώτο βήμα είναι η απελευθέρωση αντιγόνων από τις κυτταρικές δομές με λύση του ορού, η δεύτερη είναι η σύλληψη αντιγόνων με ειδικά μονοκλωνικά αντισώματα. Η εισαγωγή αυτής της μεθόδου στην κλινική πρακτική αποσκοπεί ουσιαστικά στον εμπλουτισμό των δυνατοτήτων διάγνωσης και ελέγχου κατά τη διάρκεια του HCV.
Anti-HCV ως επί το πλείστον (εκτός από τα αντισώματα κλάσης Μ έως coreAg) δεν υποδεικνύει μια συνεχή ιική αντιγραφή, δεν χαρακτηρίζουν τη δραστηριότητά της μπορεί να αντιστοιχεί σε μετα-μόλυνση. Έχουμε να εξετάσει επίσης ότι οι λήπτες που είχαν μεταγγίζονται μολυσμένο αίμα, μπορούν να ανιχνευθούν αντι-ΗΟν δότη με μία μόνο ένδειξη δεν είναι απαραίτητα ενδεικτικά της μόλυνσης HCV μετά από μετάγγιση. Ένδειξη των αντι-HCV είναι κυρίως λύνει το πρόβλημα του αιτιολογικού διάγνωση, αλλά δεν χαρακτηρίζουν την πορεία της μόλυνσης (οξεία, χρόνια) και δεν επιλύει το πρόβλημα της πρόβλεψης. Σε ασθενείς με χρόνια HCV, αντι-HCV ανιχνεύεται στο αίμα όχι μόνο σε ελεύθερη μορφή, αλλά και στη σύνθεση κυκλοφορούντων ανοσοσυμπλεγμάτων. Το περιεχόμενό τους είναι σχετικά μεγαλύτερο με την ανάπτυξη μεικτής ηπατίτιδας HBV / HCV.
Τα αντισώματα σχηματίζονται σε καθεμία από τις ιικές πρωτεΐνες που βρίσκονται στη δομική και μη δομική περιοχή του HCV. Αυτό καθορίζει την άνιση εξειδίκευση και, κατά συνέπεια, τη διαφορετική διαγνωστική πληροφοριακή αξία της ένδειξης. Για τη διαλογή αντι-ΗΟν, χρησιμοποιείται η μέθοδος ELISA και ως επιβεβαιωτική δοκιμή αναφοράς, η μέθοδος ανοσοκηλίδας (RIBA). Το πρώτο σύστημα δοκιμής που βασίστηκε στην ένδειξη αντισωμάτων έναντι του C-100-3 σε ELISA έγινε γρήγορα διαδεδομένο στην κλινική, επιδημιολογική πρακτική, στην επιλογή των δοτών. Ωστόσο, επέτρεψε τη δέσμευση αντισωμάτων στη ζώνη, η οποία χαρακτηρίζει μόνο το 12% της ιικής πολυπρωτεΐνης και αποκλειστικά στη μη δομική περιοχή (NS3, NS4). Επιπλέον, το τεχνητό ανασυνδυασμένο C-100-3 αντιγόνο δεν συμπίπτει εντελώς με φυσικές ιικές πρωτεΐνες, γεγονός που προκαθορίζει την ασθενή ανοσογονικότητά του.
Αντισώματα προς S-πρωτείνη (πυρήνα Ag) μέσω του αντιγόνου C-100-3 γενικά δεν σταματούν. Όλα αυτά προκαθορισμένη χαμηλή ένδειξη ειδικότητα των αντι-HCV και ένας μεγάλος αριθμός των ψευδώς-αρνητικών αποτελεσμάτων, ιδιαίτερα στην χρόνια φάση της HCV. Σε ασθενείς με σοβαρή υπεργαμμασφαιριναιμία, αντιθέτως, η δοκιμή C-100-3 συχνά δίνει ψευδώς θετικά αποτελέσματα. Όταν η υποδεικνύοντας αντισώματος στις C-100-3 παρουσιάζει ιδιαίτερες δυσκολίες στην επίλυση του προβλήματος της διαφορικής διάγνωσης της χρόνιας HCV με αυτοάνοση ηπατίτιδα, κρυοσφαιριναιμία, του κολλαγόνου.
Τα πειραματικά συστήματα 2ης γενιάς σας επιτρέπει να συλλάβει αντισώματα στις πρωτεΐνες σε διαφορετικές περιοχές του γονιδιώματος, όχι μόνο αδόμητη, αλλά και η δομική περιοχή. Το πλεονέκτημά τους ήταν κατά κύριο λόγο υψηλή εξειδίκευση, καθώς και η πιθανότητα πληρέστερης αντιπροσώπευσης του αντιγονικού φάσματος του HCV. Χρησιμοποιώντας συστήματα δοκιμών 2ης γενιάς έχει βελτιωθεί σημαντικά επιλογής του δότη και να μειωθεί η απειλή της posttransdiffuznogo HCV.
Ταυτόχρονα, και με τη χρήση συστημάτων δοκιμών δεύτερης γενεάς, είναι πιθανόν να υπάρχουν ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα, ιδιαίτερα σε ασθενείς με γονότυπους HCV που είναι ασυνήθιστοι για αυτή την περιοχή. Τα πιο προηγμένα συστήματα δοκιμών είναι η τρίτη γενιά.
Η πληροφόρηση των μελετών αυξάνεται σημαντικά όταν το ευρύ φάσμα των αντι-HCV αξιολογείται διεξοδικά, απαραίτητα υπό συνθήκες δυναμικού ελέγχου. Ένα τέτοιο σύστημα παρατήρησης επιτρέπει σε κάποιον να ανιχνεύει αλλαγές στην αναλογία αντισωμάτων προς διαφορετικά αντιγόνα HCV.

Ευγένι Στεφάντσοφ

Στον γιο αποκαλύπτεται το ΑΤκ HCVAg. Και το HB s Ag δεν ανιχνεύεται, μπορεί να είναι λάθος. Και τι είναι απαραίτητο να παραδώσει η ανάλυση για την ακριβή διάγνωση; Ο γιος μου δεν έχει χρησιμοποιήσει φάρμακο για 27 χρόνια. Το αίμα χορηγήθηκε 2 φορές στον Tambov για HIV και στον ποταμό. κ.λπ. Inzhavino στο ιατρικό συμβούλιο στο στρατό και στη συνέχεια να θέσει μια τέτοια διάγνωση.

Ηπατίτιδα Αντι HCV-σύνολο (polozhitelny) Δώστε συμβουλές παρακαλώ!

Η σύζυγός μου και εγώ υποβλήθηκε σε μια δοκιμή, οι δοκιμές έδειξαν έναν ιό ηπατίτιδας. Έχω συνολικά θετικά αντι-HCV. Τα υπόλοιπα είναι αρνητικά. Στη γυναίκα επίσης. Πόσο επικίνδυνο είναι πόσο χρονικό διάστημα αντιμετωπίζεται; Πόσο κοστίζει; Και τι γίνεται με την εργασία, είναι δυνατόν να εργαστείτε κατά τη διάρκεια της περιόδου θεραπείας; Αισθάνομαι υπέροχα!

R να

Anti-HCV που υπάρχουν σε οξεία (μπορούν να ανιχνευθούν νωρίς όσο 4 - 6 εβδομάδες μετά την μόλυνση), και χρόνιας ηπατίτιδας. Το σύνολο των αντι-HCV εμφανίζεται επίσης σε εκείνους που είχαν ηπατίτιδα C και ανακτήθηκαν ανεξάρτητα. Σε αυτούς τους ανθρώπους, αυτός ο δείκτης μπορεί να ανιχνευθεί εντός 4 έως 8 ετών ή περισσότερο μετά την αποκατάσταση. Ως εκ τούτου, μια θετική δοκιμασία για αντι-HCV δεν επαρκεί για την καθιέρωση μιας διάγνωσης. Στο βάθος της χρόνιας λοίμωξης οι συνολικές αντισώματα ανιχνεύονται συνεχώς, και μετά από επιτυχή θεραπεία αποθηκευτεί για μεγάλο χρονικό διάστημα (κυρίως λόγω πυρήνα IgG αντι-ΗΟν, που γράφτηκε γι 'αυτούς παρακάτω), και οι τίτλοι τους σταδιακά μειώνεται.

Ekaterina Gustova

Η ηπατίτιδα C μεταδίδεται μέσω του αίματος και των σωματικών υγρών παρεντερικά, σεξουαλική και διαπλακούντια τρόπους. ομάδα υψηλού κινδύνου αποτελείται από ανθρώπους που έχουν μία ενδοφλέβια τοξικομανία, ασυδοσία, καθώς και επαγγελματίες υγείας, ασθενείς που χρειάζονται αιμοκάθαρση ή αίμα μεταγγίσεις συναφθεί. Διαπερνώντας μέσα στο σώμα, HCV εισέρχεται στους μακροφάγους του αίματος και τα ηπατοκύτταρα του ήπατος, όπου αντιγράφεται. ηπατική βλάβη συμβαίνει κυρίως λόγω του ιού ανοσολογικής λύση έχει επίσης άμεση κυτοπαθολογικό αποτέλεσμα. Ομοιότητα αντιγόνου του ιού με αντιγόνα του ανθρώπινου συστήματος ιστοσυμβατότητας προκαλεί αυτοάνοση ( «σύστημα») αντιδράσεις. Το πρόγραμμα HCV-λοίμωξη μπορεί να συμβεί εκδηλώσεις της συστημικής αυτοάνοσης θυρεοειδίτιδας, σύνδρομο Sjögren, ιδιοπαθής θρομβοπενική πορφύρα, η σπειραματονεφρίτιδα, η ρευματοειδής αρθρίτιδα και άλλα. Σε σύγκριση με άλλα ιογενή ηπατίτιδα, ηπατίτιδα C έχει μια λιγότερο φωτεινή κλινική εικόνα συχνά γίνεται χρόνια. Στο 20 - 50% των περιπτώσεων χρόνιας ηπατίτιδας C έχει σαν αποτέλεσμα την ανάπτυξη της κίρρωσης του ήπατος και 1,25 - 2,50% - στην ανάπτυξη ηπατοκυτταρικού καρκινώματος. Με υψηλή συχνότητα υπάρχουν αυτοάνοσες επιπλοκές.
Θέλω να σας ενοχλήσω! Η ηπατίτιδα C δεν είναι θεραπευτική καθώς και η λοίμωξη HIV! Μπορείτε να ζήσετε μαζί του για χρόνια! Ωστόσο, η κίρρωση του ήπατος μπορεί να συμβεί αργά ή γρήγορα. Παρακολουθώντας με τους οποίους εργάζεστε. Το εάν η διάγνωσή σας θα επηρεάσει τη δουλειά είναι άγνωστη. Αλλά είναι καλύτερο για τους συναδέλφους σας να μην πω αυτή τη διάγνωση

Κωστάρεφ Κωνσταντίν

Αξίζει να σημειωθεί ότι μόνο το 20% περίπου των ανθρώπων που έχουν μολυνθεί κάποτε από ηπατίτιδα C είναι σε θέση να αντιμετωπίσουν την ίδια τη μόλυνση. Επομένως, δυστυχώς, στις περισσότερες περιπτώσεις, η παρουσία αντισωμάτων σε HCV υποδεικνύει χρόνια ιική ηπατίτιδα C (CVHC).

Όλγα

Σε όλα τα παραπάνω, προσθέτω ότι μετά την ανίχνευση αντισωμάτων, είναι απαραίτητο να περάσει μια ανάλυση για την παρουσία του ιού στο αίμα. Αυτή η ανάλυση ονομάζεται HCV RNA με τη μέθοδο PCR, εάν είναι θετική, τότε είναι απαραίτητο να γίνει γονοτυποποίηση, δηλ. Να αποκαλυφθεί ο γονότυπος του ιού (ο χρόνος και το κόστος της θεραπείας εξαρτώνται από αυτό). Αν είναι αρνητικό, λοιπόν, ίσως έχετε γίνει ένα από το 15-20% των τυχερών που είχαν αυτοθεραπεία. Αλλά σε αυτή την περίπτωση, θα πρέπει να παρακολουθείτε την κατάσταση και τουλάχιστον μία φορά το χρόνο θα πρέπει να κάνετε την ανάλυση PCR.
Εάν εξακολουθεί να υπάρχει ηπατίτιδα, τότε δεν πρέπει να σας ενοχλούν. Αντιμετωπίζεται επιτυχώς. Η θεραπεία είναι δύσκολη, αλλά μπορείτε να εργαστείτε αν η εργασία δεν είναι μεταξύ των επικίνδυνων, απαιτώντας ειδική συγκέντρωση. Στο διάστημα, δεν αξίζει να πετάξει)))

Ένα σύνολο αντιδραστηρίων για ανοσοπροσροφητική ανίχνευση ανοσοσφαιρινών κατηγορίας G και Μ σε μεμονωμένες πρωτεΐνες του ιού της ηπατίτιδας C (πυρήνας, NS3, NS4, NS5) (Καλύτερο αντι-ΗΟν φάσμα)

Αποθήκευση Συνθήκες Σετ αντιδραστηρίων για την immunoenzyme προσδιορίσει κατηγορίες ανοσοσφαιρινών G και M πρωτεϊνών σε μεμονωμένα HCV (πυρήνα, NS3, NS4, NS5) (Best φάσματος αντι-HCV)

Να φυλάσσεται μακριά από παιδιά.

Παραγγείλετε ιατρικά προϊόντα στα φαρμακεία:

Αφήστε το σχόλιό σας

  • Κιτ πρώτων βοηθειών
  • Ηλεκτρονικό κατάστημα
  • Σχετικά με εμάς
  • Επικοινωνήστε μαζί μας
  • Επαφές του εκδοτικού οίκου:
  • +7 (495) 258-97-03
  • +7 (495) 258-97-06
  • Ηλεκτρονικό ταχυδρομείο: [email protected]
  • Διεύθυνση: Ρωσία, 123007, Μόσχα, ul. 5 η Μαγίστραναγιά, 12.

Είμαστε σε κοινωνικά δίκτυα:

© 2000-2018. ΕΓΓΡΑΦΗ ΦΑΡΜΑΚΕΥΤΙΚΩΝ ΠΡΟΪΟΝΤΩΝ ΤΗΣ ΡΩΣΙΑΣ ® RLS ®

Όλα τα δικαιώματα διατηρούνται.

Η εμπορική χρήση των υλικών δεν επιτρέπεται

Οι πληροφορίες απευθύνονται στους επαγγελματίες υγείας

Εργαστηριακή διάγνωση ηπατίτιδας C

MI Mikhailov, Ινστιτούτο Επιδημιολογίας και Μικροβιολογίας. NF Gamalei RAMS, Μόσχα

Όταν δηλώνεται η διάγνωση της «ηπατίτιδας C», πρέπει να λαμβάνονται υπόψη οι ακόλουθοι πιο σημαντικοί παράγοντες:

  • δείκτες δραστηριότητας των "ηπατικών" ενζύμων.
  • παρουσία ή απουσία σημείων μόλυνσης με ιό ηπατίτιδας C (HCV) και άλλους ηπατοτροπικούς ιούς ·
  • επιδημιολογική ιστορία ·
  • αποτελέσματα κλινικής εξέτασης του ασθενούς. Μόνο ένας πλήρης απολογισμός αυτών των παραγόντων καθιστά δυνατή τη διάγνωση αυτής της νόσου με υψηλό βαθμό αξιοπιστίας. Εργαστήριο εργαζόμενος πρέπει να παρέχουν αντικειμενικές πληροφορίες σχετικά με τον προσδιορισμό του φάσματος των ιικών αντιγόνων και αντισωμάτων, καθώς και HCV RNA, επιτρέποντας τον κλινικό γιατρό, έναν υπάλληλο των υπηρεσιών μετάγγισης αίματος και επιδημιολόγους να αποφασίσει τις προκλήσεις που αντιμετωπίζουν. Τις περισσότερες φορές είναι:
  • Αναγνώριση ατόμων με HCV για τη μείωση της ηπατίτιδας C μετά τη μετάγγιση.
  • τη διάγνωση και τη διαφοροποίηση της οξείας και της χρόνιας ηπατίτιδας C ·
  • Πρόγνωση ασθενειών.
  • διορισμό, αξιολόγηση και πρόγνωση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας.
  • να μελετήσετε το γεωγραφικό πλάτος του HCV στον πληθυσμό και στις διάφορες ομάδες πληθυσμού.
    Ταυτόχρονα, οι βασικοί τομείς εργασίας του εργαστηριακού προσωπικού είναι:
  • ανάπτυξη και επιλογή των πιο ενημερωτικών μεθόδων ανίχνευσης σημείων μόλυνσης από τον ιό HCV.
  • τον καθορισμό κριτηρίων για την αντικειμενική αξιολόγηση των επιτευχθέντων αποτελεσμάτων ·
  • ανάπτυξη βέλτιστων αλγορίθμων για τη διενέργεια εργαστηριακών μελετών.
  • εισαγωγή ενός συστήματος για τη βελτίωση της ανίχνευσης των δεικτών μόλυνσης από HCV.

    Η βάση της εργαστηριακή διάγνωση της ηπατίτιδας C. HCV χρησιμεύουν γνώσεις σχετικά με την αντιγραφή του, πληροφορίες σχετικά με τη δυναμική της εμφάνιση και εξαφάνιση των δεικτών μολύνσεως, καθώς και σύγχρονες ανοσοχημική και μοριακές βιολογικές μέθοδοι για την ανίχνευση των αντιγόνων, αντισωμάτων και νουκλεϊκά οξέα.

    ΒΙΟΣΥΣΤΗΤΗΣ Γ. HCV εντοπίστηκε για πρώτη φορά το 1988, όταν μια ομάδα ερευνητών με επικεφαλής τον Μ Houghton και Choo Q.L, εφαρμόζοντας νέα έρευνα molekulyarnobiologicheskie μεθόδους, και να κλωνοποιηθεί το γονιδίωμα του ιού sekvinirovala [Ι]. Ένα σωματίδιο του ιού της ηπατίτιδας C έχει σφαιρικό σχήμα με μέση διάμετρο περίπου 50 nm [2,3]. Προσπάθειες για την οπτική ανίχνευση και μελέτη της δομής του ιού της ηπατίτιδας C έχουν αναληφθεί από την ανακάλυψη του ιού, αλλά μέχρι στιγμής δεν υπάρχουν καλά-τεκμηριωμένα αποτελέσματα αυτών των μελετών, πιθανώς λόγω των δυσκολιών της συσσώρευσης των ιικών σωματιδίων στις απαιτούμενες ποσότητες.

    VGSedinstvenny μέλος του γένους Hepacivirus στην οικογένεια Flaviviridae, η οποία περιλαμβάνει τους ιούς όπως ο ταύρων ιό διάρροιας και του πυρετού των χοίρων (γένος Pestivirus) και τον ιό του κίτρινου πυρετού, τον ιό Dang και GB-ιού: GBV-A, GBV-Β και GBV-C / HGV (το γένος Flavivi-rus). Η δομή του ιού της ηπατίτιδας C μπορεί να παρασταθεί ως εξής (Σχήμα Νο. 1). Το πυρηνοκαψίδιο περιλαμβάνει το RNA της ηπατίτιδας C κορυφή πυρηνοκαψιδίου ιού επικαλύπτεται με ένα περίβλημα λιπιδίου σε εσοχή εντός αυτού πρωτεΐνες καλύμματος που κωδικοποιούνται από το HCV RNA. Το γονιδίωμα του ιού περιέχει το γραμμικό μόριο μονόκλωνου RNA θετικής πολικότητας, ένα μήκος περίπου 9600 νουκλεοτιδίων. Η οργάνωση του HCV γονιδιώματος είναι παρόμοια με άλλους φλαβινοϊούς. Διακρίνει δύο ζώνες που κωδικοποιούν δομικές και μη δομικές (λειτουργικές) πρωτεΐνες. Τα γονίδια που κωδικοποιούν τις δομικές πρωτεΐνες εντοπίζονται στην περιοχή 5 'του γονιδιώματος του ιού και μη δομικά στην περιοχή 3'. Το γονίδιο του HCV έχει ένα μοναδικό ανοικτό πλαίσιο ανάγνωσης (ORF), ένα μονό πολυπεπτίδιο (περίπου 3000 αμινοξέα), η οποία υπό την επίδραση των κυτταρικών και ιικών πρωτεασών κόβεται σε δομικές και μη δομικές πρωτεΐνες.

    Το Σχ. 1. Δομικά στοιχεία του HCV

    Δομικές πρωτεΐνες περιλαμβάνουν πρωτεΐνες που κωδικοποιούνται από πυρήνα, ΕΙ και Ε2 με ζώνες RNA HCV. Είναι αποκάλυψε τρεις μορφές C-HCV πρωτεϊνών: πλήρους μήκους (ρ21) του μοριακού βάρους - 21 kD, κολοβωμένη (ρ19) και η μορφή (ρ16) ανιχνεύθηκε στο πυρηνίσκους των μολυσμένων ηπατοκυττάρων. Στην επιφάνειά της, η C-πρωτεΐνη φέρει διάφορα επίτοπο εξαιρετικά διατηρημένη Β-κυττάρων, η ύπαρξη των οποίων είναι εξαιρετικά σημαντική για την ανίχνευση αντισωμάτων στον HCV σε την εργαστηριακή διάγνωση της ηπατίτιδας C.

    Οι περιοχές RNA των HCV-Ε1 και Ε2 κωδικοποιούν πρωτεΐνες με μοριακό βάρος 31 και 70 kD. Αυτές οι πρωτεΐνες έχουν αρκετές θέσεις Ν-γλυκοσυλίωσης. Στην πρωτεΐνη Ε1 ταυτοποιήθηκαν έως και 6 τέτοιες θέσεις και στην Ε2-11. Πληροφορίες σχετικά με μια μικρή πρωτεΐνη, ρ7, βρέθηκαν στο τμήμα Ε2, το οποίο δεν βρέθηκε στη δομή του ιού.

    Ο χαρακτηρισμός περιοχών πλησιέστερων προς το 3'-άκρο του HCV RNA - ως ζώνες που φέρουν πληροφορίες για τις μη δομικές πρωτεΐνες του ιού - υποδηλώνει ότι αυτές οι πρωτεΐνες δεν είναι δομικά συστατικά του ιικού σωματιδίου. Στη μη δομική ζώνη, το HCV RNA έχει κατανεμηθεί θέσεις που ορίζονται ως: NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A και NS5B. Οι περισσότερες από τις πρωτεΐνες που κωδικοποιούνται από μη δομικές ζώνες του HCV RNA είναι απαραίτητες για την αντιγραφή του ιού.

    Συγκριτική ανάλυση των νουκλεοτιδικών αλληλουχιών των απομονώσεων του HCV RNA που παράγεται στις διάφορες περιοχές του κόσμου, και ακόμη και κατά τη διάρκεια της νόσου από τον ίδιο ασθενή έδειξε ένα βασικό χαρακτηριστικό του ιού - υψηλή ετερογένεια RNA. Η θέση του μεγάλου γενετικής μεταβλητότητας του HCV RNA ήταν η βάση των θεωριών να εξηγήσουν: μακροχρόνια (μερικές φορές δια βίου) φορέας του ιού, συχνή ανάπτυξη της χρόνιας νόσου, δυσκολίες στην ίδρυση αποτελεσματική θεραπεία και εμβόλια. Οι σημαντικότερες διαφορές στις αλληλουχίες RNA του HCV συγκεντρώνονται στο Ν-τερματικό τμήμα της περιοχής Ε2, το οποίο αναφέρεται ως "υπερμεταβλητή περιοχή" (HVR) [4].

    Επί του παρόντος, υπάρχουν 6 κύριοι γονότυποι και πάνω από 100 υποτύποι του HCV. Γονότυπους 1α, 1β, 2α, 2β, 2γ και Πάνω αντιπροσωπεύουν περισσότερο από το 90% με HCV απομονώσεις που ελήφθησαν στη Βόρεια και Νότια Αμερική, την Ευρώπη, τη Ρωσία, την Κίνα, την Ιαπωνία και την Αυστραλία / Νέα Ζηλανδία [5]. Οι γονότυποι 4, 5α και 6, αντίστοιχα, καταγράφονται στην Κεντρική και Νότια Αφρική, στη Νοτιοανατολική Ασία. Στη Ρωσία και στις χώρες της ΚΑΚ σημειώθηκε η επικράτηση του γονότυπου 16 (όχι λιγότερο από 68,9%) [6,7]. Πιστεύεται ότι οι ασθενείς που έχουν μολυνθεί με γονότυπο 1 (ειδικά 1c) ανταποκρίνονται χειρότερα στη θεραπεία σε σύγκριση με ασθενείς που έχουν μολυνθεί με άλλους γονότυπους του ιού.

    HCV ασθενή κυκλοφορεί ως ένα πληθυσμό σωματιδίων ιού, των οποίων τα γονιδιώματα διαφέρουν μεταξύ τους κατά 1-2% (kvazispetsifichnosti) ως αποτέλεσμα μεταλλάξεων που συσσωρεύονται κατά τη διάρκεια της μόλυνσης ή / και να γίνει σε ασθενή κατά την διάρκεια μόλυνσης. Αυτές οι μεταλλαγμένες μορφές μπορούν να παρέχουν ισχυρότερη ή αντιγραφής μπορεί να βοηθήσει τον ιό, προκειμένου να αποφύγει την ανοσοαπόκριση και δυνητικά επηρεάζουν την έκβαση μιας οξείας λοίμωξης, οι διαφορές στην πορεία της ασθένειας και η απόκριση στην IFN [8].

    ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΤΟΥ ΑΝΤΙ-HCV. Μετά την ανακάλυψη του ιού HCV και καθορίζουν τον ρόλο της στην ανάπτυξη της μετα-μετάγγισης της ηπατίτιδας - «ούτε Α ούτε το Β» οι ερευνητές προκλήθηκαν για την ανάπτυξη μεθόδων ικανό να ανιχνεύσει εκείνους με HCV και είναι κατάλληλες για την διάγνωση της οξείας και χρόνιας ηπατίτιδας C. Έχει βρεθεί ότι τα αντιγόνα HCV κυκλοφορούν στην εξαιρετικά χαμηλές συγκεντρώσεις, και είναι σαφές ότι η μεθοδολογική επίπεδο του τέλους της δεκαετίας του 80-ες του ΧΧ αιώνα, χρησιμοποιείται για την ανίχνευση ιικών αντιγόνων υπήρξε σαφώς ανεπαρκής.

    Το 1989, μια ομάδα ερευνητών της εταιρείας «Chiron Corporation» υπό τη διεύθυνση του Q-L.Choo πραγματοποίησε την κλωνοποίηση των HCV RNA και ήταν ανοσοαντιδραστική ολιγοπεπτίδια τα οποία αντιδρούν με αντισώματα που κυκλοφορούν στο αίμα των ασθενών με χρόνια ηπατίτιδα «ούτε Α ούτε Β». Αυτά τα ολιγοπεπτίδια έγιναν η βάση των διαγνωστικών φαρμάκων για την ανίχνευση αντισωμάτων έναντι του HCV. Αυτό οδήγησε σε ταχεία πρόοδο στην ανάπτυξη και παραγωγή διαγνωστικών προϊόντων. Η κύρια μέθοδος που χρησιμοποιείται για την ανίχνευση των αντι-ΗΟν ήταν το ένζυμο-συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία ως μέθοδο που πληροί τις απαιτήσεις της πρακτικής-Te υγείας Υψηλή ευαισθησία, ειδικότητα και ευκολία συμπεριφοράς.

    Δεδομένου ότι ο HCV επιμένει στο αίμα των ασθενών με οξεία και χρόνια ηπατίτιδα C σε συνδυασμό με αντι-ΗΟν διαγνωστικών προϊόντων εστιάζουν προγραμματιστές επικεντρώθηκαν στην δημιουργία των συστημάτων δοκιμής για την ανίχνευση αντισωμάτων, παρέχει την πληρέστερη δυνατή ταυτοποίηση φορέων του ιού, και όσο το δυνατόν νωρίτερα διάγνωση της οξείας λοίμωξης. Η ποικιλία των αντιγόνων και των αντιγονικών καθοριστικών παραγόντων που κωδικοποιείται από το δομικές και μη δομικές ζώνη HCV RNA, η κατεύθυνση που καθορίζεται στο σχεδιασμό των διαγνωστικών παρασκευασμάτων για αυτή τη διάταξη και ολιγοπεπτίδια που χρησιμοποιούνται για τη δημιουργία τους. Από την στιγμή της ανακάλυψης του HCV, έχουν δημιουργηθεί διαγνωστικά συστήματα τριών γενεών (Πίνακας 1).

    Πίνακας 1
    Διαγνωστικά φάρμακα για την ανίχνευση αντι-HCV [9]

    Τα πεπτίδια που χρησιμοποιήθηκαν,
    ζώνες του HCV RNA στο οποίο
    κωδικοποιούνται

    % ανίχνευση μεταφορέων
    HCV

    Ώρα της πρώτης
    εντοπίστε
    αντι-HCV από
    πρώιμος ίκτερος

    5-1-1 NS3
    C100-3 NS4

    C22-3 Core
    C200 NS3 και NS4
    NS3p NS3
    C 100-3 NS4

    C22-3 Core
    C200 NS3 και NS4
    NS3p NS3
    Πεπτίδιο NS5

    Η εισαγωγή πρόσθετων πεπτιδίων, ειδικά s22-3 (Πυρήνας), σε διαγνωστικές παρασκευάσματα της 2ης και 3ης γενιάς αφέθηκε να λύσει το κύριο πρόβλημα, δηλαδή, για να αυξηθεί η ευαισθησία, ειδικότητα, και, το σημαντικότερο, την ανίχνευση των αντι-HCV. Χάρη στις διαγνωστικές καμπύλες της τρίτης γενιάς, είναι δυνατό να ανιχνευθεί έως και 97% των φορέων HCV. Ταυτόχρονα, μια οριστική συζήτηση προκλήθηκε από την εισαγωγή ενός πεπτιδίου που κωδικοποιείται από την NS5 περιοχή HCV RNA σε ένα διαγνωστικό. Σύμφωνα με ορισμένους ερευνητές, η παρουσία αυτού του πεπτιδίου δεν έχει θεμελιώδη σημασία για τη βελτίωση της ποιότητας του διαγνωστικού φαρμάκου. [10,11]. Ωστόσο, τα αντισώματα έναντι του NS5 μπορούν να ανιχνευθούν σε παλαιότερο χρόνο μόλυνσης, γεγονός που βελτιώνει την ποιότητα της εργαστηριακής διάγνωσης της οξείας ηπατίτιδας C. [12].

    Προς το παρόν, τα διαγνωστικά παρασκευάσματα της τρίτης γενιάς χρησιμοποιούνται σε ολόκληρο τον κόσμο, συμπεριλαμβανομένης της Ρωσίας. Πεπτίδια που χρησιμοποιούνται σε διαγνωστικές παρασκευάσματα που λαμβάνονται με τεχνολογία ανασυνδυασμού (π.χ., διαγνωστικό εταιρείες: «Διαγνωστικές ουσίες», Nizhny Novgorod? «Φορέας», Novosibirsk? «Roche»? «Abbott» et αϊ.), Ή συνθετικά ( 000 MC "Avicenna", Αγία Πετρούπολη, "Organon", κλπ.). Τα διαγνωστικά, στα οποία χρησιμοποιήθηκαν ταυτόχρονα και οι δύο τύποι πεπτιδίων, έλαβαν ονομασίες ως παρασκευάσματα της 4ης γενιάς. Με τα χαρακτηριστικά τους, αυτά τα φάρμακα δεν έχουν σημαντικές διαφορές. Οι συγκριτικές δοκιμές, που διεξάγονται τακτικά από το Υπουργείο Υγείας της Ρωσίας, κατέδειξαν συγκρίσιμη ευαισθησία στα διαγνωστικά παρασκευάσματα εγχώριων και ξένων κατασκευαστών.

    Διαπιστώθηκε ότι η χρήση διαγνωστικών φαρμάκων της τρίτης γενεάς για την ανίχνευση αντι-HCV μεταξύ ανοσοκατασταλτικών πληθυσμών (για παράδειγμα, αιμοδότες) υπολογίζεται σε 98,8-100%. Ταυτόχρονα, μεταξύ των ατόμων με ανοσοκαταστολή, όπως για παράδειγμα ασθενών μετά από μεταμόσχευση νεφρού, μυελού των οστών ή ατόμων που έχουν μολυνθεί με τον ιό HIV, ο αριθμός αυτός είναι σημαντικά χαμηλότερος - 50 έως 95% [12]. S.George et αϊ. [13] κατέδειξαν ότι το 8,4% των ασθενών με HIV λοίμωξη έχει ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα ανίχνευσης αντι-HCV. Και σε τέτοιους ασθενείς κατά τη διάρκεια της παρατήρησης, μπορεί να καταγραφεί ένα φαινόμενο ορο-αναστροφής. καταχώριση θετικού αποτελέσματος μετά την περίοδο οροαρνητικής αντι-HCV [14].

    Ένα από τα σημαντικότερα προβλήματα στη διεξαγωγή μελετών για την παρουσία αντι-HCV είναι ψευδώς θετικά αποτελέσματα. Η εμφάνισή τους μπορεί να οφείλεται στη μη ειδική αλληλεπίδραση των συστατικών της αντίδρασης, στις πιθανές διασταυρούμενες αντιδράσεις με άλλα ιικά αντιγόνα και σε πολλούς άλλους παράγοντες. Το επίπεδο ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων στην ανίχνευση αντι-HCV με διάφορα διαγνωστικά φάρμακα μπορεί να φθάσει το 10-20% [15,16]. Ένα αυξημένο επίπεδο τέτοιων αποτελεσμάτων παρατηρήθηκε σε ασθενείς με ογκολογικές και αυτοάνοσες ασθένειες, άτομα με καταστάσεις ανοσοανεπάρκειας και ασθενείς με σύφιλη [16,17]. Η ύπαρξη ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων έχει ως αποτέλεσμα το έργο του εργαστηριακού εργάτη να τα διακρίνει από την πραγματική ανίχνευση αντι-HCV. Για την επίλυση αυτού του προβλήματος, ο ορός ανιχνεύεται στον ορό αίματος του HCV RNA. Ωστόσο, το αρνητικό αποτέλεσμα της ανίχνευσης του HCV RNA δεν επιτρέπει να μιλήσουμε για την παρουσία ψευδώς θετικής ανίχνευσης αντι-HCV. Θα πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι το αντι-HCV μπορεί να κυκλοφορεί με μεμονωμένο τρόπο στο αίμα ενός ασθενή που έχει ανανήψει από οξεία ηπατίτιδα C (10-15%) ή που έχει εξαλείψει το HCV RNA ως αποτέλεσμα της συνεχιζόμενης θεραπείας.

    ΕΠΙΒΕΒΑΙΩΣΗ (ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΕΣ) ΔΟΚΙΜΕΣ. Για να διαφοροποιηθούν τα ψευδώς θετικά δείγματα και τα δείγματα που περιέχουν πραγματικά αντισώματα στο HCV, έχουν αναπτυχθεί πρόσθετες (συμπληρωματικές) δοκιμές. Η πιο συχνά χρησιμοποιείται σε αυτές τις δοκιμές ανοσοστυπώματος αρχή [π.χ. - δοκιμή RIBA ( «Ortho-Clinical Diagnostics»)? «LiaTek HCV» (Organon Teknika)], όταν προσροφάται επί μιας μεμβράνης νιτροκυτταρίνης με τη μορφή μεμονωμένων λωρίδων αντιγόνα που κωδικοποιούνται από τις διάφορες ζώνες του HCV RNA. Anti-HCV αλληλεπιδρούν με αντιγόνα προσροφημένα χρησιμοποιώντας το ένζυμο-επισημασμένο αντίσωμα έναντι του ανθρώπινου Ig G με επακόλουθη ανίχνευση τους χρησιμοποιώντας σύμπλοκο υποστρώματος. Σε ανοσοκηλίδος Επιπλέον, καθώς και πρόσθετες δοκιμές χρησιμοποιούν διαγνωστικούς παράγοντες για την ανίχνευση των αντι-HCV έναντι ειδικών αντιγόνων που κωδικοποιούνται από τις διάφορες ζώνες του HCV RNA [ «Spectrum 4» ( «ImBio» Νίζνι Νόβγκοροντ? RecombiBest ANTI-HCV-SPECTRUM «- ZAO» Vector Best "Νοβοσιμπίρσκ? IFA- αντι-ΕΣΥ-Spektr, NPO" Διαγνωστικά συστήματα», Νίζνι Νόβγκοροντ].

    Σχεδιασμός και εφαρμογή των δοκιμών αυτών είναι παράλληλα με την εισαγωγή των δοκιμών διαλογής για αντι-ΗΟν, επαναλαμβάνοντας την αρχή της επέκτασης του φάσματος των πεπτιδίων που χρησιμοποιούνται σε κάθε διαδοχική δημιουργία διαγνωστικών παραγόντων. Έτσι, diagnosticum RIBA-III διαφέρει από την προηγούμενη γενιά με την προσθήκη ενός πεπτίδιο που κωδικοποιείται περιοχή NS5. Αρχές για να επιβεβαιώσει τα θετικά αποτελέσματα της ανίχνευσης των αντι-ΗΟν κυρίως περιλαμβάνουν: τη δυνατότητα (σε ορισμένες περιπτώσεις) πιο ακριβή αποτελέσματα της ενζυματικής αντίδρασης με αντίδραση με μεμονωμένα πεπτίδια καθώς επίσης χρήση σε μια εκτεταμένου φάσματος πεπτίδια DIAGNOSTICUM που δεν χρησιμοποιούνται σε δοκιμασίες διαλογής. Μόνο η εισαγωγή νέων πεπτιδίων επιτρέπει την αύξηση της διαγνωστικής αξίας επιβεβαιωτικών εξετάσεων.

    Η ερμηνεία των αποτελεσμάτων που προκύπτουν, για παράδειγμα, σε μια τέτοια δοκιμασία όπως η RIBA-III, περιλαμβάνει τρεις πιθανές απαντήσεις: ένα θετικό, αρνητικό και αόριστο αποτέλεσμα. Η τελευταία από αυτές δίδεται υπό την απουσία σαφών ενδείξεων (σύμφωνα με τις οδηγίες που παρέχονται με το διαγνωστικό κιτ), επιτρέποντας σε κάποιον να πει κάτι σχετικά με την παρουσία ή απουσία των αντι-ΗΟν στο δοκιμαστικό δείγμα. Η συσχέτιση του φάσματος των καταγεγραμμένων απαντήσεων κατά τη διάρκεια των επιβεβαιωτικών εξετάσεων ποικίλλει ανάλογα με τα χαρακτηριστικά των ομάδων ασθενών στους οποίους εντοπίζονται κατά κύριο λόγο αντι-HCV [18]. Σύμφωνα με τον J.M. Pawlotsky et αϊ. [19], στις μισές περιπτώσεις των αποτελεσμάτων, που ερμηνεύονται ως "αόριστες", μπορεί να ανιχνευθεί HCV RNA. Κατά τη γνώμη μας, η νομιμότητα της απάντησης - «απροσδιόριστο ανίχνευσης αποτέλεσμα της αντι-HCV», που εκδίδεται από τον κλινικό προσωπικό εργαστηρίου, εμφανής όχι μόνο με την επιβεβαιωτική δοκιμή, και εξετάσεις ρουτίνας για την παρουσία αντι-HCV. Η αναγκαιότητα μιας τέτοιας ερμηνείας των ληφθέντων αποτελεσμάτων είναι μια αντανάκλαση της τρέχουσας κατάστασης της εργαστηριακής διάγνωσης της ηπατίτιδας C.

    ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΤΟΥ IgM ANTI-HCV. Επί του παρόντος έχουν δημιουργηθεί και κατασκευάζονται διαγνωστικά κιτ για την ανίχνευση IgM αντι-HCV από τις εταιρείες: "Vector Best". "Διαγνωστικά συστήματα". "Imbio", "Abbott", κλπ. Κατά το στάδιο σχεδιασμού των διαγνωστικών κιτ αναπτύχθηκαν κιτ ELISA, με βάση πεπτίδια που κωδικοποιούνται από διαφορετικές περιοχές του HCV RNA [20]. Η επιλογή διακόπτεται στο πεπτίδιο που κωδικοποιείται από την περιοχή πυρήνα του HCV RNA και την ανίχνευση αντισωμάτων IgM σε αυτό. Όπως και με τις δοκιμές για την ανίχνευση αντι-HCV (IgG), ψευδώς θετικά αποτελέσματα μπορούν να καταγραφούν στη μελέτη IgM αντι-HCV. Σύμφωνα με τον Stevensona D.L. με et al. [21], μέχρι 70% των ασθενών με χρόνια ηπατίτιδα C με ταυτόχρονη παρουσία IgM αντι-HCV παρουσίασε αυξημένο επίπεδο ρευματοειδούς παράγοντα, γεγονός που συμβάλλει στην εμφάνιση ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων. Ταυτόχρονα, σύμφωνα με τον Pawlotsky J.M., η παρουσία του ρευματοειδούς παράγοντα δεν επηρεάζει την ποιότητα της ανίχνευσης IgM αντι-ΗΟν [22].

    ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΤΩΝ ΑΝΤΙΓΟΝΩΝ ΤΟΥ HCV. Η πιθανότητα προσδιορισμού των αντιγόνων HCV προσέλκυσε την προσοχή των ερευνητών αμέσως μετά την ανακάλυψη του ιού. Η θεωρητική δυνατότητα δοκιμή τους έχει καταδειχθεί Krawczynski Κ et al [23] βρήκαν ότι ανοσοϊστοχημεία σε ιστό ήπατος των αντιγόνων HCV, που δεικνύει την εξειδίκευση του ανοσοφθορισμού λάμψη. Η χρήση των πολυ- και μονοκλωνικών αντισωμάτων σε διάφορες HCV αντιγόνων απέδειξε την παρουσία πυρήνα HCV Ag, αντιγόνα που κωδικοποιούνται NS3 και NS4 ζώνες HCV RNA στον πυρήνα και το κυτταρόπλασμα των ηπατοκυττάρων, σε 60-90% των ασθενών με χρόνια HS [24].Ωστόσο, περαιτέρω μελέτες έχουν δείξει ότι αντιγόνα HCV μπορούν να ανιχνευθούν σε λιγότερο από 5% των ηπατικών κυττάρων.

    Τα πρώτα διαγνωστικά συστήματα δοκιμής ( «Ortho Αντίσωμα σε αντιγόνο πυρήνα (μυϊκό μονοκλωνικό) Σύστημα δοκιμής EL1SA» και «Imucheck F-HCV Ag Πυρήνα Kokusai») για την ανίχνευση του HCV αντιγόνου εμφανίστηκαν στην αγορά ανοσολογικών προϊόντων το 1999. Καθώς ένας στόχος εξελέγη Πυρήνα ανίχνευση αντιγόνου HCV, που καθορίζεται από πραγματοποίηση ELISA στερεάς φάσης κατασκευάστηκε με βάση μονοκλωνικά αντισώματα. Οι πρώτες μελέτες για την εφαρμογή αυτών των δοκιμών έχουν προσδιορίσει την υψηλή ευαισθησία τους, ειδικότητα, και πολλά υποσχόμενες εφαρμογές, κυρίως στην υπηρεσία μετάγγισης αίματος [25,26]. Εγκατεστημένο:

  • τη δυνατότητα προσδιορισμού του πυρήνα Ag HCV στον ορό ή στο πλάσμα,
  • εξειδίκευση της ανίχνευσης του Core Ag HCV,
  • παρουσία ατόμων με κυκλοφορούν αντιγόνο σε αίμα οροαρνητικό για αντι-HCV,
  • συχνή (90,3%) ανίχνευση του HCV Core Ag σε ορό αίματος με την παρουσία αντι-HCV και HCV RNA [25].
  • μια άμεση συσχέτιση μεταξύ της συγκέντρωσης HCV RNA και της ανίχνευσης του HCV Core Ag [25].
  • μειώνοντας τη φάση του "παραθύρου" - από τη στιγμή της μόλυνσης έως το πρώτο θετικό αποτέλεσμα της ανίχνευσης αντι-HCV. Είναι προσδιορίστηκε ότι ο HCV Πυρήνας Ag δυνατό να προσδιοριστούν 83% των περιπτώσεων (η = 24) την επόμενη ημέρα μετά την πρώτη ανίχνευση του HCV RNA [26], και μακρύ (μέσος όρος 26 ημέρες) πριν από την εμφάνιση των αντι-HCV [27].

    ΜΕΘΟΔΟΙ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗΣ ΤΟΥ HCV RNA. Το σύγχρονο στάδιο της εργαστηριακής διάγνωσης της ηπατίτιδας C μπορεί να χαρακτηριστεί ως ένα στάδιο της έναρξης της ευρείας εφαρμογής των μοριακών βιολογικών μεθόδων για την ανίχνευση του HCV RNA. Η συντριπτική πλειονότητα των μεθόδων για την ανίχνευση νουκλεϊνικών οξέων έχουν ελεγχθεί για την ανίχνευση HCV RNA. Οι αρχές της κατασκευής διαγνωστικών παρασκευασμάτων και η χρήση τους για την ανίχνευση ιικού DNA ή RNA είναι αφιερωμένες σε ένα σημαντικό αριθμό βιβλιογραφικών ανασκοπήσεων δημοσιευμένων τόσο σε εγχώριες όσο και σε ξένες δημοσιεύσεις [29]. Όλες αυτές οι μέθοδοι μπορούν να χωριστούν σε δύο ομάδες, οι οποίες βασίζονται στην εφαρμογή των αρχών της υβριδοποίησης χωρίς ενίσχυση της επιλεγμένης περιοχής του νουκλεϊκού οξέος ή με την ενίσχυση αυτών, η οποία αυξάνει σημαντικά την ισχύ διαχωρισμού της μεθόδου.

    Μέθοδος υβριδισμού με βάση τον συνδυασμό επισημασμένων ανιχνευτών υβριδισμού (γενετικά τροποποιημένες ή συνθετικές μοριακές δομές που περιέχουν νουκλεοτιδικές αλληλουχίες συμπληρωματικές σε επιλεγμένες θέσεις RNA). Τα αποτελέσματα λαμβάνονται υπόψη από την ένταση του σήματος που προέρχεται από το σήμα στη σύνθεση του σχηματιζόμενου συμπλόκου.

    Στην ηπατίτιδα C, αυτή η μέθοδος ανίχνευσης του HCV RNA βρήκε κυρίως εφαρμογή για την ταυτοποίησή του απευθείας στα ηπατοκύτταρα, σε δοκιμές που χαρακτηρίστηκαν ως in situ υβριδοποίηση [30]. Η δυνατότητα άμεσης ανίχνευσης του HCV RNA στους ιστούς επέτρεψε την ανίχνευσή του στα μονοπύρηνα κύτταρα του αίματος, στα κύτταρα των σιελογόνων αδένων και σε άλλους ιστούς του ασθενούς με ηπατίτιδα C [31, 32].

    Η μέθοδος υβριδισμού που χρησιμοποιείται για την ανίχνευση του HCV RNA επιτρέπει να αποδειχθεί η παρουσία αρνητικών (αντιγραφικών) αλυσίδων του HCV RNA, γεγονός που υποδεικνύει την ενεργό αναδιπλασιασμό του ιού [33].

    Η μέθοδος αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης - που είναι σήμερα η πιο ευρέως χρησιμοποιούμενη μεθοδολογική μέθοδος, η οποία αποτελεί τη βάση σχεδόν όλων των μοριακών βιολογικών μεθόδων ανίχνευσης HCV RNA. Επιπλέον, ο προσδιορισμός του HCV RNA είναι δυνατός τόσο σε ποιοτική όσο και σε ποσοτική εκδοχή, η οποία είναι ιδιαίτερα σημαντική για το διορισμό, την παρακολούθηση και την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας που χρησιμοποιείται.

    Οι βασικές παραλλαγές της μεθόδου μπορούν να αναγνωριστούν ως εξής:

  • αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR).
  • αλυσιδωτή αντίδραση λιγάσης.
  • NASBA;
  • TMA (αντίδραση ενίσχυσης πολλαπλασιαστικού πολλαπλασιασμού, ενίσχυση με τη μεσολάβηση της μεταγραφής).

    Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης - χρησιμοποιούνται ευρέως τόσο στη Ρωσία όσο και στο εξωτερικό μέθοδο ανίχνευσης HCV RNA. Βασίζεται σε μια διαδικασία πολλαπλών κύκλων, που θυμίζει τη φυσική αντιγραφή του νουκλεϊνικού οξέος, όπου κάθε κύκλος αποτελείται από διαδοχικά στάδια.

    Από το υλικό που μελετήθηκε (ορός ή πλάσμα αίματος, ηπατική βιοψία), απελευθερώνεται HCV RNA. Δεδομένου ότι ο HCV νουκλεϊκό οξύ αντιπροσωπεύεται από RNA και για να ενισχυθεί ένα μόριο cDNA απαραίτητο, χρησιμοποιώντας ένζυμο - αντίστροφη μεταγραφάση, το σχηματισμό των μορίων μονόκλωνου του HCV cDNA. Στο επόμενο βήμα, ένα λεγόμενο "cDNA" προστίθεται σε ένα συγκεκριμένο τμήμα κάθε μιας από τις αλυσίδες του HCV cDNA. Εκκινητές - σύντομα ολιγονουκλεοτίδια, συμπληρωματικά προς τις γνωστές αλληλουχίες νουκλεοτιδίων. Σύγκριση της πρωτοταγούς δομής της περιοχής 5'UTR του γονιδιώματος των διαφόρων απομονώσεων του HCV που αποκάλυψαν μικρή μεταβλητότητα τους (μεταξύ των γονότυπων, ομολογία νουκλεοτιδίων - 92-98%, και 98-99% εντός γονότυπο). Αυτό έκανε προτιμότερο να επιλέγονται εκκινητές από αυτή τη ζώνη HCV RNA και η χρήση τους σε συστήματα διαγνωστικών δοκιμών που παράγονται στη χώρα μας και στο εξωτερικό.

    Στη συνέχεια, χρησιμοποιώντας το ϋΝΑ-εξαρτώμενη DNA πολυμεράση ένζυμο συντίθεται νέα τμήματα DNA. Επί του παρόντος, η πηγή αυτού του ενζύμου είναι πιο συχνά χρησιμοποιείται βακτηρίδια termus Thermophilus (Tth-πολυμεράση) ή η aquaticus Thermophilus (Taq-πολυμεράσης). Με θερμική σταθερότητα υπό την παρουσία ιόντων μαγγανίου και μαγνησίου, το ένζυμο μπορεί να χρησιμοποιηθεί ταυτόχρονα για τη σύνθεση συμπληρωματικών μορίων μονόκλωνου του HCV cDNA και την ενίσχυση επιλεγμένων τμημάτων cDNA. Στο τελικό στάδιο του ενός κύκλου της αντίδρασης με πολυμεράση DNA είναι μια σύνθεση των νέων cDNA HCV συμπληρωματικές αλυσίδες. Πολλαπλές επαναλήψεις του κύκλου αντίδρασης που οδηγεί στην συσσώρευση των θραυσμάτων cDNA του HCV, το οποίο μπορεί να καταχωρηθεί μέσω ηλεκτροφόρησης πηκτής πολυακρυλαμιδίου ακολουθούμενη από οπτική ανίχνευση, ή χρησιμοποιώντας ένα υβριδισμό με ολιγονουκλεοτιδικούς ανιχνευτές, η οποία αυξάνει την ευαισθησία και την εξειδίκευση των διαγνωστικών προϊόντων που χρησιμοποιούνται. Χρήση των εκκινητών σημαίνεται με ένζυμα, επιτρέπει τη διατήρηση των αποτελεσμάτων PCR χρησιμοποιώντας το ένζυμο ανοσοδοκιμασία.

    Ένας σταθερός στόχος για τους ερευνητές που σχεδιάζουν διαγνωστικά συστήματα για την ανίχνευση HCV RNA είναι η αύξηση της ευαισθησίας και της εξειδίκευσης. Ο σκοπός αυτός εξυπηρετείται από την παραλλαγή PCR, που ονομάζεται "ένθετη PCR" [34]. Ένα ξεχωριστό χαρακτηριστικό αυτής της μεθόδου από την "κλασική" είναι η ταυτόχρονη χρήση δύο ζευγών εκκινητών, εκ των οποίων το ένα συσχετίζεται συμπληρωματικά με την εσωτερική περιοχή του αμπλικονίου που λαμβάνεται μετά τον πρώτο γύρο ενίσχυσης. Ταυτόχρονα, πιστεύεται ότι αυτή η παραλλαγή της PCR έχει μεγαλύτερο κίνδυνο μόλυνσης των δειγμάτων, γεγονός που μπορεί να οδηγήσει σε ψευδώς θετικά αποτελέσματα [35].

    Οξεία ανάγκη να εντοπιστούν HCV RNA και οι δυσκολίες που συνδέονται με την παραγωγή μεγάλης κλίμακας των ιδιαίτερα ευαίσθητη και ειδική διαγνωστικά κιτ για τη διαγνωστική PCR που ταυτοποιείται ευρεία χρήση των προϊόντων που κατασκευάζονται σε εργαστήρια. Σύγκριση αυτών των πειραματικών συστημάτων, λεγόμενο - «home» δοκιμή ( «σε δοκιμές σπίτι»), έχει επιδείξει υψηλή μεταβλητότητα τους στην ευαισθησία και την ειδικότητα, καθώς και η έλλειψη αναπαραγωγιμότητας των αποτελεσμάτων μεταξύ εργαστηρίων και διαγνωστικών παρασκευασμάτων σειρά. Ετσι, είναι απολύτως σε θέση να προσδιορίσει σωστά την παρουσία ή απουσία του ιικού RNA σε δείγματα ελέγχου που παρέχονται κατά τη διάρκεια του πρώτου κύκλου της Ευρωπαϊκής αξιολόγησης ελέγχου «εξωτερική» ποιότητα του RNA του HCV (1996) 136 εργαστήρια μόνο 22 (16%) [36]. Ένα παρόμοιο αποτέλεσμα παρατηρήθηκε στη χώρα μας, κατά την ίδια λειτουργία στο πλαίσιο της Ομοσπονδιακής Ελέγχου Εξωτερικών Ποιότητας (2001), όταν οι 14 συμμετέχουσες εργαστήρια μόνο 3 (21,4%) ήταν σε θέση να λύσει σωστά το πρόβλημα. [37]

    Τα αίτια των ψευδώς αρνητικών και ψευδών θετικών αποτελεσμάτων της ανίχνευσης του HCV RNA είναι διάφορα. Με ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα:
    - απώλεια ή καταστροφή του HCV RNA σε προετοιμασία για την απόκριση κλινικού υλικού.
    - παρουσία στο δείγμα αναστολέων που επηρεάζουν διάφορα συστατικά της PCR. Αυτοί οι αναστολείς αντιπροσωπεύονται από διάφορες χημικές ή πρωτεϊνικές ουσίες. Για παράδειγμα: η παρουσία αναστολέων της ανάστροφης μεταγραφάσης στο υγρό σπέρματος δεν επέτρεψε την ανίχνευση του HCV RNA και μίλησε για τη δυνατότητα εφαρμογής της σεξουαλικής οδού της μετάδοσης ηπατίτιδας C [38]. η παρουσία ηπαπρίνης [39]. υψηλό επίπεδο κρυογλοβουλίνης στον ορό του αίματος [40].
    - μη συμμόρφωση με το θερμικό καθεστώς αποθήκευσης και μεταφοράς κλινικού υλικού. Με ψευδώς θετικά αποτελέσματα:
    - τη μόλυνση μεταξύ των δειγμάτων (κατά την επεξεργασία δειγμάτων ή / και την επεξεργασία με το μείγμα της αντίδρασης), συμπεριλαμβανομένης της μόλυνσης με δείγμα θετικού μάρτυρα,
    - μόλυνση από προϊόντα πριν από την ενίσχυση (amplicons) που μπορούν να μολύνουν τα δείγματα και τα διαλύματα δοκιμής μέσω αερολυμάτων ή εργαστηριακού εξοπλισμού.

    Η μαζική εισαγωγή της διάγνωσης PCR από τον ορισμό του RNA του HCV έχει τοποθετήσει τα όργανα της πρακτικής υγειονομικής περίθαλψης το καθήκον της μετάβασης σε ένα νέο επίπεδο διεξαγωγής εργαστηριακών μελετών. Απομόνωση απομονωμένων ζωνών για τα κύρια στάδια της PCR (για την προετοιμασία του δείγματος, την ενίσχυση, για να ληφθούν υπόψη τα αποτελέσματα). Ένα ξεχωριστό κιτ για κάθε στάδιο της αντίδρασης των εργαστηριακών ενδυμάτων, αυτόματες πιπέτες. η ύπαρξη τυποποιημένων διαγνωστικών κιτ και, το σημαντικότερο, η διαθεσιμότητα υψηλά ειδικευμένου προσωπικού εργαστηρίου, επιτρέπει τη μείωση του επιπέδου των ψευδών αποτελεσμάτων.

    Προέλευση τυποποιημένο σύνολο για HCV RNA ( "AmplicorTM HCV", "Roche Diagnostic Systems") που κατασκευάζεται το 1993 το χρόνο. Με τα χρόνια, ένα κιτ για την ανίχνευση του RNA του HCV έχουν εξελιχθεί, ο κύριος σκοπός της οποίας ήταν να αυξηθεί η ευαισθησία και την ειδικότητα τους. Κατά το σχεδιασμό ενός «Amplicor TM HCV» χρησιμοποιείται αρκετά πρωτότυπα μεθοδολογικές τεχνικές που επιτρέπουν την ανίχνευση ή άνω των 100 αντίγραφα του HCV RNA ανά ml., Καθώς και για την αντιμετώπιση πιθανών περιπτώσεων μόλυνσης των δειγμάτων και των λύσεων που χρησιμοποιούνται στο σετ. Χρησιμοποιώντας ένζυμο - amperazy και deziksiuridintrifosfata (dUTP) επιτρέπει να καταστρέψει στον πρώτο κύκλο ενισχύσεως προηγούμενες aplikony που θα μπορούσε να συμβεί μόλυνση. Καταστροφή amperazy αργά στον πρώτο κύκλο ενίσχυσης (στους 55 C) δεν επιτρέπει στο ένζυμο να καταστρέψει αμπλικόνια επιλέγεται ως στόχος. Μια σημαντική καινοτομία ήταν η εισαγωγή του εσωτερικού ελέγχου. Το νόημα αυτής της καινοτομίας συνίσταται στην εισαγωγή του δείγματος σε κάθε αλληλουχία τέτοιων ενισχυμένων τμήματος HCV RNA το οποίο στη συνέχεια ανιχνεύεται χρησιμοποιώντας κατάλληλους εκκινητές στην αντίδραση ενίσχυσης με τον ίδιο τρόπο. Η έλλειψη μιας θετικής ανταπόκρισης στην ταυτοποίηση του εσωτερικού ελέγχου υποδεικνύει μια ψευδή αρνητική αντίδραση με την παρουσία HCV RNA στο δείγμα. Diagnosticum επόμενης γενιάς φάρμακο ορίστηκε - «HCV Amplicor 2,0», όταν χρησιμοποιείται ένα όριο ευαισθησίας που έχει 50 μόρια του RNA του HCV.

    Σύστημα του HCV RNA με χρήση «Roche» σύνολα της εταιρείας δεν μπορεί να θεωρηθεί ανεξάρτητα από τα όργανα τους, καθορίζει την υψηλή ποιότητα των δοκιμών. Οι προγραμματιστές της μεθόδου επιδίωξαν να αυτοματοποιήσουν πλήρως όλα τα στάδια της αντίδρασης. Η επιτομή αυτής της ιδέας ήταν ένα σύστημα «COBASAmpliPrepTM», το οποίο επιτρέπει να αυτοματοποιήσει πλήρως τη διαδικασία της εκχύλισης HCV RNA, ενίσχυση και ανίχνευση, μειώνοντας έτσι τον κίνδυνο ψευδών θετικών και ψευδών αρνητικών, ενώ διατηρείται η υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα [41].

    Αλυσιδωτή αντίδραση Ligase ανίχνευσης του RNA BGC (LCR). Η μέθοδος βασίζεται στην ικανότητα του ενζύμου να «ϋΝΑ-εξαρτώμενη DNA λιγάση» βελονιά (Απολίνωσε) τα διαλείμματα φωσφοδιεστέρα δεσμού σε DNA παρουσία των ιόντων ΑΤΡ και Mg2 +. Όπως συμβαίνει με την "κλασική" PCR για την ανίχνευση του HCV RNA, το πρώτο στάδιο του LCR είναι αντίστροφη μεταγραφή για να ληφθεί ένα HCV cDNA. Περαιτέρω, η ϋΝΑ λιγάση δεσμεύει δύο ζεύγη εκκινητών (συμπληρωματικά προς την 5 'μη κωδικοποιημένη περιοχή RNA HCV), τα οποία ενισχύονται περαιτέρω. Η ανίχνευση προϊόντων ενίσχυσης LCR πραγματοποιείται λαμβάνοντας υπόψη την αντίδραση αντιγόνου-αντισώματος. Κάθε ένας από τους δύο εκκινητές είναι επισημασμένος με διαφορετικό απτένιο. Το πρώτο από αυτά συλλαμβάνεται από αντισώματα που προσροφούνται σε μικροσωματίδια. Μετά τη διαδικασία έκπλυσης χρησιμοποιώντας το δεύτερο ζευγάρι των αντισωμάτων επισημασμένων με έναν φθορίζοντα ιχνηθέτη είναι επιλεκτικό αλληλεπίδρασή τους με το απτένιο στο προϊόν ενίσχυσης, που ακολουθείται από αντίδραση του υποστρώματος και στο λογαριασμό φθοριόμετρο.

    Η ευαισθησία αυτής της μεθόδου είναι περίπου 200 αντίγραφα του HCV RNA σε ml, γεγονός που του επιτρέπει να χρησιμοποιηθεί για την επίλυση διαφόρων κλινικών και διαγνωστικών προβλημάτων [42]. Επί του παρόντος, τα διαγνωστικά κιτ για την ανίχνευση του HCV RNA, με βάση το LCR, κατασκευάζονται από την Abbott.

    Νουκλεϊνικά οξέα Ενισχύσεις στη θάλασσα - NASBA -μέθοδος ανίχνευσης του RNA HCV βασίζεται στην ταυτόχρονη δράση των τριών ενζύμων: αντίστροφη πτηνών mieloblastomy ιού μεταγραφάση, ΚΝάση Η και Τ7 RNA πολυμεράση [43]. Σε αντίθεση με την RT PCR, η αντίστροφη μεταγραφή του HCV RNA δεν πραγματοποιείται στο πρώτο στάδιο. Με τη βοήθεια των ενζύμων που χρησιμοποιήθηκαν, μπορούν να ληφθούν περισσότερα από 10 (9) αντίγραφα της θέσης cDNA του HCV μέσα σε 90 λεπτά [44]. Η δυνατότητα διεξαγωγής της αντίδρασης σε χαμηλές θερμοκρασίες (+41 ° C) απλοποιεί σε μεγάλο βαθμό τη λειτουργία και επιτρέπει την εγκατάλειψη του εξοπλισμού που παρέχει κυκλικές αλλαγές στις υψηλές θερμοκρασίες. Τα αποτελέσματα της αντίδρασης λαμβάνονται υπόψη με ηλεκτροχημειοφωταύγεια. Παρά το γεγονός ότι η ευαισθησία του NASBA είναι κοντά στην RT PCR, η μέθοδος δεν χρησιμοποιείται ευρέως για την ανίχνευση HCV RNA. Επί του παρόντος, αναπτύσσεται μια παραλλαγή της μεθόδου που συνδυάζει τις αρχές του NASBA και του "Real-time RT PCR".

    Η μέθοδος της μεσολαβούμενης από μεταγραφή ενίσχυσης (ΤΜΑ) διαφέρει από την PCR και LCR κατά κύριο λόγο από το ότι τα θραύσματα RNA του HCV ενισχύονται άμεσα, αντί του HCV cDNA. Στο αρχικό στάδιο της αντίδρασης, ο εναρκτήρας (Νο. 1) συνδέεται με το HCV RNA και ένα αντίγραφο του μορίου στόχου, cDNA, συντίθεται με τη βοήθεια ενός ενζύμου (αντίστροφη μεταγραφάση). Η αντίστροφη μεταγραφάση, που επίσης έχει τη δραστικότητα της ΚΝάσης-Η, καταστρέφει το ιικό RNA στο RNA-cDNA υβρίδιο. Στη συνέχεια, ένας δεύτερος εκκινητής συνδέεται με το μόριο cDNA, ακολουθούμενο από την ολοκλήρωση του διπλής έλικος ϋΝΑ με αντίστροφη μεταγραφάση. Χρησιμοποιώντας ένα άλλο ένζυμο, η πολυμεράση RNA, η μεταγραφή RNA με cDNA λαμβάνει χώρα, πράγμα που έχει ως αποτέλεσμα το σχηματισμό 100 έως 1000 αντιγράφων του αμπλικονίου του HCV RNA σε έναν μόνο κύκλο αντίδρασης. Ο εκκινητής αρ. 2 συνδέεται με αυτά τα εφαρμοζόμενα RNA με περαιτέρω σύνθεση αντιγράφων cDNA και καταστροφή του μορίου RNA. Η προσθήκη του εκκινητή Νο. 1 στο cDNA που ακολουθείται από την ολοκλήρωση του δίκλωνου ϋΝΑ πυροδοτεί τον επόμενο κύκλο ενίσχυσης. Τα αποτελέσματα της αντίδρασης λαμβάνονται υπόψη στο lumenometer, δεδομένου ότι τα διαμορφωμένα RNA αμπλικόνια αλληλεπιδρούν ειδικά με ανιχνευτές ϋΝΑ σημασμένους με χημειολατανοφόρα.

    Ως πλεονεκτήματα της μεθόδου TMA κατά την ανίχνευση HCV RNA, σημειώνεται:

  • αντίδραση σε χαμηλότερες θερμοκρασίες σε σύγκριση με την PCR.
  • ο σχηματισμός μεγαλύτερου αριθμού αμπλικονίων σε έναν μόνο κύκλο αντίδρασης, ο οποίος μειώνει τον απαιτούμενο χρόνο για την επίτευξη του τελικού αποτελέσματος (30-40 λεπτά) και αυξάνει την ευαισθησία της αντίδρασης (50 αντίγραφα / ml) [45].
  • μειώνοντας τον κίνδυνο μόλυνσης, καθώς το RNA είναι λιγότερο σταθερό από το DNA.

    Συγκριτικές μελέτες για την ανίχνευση του HCV RNA με TMA και άλλες μεθόδους κατέδειξαν υψηλό επίπεδο σύμπτωσης των αποτελεσμάτων [45].

    Ο συνδυασμός των αρχών της υβριδοποίησης και της ενίσχυσης βασίζεται στη μέθοδο ανίχνευσης HCV RNA, που ονομάζεται "Η μέθοδος υβριδοποίησης χρησιμοποιώντας διακλαδισμένους ανιχνευτές ή προσδιορισμό διακλαδισμένου ϋΝΑ (bDNA) [46]. Σε αντίθεση με την PCR σε αυτή τη δοκιμή, η ενίσχυση δεν περιλαμβάνει τα μόρια του HCV cDNA, αλλά του σήματος. Η αντίδραση εκτελέστηκε σε πλάκες 96 φρεατίων, στις οποίες απορροφήθηκαν θραύσματα HCV RNA από 5 'αμετάφραστη ζώνη και γονίδιο πυρήνα RNA HCV. Με επακόλουθη δέσμευση σε ένα συνθετικό διακλαδισμένο μόριο ϋΝΑ και υβριδοποίηση με ένα δείγμα επισημασμένο με αλκαλική φωσφοτάση με έναν ενισχυτή και επακόλουθη ενζυματική αντίδραση, επιτυγχάνεται μια απότομη αύξηση του σήματος. Επί του παρόντος diagnosticums εκεί τρίτης γενιάς της αγοράς διάγνωσης (Bayer 3.0 Hepati-tis C Virus RNA ποσοτικοποίηση μέσω Brna) που έχει μία ευαισθησία για τον εντοπισμό 520 IU / ml (2500 αντίγραφα HCV RNA).

    ΠΟΣΟΤΙΚΗ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΤΟΥ HCV RNA. Για τον υπολογισμό της συγκέντρωσης του HCV RNA χρησιμοποιείται ποσοτική παραλλαγή της PCR. Αρχικά, η συγκέντρωση του RNA του HCV προσπάθησαν να χαρακτηρίσουν τακτικές τιμές, όπως «+», «++», κλπ, οπτικά αντανακλαστική ένταση των ζωνών που λαμβάνονται με ηλεκτροφόρηση των προϊόντων ενισχύσεως, ή μέσω περιοριστικής αραίωσης, δηλαδή, από την παρουσία του θετικού αποτελέσματος στο τελικό σημείο τιτλοδότησης. Δυσκολίες τυποποιήσει όλα τα βήματα της PCR δεν επιτρέπουν να αξιολογηθεί αντικειμενικά η συγκέντρωση του RNA του HCV, η οποία οδηγεί σε σημαντικά σφάλματα ερμηνεία των αποτελεσμάτων.

    Επί του παρόντος, τα αποτελέσματα της έρευνας που εκφράζεται σε ποσοτικούς όρους: τον αριθμό των αντιγράφων του RNA του HCV που περιέχονται σε 1 ml, σε απόλυτους όρους, ή logarifmeticheskom (log 10).. Με βάση το γεγονός ότι η συγκέντρωση του RNA του HCV ανιχνεύθηκε αντανακλά τον αριθμό των σωματιδίων του ιού, το ποσοστό αυτό αναφέρεται ως «ισοδύναμο ιό (eq)», με την προσθήκη του προθέματος k (κιλό χιλ) ή M (ppm). Ένας άλλος τρόπος για να εκφραστεί ο αριθμός των σωματιδίων του ιού είναι τα ισοδύναμα βάρους τους. Για παράδειγμα, σε γραμμάρια ή πικογράμματα (1 pg αντιστοιχεί σε περίπου 1 εκατομμύριο ισοδύναμα). Η ποικιλία των εφαρμοζόμενων ποσοτήτων καθιστά δύσκολη την ερμηνεία των αποτελεσμάτων που επιτυγχάνονται στα διάφορα εργαστήρια. Ως εκ τούτου, η ΠΟΥ για τα Βιολογικά Τυποποίησης έχει κάνει «ένα διεθνές υλικό αναφοράς» που περιέχει HCV RNA (liofilnovysushennaya ορού αίματος που περιέχουν HCV γονοτύπου RNA 1), η συγκέντρωση του οποίου εκφράζεται σε Διεθνείς Μονάδες (IU / mL) [47]. Ειδικοί παράγοντες μας επιτρέπουν να υπολογίσουμε εκ νέου τις ληφθείσες τιμές συγκέντρωσης σε διεθνείς μονάδες.

    Σχεδόν όλες οι παραλλαγές της PCR χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης του HCV RNA. Όπου η διαγνωστική σκευάσματα να πληρούν μια σειρά ειδικών απαιτήσεων, η πιο σημαντική από τις οποίες είναι ένα αυστηρό αποτελέσματα γραμμικότητα, δηλαδή αύξηση του σήματος της ανιχνευθείσας αντίδρασης με αύξηση της συγκέντρωσης HCV RNA στο δείγμα δοκιμής. Η χρήση των εσωτερικών προτύπων με διαφορετικές περιεκτικότητες σε HCV RNA αποφεύγει πολλά μεθοδολογικά λάθη, που μπορεί να επηρεάσουν το τελικό αποτέλεσμα της αντίδρασης [28]. Ευαισθησία εφαρμοστεί διαγνωστικά (Amplicor HCV Monitor v2.0? LCx HCV RNA ποσοτική δοκιμασία) μπορεί να ανιχνεύσει HCV RNA ξεκινώντας από 50 αντίγραφα ανά ml [48.49], η οποία είναι ιδιαίτερα σημαντική για την πρόβλεψη της αποτελεσματικότητας της αντι-ιικής θεραπείας που επιλέγεται.

    PCR σε πραγματικό χρόνο ("Real-time RT PCR") -μία από τις πιο ελπιδοφόρες επιλογές για μια ποσοτική μέθοδο ανίχνευσης HCV RNA. Η μέθοδος και το υλικό της αναπτύσσονται από ειδικούς της Roche και Percin Elmer. Η αρχή της μεθόδου είναι η ικανότητα να υδρολύονται αλληλουχίες cDNA στην κατεύθυνση 5 '- 3'. Ένας ειδικός ανιχνευτής, επισημασμένος με δύο φθορίζουσες βαφές με στενή απορρόφηση και μέγιστο φθορισμού, χρησιμοποιείται στην αντίδραση. Παρουσία προϊόντων ενίσχυσης, η Tag-πολυμεράση διασπά τον ανιχνευτή, ο οποίος εμποδίζει τη μεταφορά ενέργειας από ένα μόριο της χρωστικής ουσίας στην άλλη και επομένως εμποδίζει την απελευθέρωση ενός κβαντικού φωτός. Μια ειδική συσκευή λαμβάνει υπόψη την αντίδραση και τη μαθηματική μοντελοποίηση της κινητικής φθορισμού σε κάθε στάδιο της αντίδρασης, η οποία επιτρέπει τη λήψη πληροφοριών σχετικά με την αρχική συγκέντρωση του HCV RNA.

    Ένα διακριτικό χαρακτηριστικό της «PCR σε πραγματικό χρόνο» είναι η ικανότητα να λαμβάνεται πληροφορίες σχετικά με την παρουσία HCV RNA απευθείας στη διαδικασία της αντίδρασης, γεγονός που επιτρέπει τη μείωση του χρόνου ανάλυσης σε συνδυασμό με την υψηλή ευαισθησία και τη γραμμικότητα των ληφθέντων αποτελεσμάτων [50]. Σύμφωνα με την Tatiana Yashina και συν-συγγραφείς, αυτή η μέθοδος επιτρέπει την ανίχνευση από 200 αντίγραφα HCV RNA σε ml. [51].

    ΜΕΘΟΔΟΙ ΓΟΝΟΤΥΠΩΣΗΣ RNA VHC. Ο προσδιορισμός της σύνδεσης του HCV με έναν συγκεκριμένο γονότυπο και υποτύπο έχει βρει την εφαρμογή του για την επίλυση όχι μόνο επιστημονικών αλλά και πρακτικών ζητημάτων. Για παράδειγμα: αναζήτηση της πηγής μόλυνσης κατά τη διάρκεια εμφάνισης ηπατίτιδας C ή πρόβλεψη της αποτελεσματικότητας της θεραπείας που χρησιμοποιήθηκε.

    Το «χρυσό πρότυπο» γονοτυπική HCV - άμεσο προσδιορισμό της πρωτοταγούς δομής του RNA του HCV και την επακόλουθη φυλογενετική ανάλυση του [52], το οποίο επιτρέπει χαρακτηρίζουν σαφώς την απομόνωμα του ιού. Μπορείτε να λάβετε αυτές τις πληροφορίες χρησιμοποιώντας τις ακόλουθες επιλογές αλληλουχίας:

  • άμεση?
  • με βάση την κλασσική κλωνοποίηση.
  • αλληλουχία των προϊόντων της αντίδρασης PCR (Limited-sequencing).
    Παρά την ακρίβεια του αποτελέσματος, η μέθοδος άμεσης αλληλουχίας δεν χρησιμοποιείται στην πρακτική υγειονομική περίθαλψη εξαιτίας των τεχνικών δυσκολιών που συνεπάγεται η διεξαγωγή της έρευνας και του υψηλού κόστους της εργασίας. Ταυτόχρονα, η διαθεσιμότητα πληροφοριών σχετικά με την αρχική δομή του HCV RNA είναι η μέθοδος αναφοράς γονοτύπου και η διαθεσιμότητα των αυτόματων συσκευών προσδιορισμού αλληλουχίας απλοποιεί τα αποτελέσματα.

    Επί του παρόντος, στις περισσότερες περιπτώσεις, μέθοδοι βασιζόμενες στη χρήση PCR με ειδικούς για τον τύπο εκκινητές χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό του γονότυπου του HCV RNA. Η πρώτη γονότυπη του HCV RNA πραγματοποιήθηκε από τον Ν. Okamoto et al. Το 1992 με RT-PCR [53], που περιλαμβάνει δύο βήματα ενίσχυσης. Η πρώτη από αυτές διεξήχθη με γενικούς εκκινητές για όλους τους γονοτύπους του HCV, ο δεύτερος με ένα μείγμα ειδικών για τον τύπο εκκινητών για να ληφθούν συγκεκριμένα προϊόντα ενίσχυσης διαφορετικών μηκών. Η παρουσία ενός συγκεκριμένου γονότυπου κρίθηκε από το μέγεθος του ενισχυμένου προϊόντος. Ως εκκινητές χρησιμοποιούνται ειδικοί ανιχνευτές τύπου, οι πληροφορίες για τις οποίες βρίσκονται στις περιοχές 5'UTR, Core ή NS5 του RNKVS [54].

    Η υβριδοποίηση των ενισχυμένων προϊόντων με το γονίδιο-ειδικούς ανιχνευτές προσροφημένο (από το 5 «αμετάφραστη περιοχή του HCV RNA), και προσροφήθηκε επί μεμβράνης νιτροκυτταρίνης, βρίσκεται στη βάση της δοκιμής - συμβολίζεται“ΙΝΝΟ-ϋΡΑ του HCV, ΙΝΝΟ-ΓΕΝΕΤΙΚΗΣ”[55]. Αρχικά με τη βοήθεια αυτού του τεστ ήταν δυνατή η τυπικοποίηση των γονότυπων: la; lb. 2a; 2b · 3α; 3b. 4 και 5α. Στη συνέχεια, η δοκιμή-σύστημα 2ης γενιάς «ΙΝΝΟ-ϋΡΑ του HCV II, Innogenetics» επιτρέπουν να διακρίνουν όλες τις γονοτύπων 6 και περαιτέρω 2γ? 2δ. 2i; 3c. 4a-h; 6α και 10α. [56]

    Το μεθοδολογικό οπλοστάσιο της γονότυπης του HCV δεν περιορίζεται στις παραπάνω μεθόδους και περιλαμβάνει μια ποικιλία μεθόδων:

  • γονοτυπία με βάση την ανάλυση των προφίλ περιορισμού των ενισχυμένων προϊόντων (RFLP). Τα προϊόντα ενίσχυσης των θραυσμάτων HCV RNA (5'UTR-περιοχή ή NS5 HCV RNA περιοχή) χωνεύονται με ένζυμα περιορισμού. Τα θραύσματα που σχηματίζονται ποικίλουν σε μήκος, ανάλογα με τις θέσεις περιορισμού εντός των οποίων διασπώνται. Τα αποτελέσματα της ηλεκτροφόρησης και η σύγκρισή τους καθιστούν δυνατή την ταυτοποίηση του HCV γονότυπου στο δείγμα δοκιμής [57]. Η σύγκριση των αποτελεσμάτων της γονότυπης χρησιμοποιώντας τη μέθοδο PCR-RFLP με δεδομένα αλληλουχίας έδειξε υψηλό επίπεδο σύμπτωσης των αποτελεσμάτων - 95% [58].
  • γονοτυποποίηση με βάση τη μέθοδο SSCP (αξιολόγηση του διαμορφωτικού πολυμορφισμού μονόκλωνων θραυσμάτων DNA). Η μη-μεταφρασμένη περιοχή 5'-HCV RNA, η οποία έχει ένα ελάχιστο σύνολο νουκλεοτιδικών παραλλαγών που διακρίνουν γονοτύπους ο ένας από τον άλλο, επελέγη ως αντικείμενο της μελέτης. Αυτό το γεγονός καθορίζει τη δυνατότητα εφαρμογής κοινών εκκινητών για τον προσδιορισμό του γονότυπου [59].

    ΣΕΡΟΠΟΙΗΣΗ Αντι-HCV Η έρευνα αυτή κατέστη δυνατή χάρη P.Simmonds et αϊ, να διαπιστωθεί η παρουσία των αντισωμάτων που κατευθύνονται προς επιτόπους genotipspetsifichnym ποιες πληροφορίες κωδικοποιούνται NS4 του HCV RNA ζώνης [60]. Με diagnosticum για ELISA κατασκευάστηκε με βάση συνθετικών πεπτιδίων, είναι σε θέση να διαφοροποιήσουν περιπτώσεις ηπατίτιδας C, που προκαλούνται από ιούς 1, 2 και 3 γονότυπο (89% αντιστοιχία με τα αποτελέσματα της γονοτύπησης). Ανάπτυξη testsistem χρησιμοποιώντας συνθετικά και ανασυνδυασμένα αντιγόνα που κωδικοποιούνται από την NS4 και Πυρήνα ζώνες RNA του HCV ενισχυμένες της λίστας παραλλαγών τυποποιήσιμο ιού, και υποτύπους παρουσία κριτής (1α, lb, 2a, 2b, Πάνω, και 4α) [61,62]. Επί του παρόντος η εμπορική απελευθέρωση των διαγνωστικών παρασκευασμάτων για τον προσδιορισμό του οροτύπου στην πραγματοποίηση της επιτόπου ELISA - «NA Mureh 1-6 Οροτυπική δοκιμασία, Murex Diagnostics», και στην ενσωμάτωση «ανοσοστύπωμα» - RIBA HCV Δοκιμασία Οροτυπική, Chiron Diagnostics. Τα συγκριτικά δεδομένα του προσδιορισμού των οροτύπων και του γονοτύπου του HCV RNA κατέδειξαν υψηλό επίπεδο σύμπτωσης των αποτελεσμάτων, φθάνοντας το 95% [62].

    Ο οροτύπος του αντι-ΗΟν σε σύγκριση με τον προσδιορισμό του γονότυπου του HCV RNA έχει τέτοια πλεονεκτήματα όπως η απλότητα της αντίδρασης και το χαμηλότερο κόστος. Ταυτόχρονα, αυτή η μέθοδος δεν μπορεί σε καμία περίπτωση να αντικαταστήσει τον προσδιορισμό του γονότυπου. Τα αποτελέσματα του προσδιορισμού του οροτύπου του αντι-ΗΟν μαρτυρούν τον τύπο αντι-ΗΟν στην τρέχουσα ή προηγουμένως μεταδιδόμενη μόλυνση. Σε ορισμένες περιπτώσεις (συχνότερα σε ασθενείς με αιμορροφιλία) καταγράφεται ταυτόχρονη ανίχνευση αντι-HCV διαφόρων υποτύπων, γεγονός που μπορεί να υποδεικνύει πολλαπλή μόλυνση με διάφορους υποτύπους και γονότυπους του HCV [63]. Επιπλέον, σε ασθενείς με ηπατίτιδα C στο υπόβαθρο μιας έντονης κατάστασης ανοσοανεπάρκειας, το RNA μπορεί να είναι ο μόνος δείκτης, ο οποίος καθιστά αδύνατη την εκτέλεση οροτύπων.

    ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΚΑΙ ΠΑΡΑΔΟΣΗ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ ΤΗΣ ΔΟΚΙΜΗΣ ΤΩΝ ΣΕΡΟΛΟΓΙΚΩΝ ΣΗΜΑΤΩΝ ΤΗΣ ΕΠΙΒΛΑΒΗΣ ΤΟΥ HCV. Ένα ευρύ φάσμα των ορολογικών δεικτών της τρέχουσας ή προηγούμενης μόλυνσης HCV, καθώς και σύγχρονες μεθοδολογικό πλαίσιο μπορεί να λύσει πολλά προβλήματα στην εργαστηριακή διάγνωση και την πρόληψη της ηπατίτιδας C. Ο Πίνακας 2 δείχνει τους δείκτες αριθμός ορολογικών της μόλυνσης με HCV και τους σημαντικότερους τομείς των δοκιμών τους.

    Πίνακας 2
    Διαγνωστική σημασία των δεικτών σημερινής ή προηγούμενης μόλυνσης από τον ιό HCV

    Έλεγχος
    στην υπηρεσία
    αίμα

    Επιβεβαίωση
    το
    αποτέλεσμα
    + αντι-HCV

    Ένα από τα κύρια καθήκοντα της εργαστηριακής διάγνωσης της ηπατίτιδας C είναι τη διάγνωση και τον διαχωρισμό της οξείας από τη χρόνια ηπατίτιδα C. με την ταυτοποίηση ορολογικών δεικτών μόλυνσης. Όπως και με άλλη οξεία ιογενή ηπατίτιδα, οι ορολογικοί δείκτες της HCV λοίμωξης εμφανίζονται σταθερά και εξαφανίζονται κατά τη διάρκεια της μόλυνσης και της διαδικασίας ανάκτησης (Εικόνα 2).

    Το HCV RNA μπορεί να ανιχνευθεί την 7η-21η ημέρα μετά τη μόλυνση με HCV και αντι-HCV την ημέρα 20 έως 150 (κατά μέσο όρο, την 50η ημέρα) [64]. Το φάσμα του αντι-HCV μπορεί να διαφέρει ανάλογα με την περίοδο οξείας ηπατίτιδας. Πιστεύεται ότι ο πρώτος για την ανίχνευση αντισωμάτων που κωδικοποιούνται από τον πυρήνα και NS5 από την περιοχή RNA του HCV. Η αντι-HCV σε πρωτεΐνες που κωδικοποιούνται από τη ζώνη NS4 δεν υπάρχει στην οξεία φάση της ηπατίτιδας C [65]. Μια συγκριτική μελέτη του επιπέδου των συγκεντρώσεων αντι-HCV, το φάσμα των αντι-HCV και HCV RNA σε ασθενείς με οξεία και χρόνια ηπατίτιδα έδειξε κάποιες διαφορές [66]. Κατά τη γνώμη μας, αυτές οι διαφορές μπορούν να συσχετιστούν με τα μεμονωμένα χαρακτηριστικά της μολυσματικής διαδικασίας, γεγονός που μειώνει τη διαγνωστική τους αξία.

    Το Σχ. 2. Οξεία ηπατίτιδα C

    Κατ 'αναλογία με την εργαστηριακή διάγνωση της ηπατίτιδας Α και Β αναμένεται για αντισώματα κατά του HCV IgM κατηγορίας θα είναι τόσο μεγάλη όσο η διαγνωστική αξία των IgM αντι-ΗΑν και IgM αντι-HBc. Ωστόσο, αυτά δοκιμή ορούς από ασθενείς με οξεία και χρόνια ηπατίτιδα C παρουσία των IgM αντι-HCV δείχνουν συχνές ταυτοποίησή τους μεταξύ αυτών των ασθενών - 50 έως 93% και 50-70%, αντίστοιχα [67,68], αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι η ανίχνευση των IgM αντι -HCV δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως δείκτης οξείας μόλυνσης από HCV.

    Η απουσία ενός δείκτη που ισχυρίζεται ότι είναι το "χρυσό" πρότυπο της οξείας ηπατίτιδας C καθορίζει την ανάγκη για μια συνολική αξιολόγηση των αποτελεσμάτων που προκύπτουν βάσει της δυναμικής παρατήρησης του ασθενούς.

    Ένας εξίσου σημαντικός τομέας χρήσης ιδιαίτερα ευαίσθητων μεθόδων για τη δοκιμή του HCV RNA - μείωση του κινδύνου ηπατίτιδας C μετά τη μετάγγιση. Η ανάγκη για τέτοια έργα καθορίζεται από την παρουσία της φάσης "παραθύρου", δηλ. μεταξύ της πρώτης ανίχνευσης HCV RNA και της εμφάνισης αντι-HCV, καθώς και της ύπαρξης αιμοδοτών (ασθενών με χρόνια ηπατίτιδα C) που έχουν HCV RNA απουσία αντι-HCV. Το σημερινό σύστημα παρακολούθησης αιμοδοσίας για τον HCV περιλαμβάνει μόνο δοκιμασίες αντι-HCV, ο κίνδυνος να συρρικνωθεί η ηπατίτιδα C παραμένει. Συνεπώς, είναι θεμιτό να εγείρουμε το ζήτημα των εξετάσεων αίματος για την παρουσία HCV RNA με σύγχρονες μεθόδους (Οι μέθοδοι NAT είναι μια "δοκιμή ενίσχυσης νουκλεϊκού οξέος"). Ο παράγοντας που περιορίζει αυτή την εργασία είναι η υψηλή τιμή της έρευνας. Για να μειωθεί το κόστος, συνιστάται η εξέταση των ομάδων ορού αίματος (από 8 έως 96 δείγματα) με την επακόλουθη αναζήτηση θετικού δείγματος στην περίπτωση ανίχνευσης HCV RNA στην ομάδα των ορών. Λαμβάνοντας υπόψη τον παράγοντα αραίωσης του επιθυμητού RNA του HCV όταν οι οροί αίματος διογκωθούν, το ζήτημα της χρήσης των πλέον ευαίσθητων μεθόδων ανίχνευσης έχει μεγάλη σημασία. Πιστεύεται ότι η χρήση διαγνωστικών κιτ για το NAT - με ευαισθησία 50-100 IU / mL μπορεί να μειώσει σημαντικά τον κίνδυνο ηπατίτιδας C μετά τη μετάγγιση.

    Αναμφισβήτητα, ο κατάλογος των ζητημάτων που μπορούν να επιλυθούν κατά τη δοκιμή ολόκληρου του φάσματος των δεικτών μόλυνσης από HCV δεν περιορίζεται σε αυτούς τους δύο τομείς. Η διαθεσιμότητα σύγχρονων μεθόδων δοκιμών σε συνδυασμό με τη γνώση των δυνατοτήτων τους, ανοίγει ευρείες προοπτικές επιστημονικής και εφαρμοσμένης έρευνας για την ηπατίτιδα C.


  • Σχετικά Άρθρα Ηπατίτιδα